导读:本文包含了乳腺生物反应器论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乳腺,转基因,生物反应器,动物,基因,生物制药,蛋白。
乳腺生物反应器论文文献综述
梁振鑫,刘芳,张玮,刘庆友,李力[1]（2019）在《抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证》一文中研究指出目的:构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体并制备和验证抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型。方法:利用PCR法扩增出抗人p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L,然后分别将嵌合抗体重链基因H和嵌合抗体轻链基因L连接到乳腺特异性表达质粒pBC1,从而构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L。分别将抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26乳腺特异表达载体pBC1-H和pBC1-L线性化,然后使用原核显微共注射法获得8只转基因FVB小鼠,通过鼠尾直接PCR鉴定其转基因阳性。通过RT-PCR、荧光定量PCR鉴定转基因小鼠乳腺组织中抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达。使用小鼠乳汁采集器收集其乳汁并通过Western blot和夹心ELISA等实验鉴定抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26是否获得表达。结果:经测序验证,抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的嵌合重链基因H和嵌合轻链基因L分别与乳腺特异表达质粒pBC1正确正向连接。鼠尾直接PCR结果显示所获8只转基因FVB小鼠均为转基因双阳性小鼠,且抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L在它们的后代中稳定遗传,它们的后代中转基因小鼠双阳性率约为30%; RT-PCR和荧光定量PCR的结果显示,转基因双阳性小鼠及其双阳性后代的乳腺组织中存在抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达; Western blot和ELISA等实验结果显示,转基因双阳性小鼠乳汁中存在抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的蛋白质表达,而且抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26与羊抗人κ链抗体和羊抗人Ig G Fc-HRP抗体均能特异性结合。结论:成功构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L和制备了抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型,为今后抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因牛乳腺生物反应器的研究奠定了理论和技术基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年08期）
曾凡一,薛燕[2]（2018）在《动物乳腺生物反应器 一种神奇的制药方式》一文中研究指出人吃五谷杂粮,难免会生病,因此我们的生活离不开医药产业。纵观人类药物发展的历史,经历了叁个不同的发展阶段。最初是天然药物,主要是利用中草药或提取中草药中的活性成分加工成中成药,用于疾病的治疗和预防。在这方面,我国中草药为世界医药的发展做出了巨大贡献,拥有绝对的发言权。随着西方科技的发展,化学药物渐成主流,药物合成逐渐兴起,与第一代药物相比,其活性更高、更有效。现在我们广泛使用的各类抗生素大部分属于这一类药物。20世(本文来源于《人与生物圈》期刊2018年06期）
谢晶莹,张勇,冯若飞[3]（2018）在《乳腺生物反应器在生物制药领域的研究进展》一文中研究指出乳腺生物反应器是利用转基因动物生产功能蛋白质的技术.这项技术开创了基因工程制药的新途径.而其具有的低成本、高质量,稳定的生物学活性、较短的生产周期、较高的经济效益等一系列研发特点,使得这一生产方式成为医药产业的主要手段.(本文来源于《西北民族大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
朱晓露,浦轩[4]（2018）在《浦口将建转基因“动物制药工厂”》一文中研究指出本报讯（记者 朱晓露 通讯员 浦轩） 利用转基因技术，让牛羊等动物带上特定的人类基因，使它们的乳汁中富含可以治病救人的蛋白药物。记者昨日了解到，浦口开发区将在“动物身上建药厂”，全省首个乳腺生物反应器制药项目暨转基因动物药物研究院项目正式落户。(本文来源于《南京日报》期刊2018-03-05）
王宇航[5]（2016）在《利用牛乳腺生物反应器表达重组人胆盐激活酯酶的研究》一文中研究指出胆盐激活酯酶(bile salt-stimulated lipase,BSSL)是一种脂肪酶,主要在胰腺和泌乳期的乳腺组织中表达。BSSL具有广泛的底物水解活性,可以水解甘油酯、胆固醇酯、脂溶性维生素、鞘磷脂、糖脂和神经酰胺等。母乳来源的BSSL是对婴儿尤其是早产儿胰腺脂肪酶分泌不足的必要补充,对奶脂消化吸收具有重要作用。而BSSL不存在于牛奶和配方奶粉中,巴氏灭菌后人奶中的BSSL也会失活,因此额外的BSSL补充有益于改善婴儿奶脂的吸收,特别是针对由于各种原因不能获得新鲜母乳的婴儿。BSSL也可以被用于改善其他由于胰腺功能不全导致的脂肪消化障碍问题,因此该蛋白具有极高的研究和商业应用价值。在本研究中,我们构建了人源BSSL基因的高效表达载体,在小鼠模型上进行了载体效率的验证,并成功制备了乳腺内表达重组人胆盐激活酯酶(recombinant human bile salt-stimulated lipase,rhBSSL)的转基因牛。本研究成功构建了 rhBSSL的表达载体pBAC-hLF-hBSSL-Neo。该载体是以本实验室之前验证过的可以高效表达外源蛋白的人乳铁蛋白基因(hLF)BAC(bacterial artificial chromosome)序列为调控元件,载体包含乳铁蛋白基因91 kb 5'调控区,31 kb 3'调控区和9.8 kb hBSSL基因组DNA以及一个真核细胞抗性筛选标记Neo基因。原核注射重组BAC载体制备了 rhBSSL转基因小鼠,并在小鼠模型上对表达载体的效率进行了验证。结果表明:rhBSSL可以在小鼠乳腺组织中特异性表达,最高表达水平可达843.6 μg/ml,对应的活性为1023272.2 mU/mL。转基因母鼠代养幼鼠实验表明,rhBSSL可以促进幼鼠奶脂的利用,减少粪便中脂肪的含量。本研究利用在小鼠模型上验证的重组BAC载体转染牛成纤维细胞,并通过体细胞核移植技术制备了转基因克隆牛,成功获得了一头在乳腺组织中高表达rhBSSL的转基因牛。对转基因牛奶中rhBSSL蛋白表达水平进行定量分析,发现在初乳中rhBSSL的表达量约8.89 mg/ml,在常乳中rhBSSL的表达量约5.79 mg/ml,均显着高于之前报道的转基因羊奶中3 mg/ml的表达水平。本研究进一步建立了利用肝素凝胶色谱和凝胶过滤色谱从转基因牛奶中纯化rhBSSL的方法。利用高效液相色谱法对纯化的rhBSSL进行纯度分析,表明其纯度可达96.7%。生理生化分析表明本实验所纯化的rhBSSL与天然人奶BSSL具有相似的活性和等电点,相同的氨基端氨基酸序列,而且两者在胆盐依赖性、pH稳定性、热稳定性和蛋白酶稳定性方面没有显着性差异。综上所述,本研究构建了 rhBSSL乳腺特异性表达载体pBAC-hLF-hBSSL-Neo,成功制备了乳腺中高效表达具有天然生物活性的rhBSSL的转基因牛,并建立了从牛奶中纯化rhBSSL的方法。本研究为rhBSSL未来的商业化的开发和应用奠定了基础。(本文来源于《中国农业大学》期刊2016-11-01）
葛恒涛[6]（2016）在《利用山羊乳腺生物反应器制备具有免疫原性病毒结构蛋白的研究》一文中研究指出畜禽传染病是对养殖业危害严重的一类疾病,不仅对社会造成巨大的经济损失,也给人类健康带来巨大威胁。疫苗接种是防控此类疫病的有效措施,传统的灭活疫苗和弱毒疫苗在防治和消除传染病的流行中发挥了重要作用,但都存在一定安全隐患。亚单位疫苗是致病菌或病毒的具有免疫原性的表面结构蛋白,能诱发机体产生特异性免疫,且具有更高的安全性。哺乳动物乳腺为高效的蛋白合成和分泌器官,是制备具有复杂结构蛋白理想的生物反应器。本研究利用TALE切口酶介导的基因打靶将口蹄疫病毒(FMDV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)具有免疫原性的结构蛋白基因定点整合至山羊β-乳球蛋白(BLG)基因座,并通过体细胞克隆生产转基因动物;转基因动物乳中分离纯化得到的的重组蛋白(A-FMDV VP1和CSFV E2)用于小鼠免疫试验,结果表明乳腺表达的重组蛋白具有较好的免疫原性,能够诱发机体特异性体液免疫反应。本研究旨在建立一种利用动物乳腺生物反应器生产具有免疫原性病毒结构蛋白的技术体系,为利用乳腺生物反应器制备亚单位疫苗奠定研究基础。研究内容如下:1.靶向山羊BLG基因第2外显子TALE切口酶表达载体的构建使用“TAL Effector-Nucleotide Targeter(TALE-NT)2.0”筛选针对山羊BLG基因第2外显子(BLG exon2)序列的TALENs靶位点,并利用单元模块组装法构建TALENs表达载体pTALEN-E2-L和pTALEN-E2-R;构建包含TALENs靶位点序列和其同源的牛BLG基因序列的双荧光报告载体pRFP-GBE2-GFP和pRFP-BBE2-GFP;将以上报告载体分别与TALENs共转HEK293细胞,荧光表达结果显示靶向BLG exon2的TALENs可对其靶序列进行特异性剪切;使用单碱基突变法将TALEN表达载体pTALEN-E2-L FokⅠ450位氨基酸残基Asp突变为Ala得到pTALEN-E2-Lm,即将TALENs突变为TALE切口酶。2.EGFP基因在山羊BLG基因座不同整合位点的表达水平比较根据靶向山羊BLG exon1的TALENs(本实验室保存)和靶向山羊BLG exon2的TALENs的靶位点序列设计相应的基因打靶载体;PCR扩增同源臂DNA片段、EGFP基因片段以及bGHpA片段,以ploxpⅡ为载体骨架分别构建针对BLG exon1和BLG exon2的EGFP基因打靶载体pBTE1-EGFP和pBTE2-EGFP。使用打靶载体与相对应的TALENs表达载体共转染山羊乳腺上皮细胞(GMECs),经G418筛选和PCR鉴定分别得到EGFP基因定点整合至BLG exon1/exon2的细胞克隆12和14个;打靶阳性细胞克隆经激素诱导后,使用荧光定量PCR和Western blot在EGFP基因定点整合至BLG exon1/2的GMECs中均可检测到EGFP的表达,且整合至BLG exon2的细胞中EGFP表达水平较高。结果表明,定点整合至山羊BLG基因座的外源基因可以在内源性BLG基因调控序列的指导下表达并分泌到体外,且BLG第1内含子的存在对外源基因的表达有一定的促进作用。3.TALE切口酶介导的病毒结构蛋白基因在山羊体细胞中的定点整合及转基因克隆山羊的生产分别以质粒为模板PCR扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5-M基因,猪瘟病毒(CSFV)E0、E2基因和牛A型和O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因序列,将扩增片段3’端连接bGHpA终止信号序列后,构建靶向BLG exon2的置换型基因打靶载体pBTE2-GP5-M、pBTE2-E0、pBTE2-E2、pBTE2-VP1_A、pBTE2-VP1_O。以pTALENE2-Lm和pTALEN-E2-R为模板体外转录制备编码TALE切口酶的mRNAs;并将其分别与以上各基因打靶载体共同电穿孔转染山羊胎儿成纤维细胞,经G418正向筛选、GANC负向筛选、PCR及测序鉴定分别得到GP5-M、E0、E2、VP1_A和VP1_O基因序列定点整合至BLG exon2的细胞克隆。以基因打靶阳性细胞为核供体,经体细胞核移植及胚胎移植共生产克隆山羊7只,经PCR、测序鉴定及Southern blot进行基因型分析,其中PRRSV GP5-M基因打靶山羊2只;CSFV E0基因打靶山羊2只;CSFV E2基因打靶山羊1只;A型FMDV VP1基因打靶山羊2只。以上结果表明,TALE切口酶介导的基因打靶技术可用于制备基因组中定点整合外源基因的山羊体细胞。4.基因打靶羊乳汁中重组蛋白的检测及其免疫原性验证对A型FMDV VP1和CSFV E2基因打靶奶山羊进行激素诱导泌乳,收集乳汁经脱脂和去除酪蛋白处理后得到乳清,将乳清样品SDS-PAGE之后进行考马斯亮蓝染色、Western blot及ELISA检测重组VP1(rVP1)和重组E2(rE2)的表达效率,其中乳清中rVP1和rE2浓度分别为1.02 mg/mL和1.46 mg/mL。乳清中的rVP1和rE2经Ni离子螯合亲和层析纯化,添加佐剂后分别免疫Balb/c小鼠,免疫后第4周可在小鼠血清中分别检测到FMDV和CSFV特异性抗体。以上结果表明,定点整合至山羊BLG exon2的外源基因可以利用内源性BLG调控序列在动物体内进行高效的表达分泌,且表达的重组病毒结构蛋白具有良好的免疫原性,能够诱发动物机体特异性体液免疫反应。综上所述,本研究利用TALE切口酶介导的同源重组将病毒结构蛋白基因定点整合至山羊BLG基因第2外显子,获得的转基因动物乳腺中能够分泌具有免疫原性的重组蛋白,为利用转基因动物乳腺生物反应器制备亚单位疫苗的研究奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01）
毛婕[7]（2016）在《乳腺生物反应器在生物制药领域研究进展》一文中研究指出文章综述了乳腺生物反应器的原理、应用、优点、问题,并对其发展方向进行了展望。利用乳腺生物反应器获得的药用蛋白在生物制药工业中具有广阔的应用前景。然而,目前使用的转基因技术由于其固有的局限性,未能使乳腺生物反应器的研究取得了很大的进步。基因打靶和核移植技术已成为乳腺生物反应器的发展注入了新的活力。本文总结了乳腺生物反应器的优点与问题,同时说明乳腺生物反应器在生物制药研究领域的必要性。(本文来源于《西部皮革》期刊2016年06期）
梁振鑫,尹富强,刘庆友,李力[8]（2015）在《转基因动物乳腺生物反应器相关技术及研究进展》一文中研究指出转基因动物乳腺生产人类重组蛋白人血清白蛋白(h SA)、人纤维蛋白原(h FIB)、人蛋白C(h PC)、人凝血因子(h F-Ⅷ)和(h F-Ⅸ)等具有较高市场潜力,使其在医学领域获得广泛应用。对转基因动物乳腺生物反应器的优势、目的基因选择、载体构建、基因工程技术、重组蛋白在肿瘤治疗上的应用、当前困境和未来前景等方面进行较为全面的综述,以期能有助于转基因动物生物反应器的研究。此外较详细地探讨了利用CRISPR-Cas基因打靶技术生产高表达量的人类重组蛋白的可能性。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年02期）
张斯敏,高越,方彧聃,张金脉,张敬之[9]（2014）在《乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建》一文中研究指出乳腺生物反应器具有广阔的开发前景,而提高目的基因的表达量是该领域一个重要的研究课题。因此,选用强的非特异性启动子pCAG,而不是乳腺特异性启动子来实现高效表达;通过Cre/loxP系统和山羊β-乳球蛋白启动区(pBLG)表达Cre重组酶来实现载体的自删除以达到乳腺特异表达的目的。方法:构建含PolyA终止信号的Cre乳腺特异表达元件PolyA-pBLG-cre,插至强启动子pCAG驱动的报告基因lacZ表达载体中,构建成乳腺特异表达载体pCBCZ(pCAG-loxPPolyA-pBLG-cre-loxP-lacZ)。转染细胞实验结果:PCR鉴定确认pCBCZ载体在小鼠乳腺上皮细胞(HC11)中发生Cre-loxP同源重组。X-Gal染色表明载体能驱动lacZ在HC11细胞中高效表达β-半乳糖苷酶,而在NIH 3T3细胞中仅少量表达。结论:构建的pCBCZ载体能高效驱动外源基因在乳腺细胞中表达,且具有较好的乳腺特异性,为研发乳腺生物反应器表达载体提供新的方法。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2014年07期）
包梦醒,吴新[10]（2014）在《乳腺生物反应器研究进展》一文中研究指出乳腺生物反应器是一种新型的利用转基因动物生产药用蛋白的方式,开创了基因工程制药的新途径,具有极高的研究价值和广阔的市场前景。本文主要从乳腺生物反应器的概念、原理、特点、主要的转基因技术及问题等方面进行综述,以期为乳腺生物反应器的相关研究提供参考。(本文来源于《中国牛业科学》期刊2014年04期）
乳腺生物反应器论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
人吃五谷杂粮,难免会生病,因此我们的生活离不开医药产业。纵观人类药物发展的历史,经历了叁个不同的发展阶段。最初是天然药物,主要是利用中草药或提取中草药中的活性成分加工成中成药,用于疾病的治疗和预防。在这方面,我国中草药为世界医药的发展做出了巨大贡献,拥有绝对的发言权。随着西方科技的发展,化学药物渐成主流,药物合成逐渐兴起,与第一代药物相比,其活性更高、更有效。现在我们广泛使用的各类抗生素大部分属于这一类药物。20世
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乳腺生物反应器论文参考文献
[1].梁振鑫,刘芳,张玮,刘庆友,李力.抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证[J].中国生物工程杂志.2019
[2].曾凡一,薛燕.动物乳腺生物反应器一种神奇的制药方式[J].人与生物圈.2018
[3].谢晶莹,张勇,冯若飞.乳腺生物反应器在生物制药领域的研究进展[J].西北民族大学学报(自然科学版).2018
[4].朱晓露,浦轩.浦口将建转基因“动物制药工厂”[N].南京日报.2018
[5].王宇航.利用牛乳腺生物反应器表达重组人胆盐激活酯酶的研究[D].中国农业大学.2016
[6].葛恒涛.利用山羊乳腺生物反应器制备具有免疫原性病毒结构蛋白的研究[D].西北农林科技大学.2016
[7].毛婕.乳腺生物反应器在生物制药领域研究进展[J].西部皮革.2016
[8].梁振鑫,尹富强,刘庆友,李力.转基因动物乳腺生物反应器相关技术及研究进展[J].中国生物工程杂志.2015
[9].张斯敏,高越,方彧聃,张金脉,张敬之.乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建[J].中国生物工程杂志.2014
[10].包梦醒,吴新.乳腺生物反应器研究进展[J].中国牛业科学.2014
论文知识图
