导读:本文包含了人线粒体亮氨酰合成酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:线粒体,氨基,亲和,动力学,基因,克隆人,细胞。
人线粒体亮氨酰合成酶论文文献综述
翟红运[1]（2018）在《线粒体亮氨酰-tRNA合成酶失调在肾透明细胞癌中的作用及其机制研究》一文中研究指出肾细胞癌(renal cell cancer,RCC),简称肾癌,是起源于肾实质小管上皮细胞的恶性占位性疾病,其中80～85%为透明细胞癌(clear cell RCC,ccRCC)。目前,对RCC发生、发展和转移的分子机制仍未完全认识,亟需进一步的研究。本课题组前期采用全基因组测序的方法检测了 ccRCC组织和配对的癌旁肾脏组织的基因序列,并比较了两组间的差异基因,从而发现大多数ccRCC组织中线粒体亮氨酰-tRNA 合成酶(mitochondrial leucyl-tRNA synthetase,LARS2)基因缺失或发生了突变,导致其功能丧失。这提示LARS2可能在ccRCC的发生、发展中发挥重要的作用。目的:研究LARS2在ccRCC中的表达水平,LARS2对ccRCC生物学行为的影响及其发挥作用的机制。材料和方法:(I)采用qRT-PCR、Western blot和ICC的方法检测了 ccRCC细胞株和肾小管上皮细胞株中LARS2基因的RNA和蛋白质表达水平;还采用qRT-PCR、Western blot和IHC的方法检测了 ccRCC组织和对应的癌旁肾脏组织中LARS2基因的RNA和蛋白质表达水平。此外,研究了 ccRCC组织中LARS2的表达水平与患者临床病理特征的关系,并分析了 LARS2对ccRCC患者预后的影响。(2)在ccRCC细胞株OS-RC-2、Caki-1和肾小管上皮细胞株HKC中建立了 LARS2过表达的稳转细胞和对照细胞;在HKC细胞株中建立了 LARS2低表达的稳转细胞和对照细胞。随后检测了它们的增殖情况、形成克隆的能力、周期、凋亡水平、ATP含量、活性氧水平,以及OS-RC-2细胞在免疫缺陷小鼠肾脏上长出肿瘤的能力,并将稳转细胞与对照细胞的检测结果相比较。(3)用 Western blot 法检测了 LARS2 过表达的 OS-RC-2、Caki-1、HKC 细胞,LARS2低表达的HKC细胞和对照细胞中Ras/Raf/MEK/ERK、AMPKα、HIF-1α/mTOR和VHL/HIF-2α通路的激活水平,并将稳转细胞与对照细胞的检测结果相比较。结果:(1)与肾小管上皮细胞相比,ccRCC细胞中LARS2mRNA和蛋白质的表达水平降低;与癌旁肾脏组织相比,ccRCC组织中LARS2mRNA和蛋白质的表达水平显着降低(P<0.05)。LARS2mRNA的表达水平与ccRCC患者的临床病理特征相关,并且能影响ccRCC患者的预后,LARS2低表达的患者预后更差(P<0.05)。(2)与对照细胞相比,LARS2过表达细胞增殖减慢,形成克隆能力减弱,细胞周期存在G1/S期阻滞,凋亡增加,ATP含量增多,活性氧水平降低,形成肾脏肿瘤的能力减弱(均P<0.05)。与对照细胞相比,LARS2低表达细胞增殖加快,形成克隆能力增强,ATP含量减少,活性氧水平升高(均P<0.05)。(3)与对照细胞相比,LARS2过表达细胞中Ras/Raf/MEK/ERK通路、AMPKα通路和mTOR通路的活性被抑制(均P<0.05),VHL/HIF-2α通路的活性无明显变化(P>0.05)。与对照细胞相比,LARS2低表达细胞中Ras/Raf/MEK/ERK通路、AMPKα通路、mTOR通路被激活(均P<0.05),VHL/HIF-2α通路的活性无明显变化(P>0.05)。结论:本研究发现了 LARS2在ccRCC组织和细胞中的表达水平显着降低,LARS2的表达水平与ccRCC患者的临床病理特征相关并且是影响ccRCC预后的危险因素。LARS2在ccRCC中发挥抑癌性作用,敲低LARS2会导致ccRCC细胞的恶性程度增强。LARS2功能缺失在ccRCC中发挥的作用与Ras/Raf/MEK/ERK、AMPKα通路、mTOR通路被激活有关,而与VHL/HIF-2α通路无明显的关联。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2018-05-30）
刘雪梅[2]（2008）在《人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的克隆、表达与纯化》一文中研究指出氨酰-tRNA合成酶是有机体生命进化过程中最早出现的一类蛋白质。近年来研究表明,氨酰-tRNA合成酶除了通过两步特异性反应催化氨基酸与它同源的tRNA相结合外,还参与基因表达调控、调节rRNA合成、RNA剪切细胞因子和抑制细胞凋亡等许多的生命活动。本研究的目的是获得人线粒体色氨酰-tRNA合成酶,并用体外转录的人线粒体tRNATrp对其活力进行测定。为进一步研究该酶的结构、功能以及氨酰-tRNA合成酶的种属特异性氨酰化奠定了基础。采用RT-PCR法从人乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)总RNA中获得编码人线粒体色氨酰-tRNA合成酶(hmtTrpRS)的全序列,并将此片断连接到克隆载体pMD18-T中,构建了克隆载体pMD18-hmtTrpRS,然后经过限制性内切酶NedⅠ和EcoRⅠ双酶切,酶切产物连接到表达载体pET-24a(+)中,经过抗性筛选、分子量大小比较、双酶切鉴定和PCR鉴定等多种方法验证,得到了人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的高表达质粒pET-24a(+)-hmt TrpRS。筛选出阳性重组子转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL诱导表达。分析了异丙基硫代p—D—半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时间和诱导温度对融合蛋白表达的影响。结果表明诱导蛋白表达较合适条件为IPTG浓度为0.1 mmol/L,30℃诱导4h,所表达的蛋白质其分子量与理论值38 KDa相符。在特异性的Ni2+亲和柱的帮助下,分别纯化了以包涵体和可溶蛋白形式存在的目的蛋白,获得了纯度均达到95%以上的含6个His标记的人线粒体色氨酰-tRNA合成酶融合蛋白。通过两步PCR法成功构建了人线粒体tRNATrp基因,并成功进行了转录,制备了人线粒体tRNATrp。测定了纯化可溶蛋白得到的人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的氨酰化活力。利用lineweaver-Burk作图法计算出人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的动力学常数Km为1.08μmol/L,kcat为0.02S-1,蛋白纯品的比活为4411.18 U/mg综上所述,本研究从人乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)中克隆得到了人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因,成功构建了表达载体pET-24a(+)-hmt TrpRS,并在大肠杆菌中获得了高效表达。进一步通过Ni亲和柱层析得到蛋白纯品后,并以体外转录得到的人线粒体tRNATrp为底物,对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的氨酰化活力进行了测定,取得较理想结果。(本文来源于《中南林业科技大学》期刊2008-06-01）
刘雪梅,金晓玲,巩菊芳[3]（2008）在《诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响》一文中研究指出目的优化人线粒体色氨酰-tRNA合成酶(hmtTrpRS)的表达条件。方法构建表达载体pET-24a(+)-hmtTrpRS,转化到大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中。分析异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时间和诱导温度对hmtTrpRS表达的影响。结果确定IPTG浓度为0.1 mmol/L,30℃诱导4 h,为诱导蛋白表达较合适条件。同时利用特异性的Ni亲和柱色谱纯化了目的蛋白。结论获得较合适的表达条件,并纯化得到较高纯度的hmtTr-pRS,为以后该酶结构、功能的研究奠定了基础。(本文来源于《中国生化药物杂志》期刊2008年02期）
郝睿[4]（2006）在《人线粒体亮氨酸tRNA结构和功能的研究超嗜热菌亮氨酰-tRNA合成酶双亚基的体外重组》一文中研究指出线粒体性脑肌病,乳酸中毒和中风样发作综合症(MELAS症)是一种罕见的先天性线粒体DNA病,有报道指出,位于编码人线粒体tRNA~(Leu)(UUR)基因中的五种点突变与MELAS症相关。我们构建并转录获得了这些tRNA突变体,通过体外的氨基酰化实验,测定了这些点突变对tRNA接受茎活力的影响。结果显示,和野生型tRNA相比,带有这五种点突变的tRNA~(Leu)(UUR)转录子的氨基酰化水平都有不同程度的降低。进一步的热稳定性实验证明,氨基酰化水平最低的A3243G突变体和T3291C突变体的结构不稳定。另外,T3291C突变体能够竞争性地抑制野生型tRNA的亮氨酰化,暗示携带该突变的tRNA可能作为一种抑制剂存在于患者的线粒体内。人线粒体亮氨酸tRNA的CUN等受体(hmtRNA~(Leu)(CUN))负责解码线粒体蛋白质编码系统中使用频率最高的密码子,目前有六个致病性点突变被定位于它的基因内部。本文的体外实验显示,和野生型的hmtRNA~(Leu)(CUN)转录子(本文来源于《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》期刊2006-05-01）
汪振诚,王学敏,金由辛,缪明永,焦炳华[5]（2003）在《人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究(英文)》一文中研究指出目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2003年10期）
人线粒体亮氨酰合成酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
氨酰-tRNA合成酶是有机体生命进化过程中最早出现的一类蛋白质。近年来研究表明,氨酰-tRNA合成酶除了通过两步特异性反应催化氨基酸与它同源的tRNA相结合外,还参与基因表达调控、调节rRNA合成、RNA剪切细胞因子和抑制细胞凋亡等许多的生命活动。本研究的目的是获得人线粒体色氨酰-tRNA合成酶,并用体外转录的人线粒体tRNATrp对其活力进行测定。为进一步研究该酶的结构、功能以及氨酰-tRNA合成酶的种属特异性氨酰化奠定了基础。采用RT-PCR法从人乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)总RNA中获得编码人线粒体色氨酰-tRNA合成酶(hmtTrpRS)的全序列,并将此片断连接到克隆载体pMD18-T中,构建了克隆载体pMD18-hmtTrpRS,然后经过限制性内切酶NedⅠ和EcoRⅠ双酶切,酶切产物连接到表达载体pET-24a(+)中,经过抗性筛选、分子量大小比较、双酶切鉴定和PCR鉴定等多种方法验证,得到了人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的高表达质粒pET-24a(+)-hmt TrpRS。筛选出阳性重组子转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIL诱导表达。分析了异丙基硫代p—D—半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时间和诱导温度对融合蛋白表达的影响。结果表明诱导蛋白表达较合适条件为IPTG浓度为0.1 mmol/L,30℃诱导4h,所表达的蛋白质其分子量与理论值38 KDa相符。在特异性的Ni2+亲和柱的帮助下,分别纯化了以包涵体和可溶蛋白形式存在的目的蛋白,获得了纯度均达到95%以上的含6个His标记的人线粒体色氨酰-tRNA合成酶融合蛋白。通过两步PCR法成功构建了人线粒体tRNATrp基因,并成功进行了转录,制备了人线粒体tRNATrp。测定了纯化可溶蛋白得到的人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的氨酰化活力。利用lineweaver-Burk作图法计算出人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的动力学常数Km为1.08μmol/L,kcat为0.02S-1,蛋白纯品的比活为4411.18 U/mg综上所述,本研究从人乳腺癌细胞(MDA-MB-435S)中克隆得到了人线粒体色氨酰-tRNA合成酶基因,成功构建了表达载体pET-24a(+)-hmt TrpRS,并在大肠杆菌中获得了高效表达。进一步通过Ni亲和柱层析得到蛋白纯品后,并以体外转录得到的人线粒体tRNATrp为底物,对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的氨酰化活力进行了测定,取得较理想结果。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人线粒体亮氨酰合成酶论文参考文献
[1].翟红运.线粒体亮氨酰-tRNA合成酶失调在肾透明细胞癌中的作用及其机制研究[D].中国人民解放军医学院.2018
[2].刘雪梅.人线粒体色氨酰-tRNA合成酶的克隆、表达与纯化[D].中南林业科技大学.2008
[3].刘雪梅,金晓玲,巩菊芳.诱导条件对人线粒体色氨酰-tRNA合成酶表达的影响[J].中国生化药物杂志.2008
[4].郝睿.人线粒体亮氨酸tRNA结构和功能的研究超嗜热菌亮氨酰-tRNA合成酶双亚基的体外重组[D].中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）.2006
[5].汪振诚,王学敏,金由辛,缪明永,焦炳华.人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究(英文)[J].第二军医大学学报.2003