导读:本文包含了克隆载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,甜瓜,大豆,腋芽,叶斑病,细胞,氧化酶。
克隆载体论文文献综述
吴会杰,彭斌,康保珊,刘丽锋,刘莉铭[1]（2019）在《携带GFP的甜瓜坏死斑点病毒侵染性克隆载体构建》一文中研究指出甜瓜坏死斑点病毒(Melora necrotic spot virus,MNSV)是中国新近报道为害甜瓜的病毒种。本研究首先从田间采集确认是MNSV侵染的甜瓜叶片,采用分段扩增的方式,获得了该病毒的cDNA全长基因。随后以双元载体pXT1为骨架质粒,利用In-Fusion HD Cloning Kit重组酶连接pXT1和MNSV全长cDNA片段,获得含MNSV cDNA全长基因的pXT1-MNSV克隆,接种甜瓜,通过症状观察及PCR检测鉴定其致病性。取接种pXT1-MNSV载体后发病明显的甜瓜叶片,经汁液摩擦接种到健康的甜瓜上,验证其是否能通过汁液摩擦接种。在此基础上,利用同源重组的方法将GFP去掉终子密码子的全长基因重组到MNSV cp基因后面,接种甜瓜后,通过观察接种植株的症状及PCR检测其侵染性,并利用激光共聚焦观察甜瓜根部及叶片,均出现GFP荧光。本研究首次在国内构建了携带GFP的MNSV侵染性克隆载体,为解析病毒的分子机理以及在侵染过程中病毒的分布与运动奠定了基础。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
李恺馨[2]（2019）在《羟胺氧化酶基因克隆载体构建及生物信息学分析》一文中研究指出工业污水的氮元素积累导致水体的富营养化是污水处理过程中的重要挑战。而节能环保的生物脱氮技术作为一种新型的脱氮方法受到大量关注和应用。在生物脱氮过程中,羟胺氧化酶作为反应的关键酶起着承上启下的作用。本文通过对欧洲亚硝化单胞菌体内的羟胺氧化酶进行生物信息学分析,根据其基因序列设计引物并构建重组载体进行全长克隆,为研究者实验进行羟胺氧化酶蛋白表达及脱氮反应机理研究提供帮助。(本文来源于《当代化工研究》期刊2019年02期）
卓维,陈倩,罗银,杨尚谕,鲁黎明[3]（2018）在《烟草乙烯转录因子ERF基因NtTOE3的克隆、载体构建及表达分析》一文中研究指出ERF(Ethylene-responsive factor)是一类具有AP2特征结构域的乙烯应答转录因子,在响应植物的逆境胁迫应答中起关键作用。为明确ERF家族成员TOE3在烟草中的生物学功能和调控机制,同源克隆普通烟草K326中NtTOE3基因cDNA全长,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)表征基因表达模式,结合生物信息学分析,对基因功能和调控机制进行初步预测。结果表明,该基因全长1 356 bp,编码451个氨基酸残基,预测分子量为49. 84 ku。生物信息学分析表明,该蛋白是一个亲水蛋白,可能定位在细胞核,且与美花烟草(Nicotiana sylvestris) NsTOE3有96%的同源性,故命名为NtTOE3。组织表达分析发现,该基因在烟草根、茎、叶、花中均有表达,其中茎中表达量最高。逆境胁迫试验表明,该基因能快速响应低钾、高盐、干旱、H_2O_2、ABA和4℃等逆境处理。表明NtTOE3转录因子在烟草非生物胁迫中起着重要调节作用。(本文来源于《植物研究》期刊2018年05期）
张双纳[4]（2018）在《苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测技术研究及侵染性克隆载体构建》一文中研究指出苹果是主要的经济果树。在苹果的高产优质生产中,病毒病害已经成为制约苹果产业发展的重要因素。在世界范围内苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)在苹果上检出率最高,为害最严重,地理分布最广的苹果病毒病之一。基于我国对ACLSV的研究现状且对苹果高质安全生产的迫切需求,本文旨在完成以下实验:利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,建立一种简便、快速检测ACLSV的检测方法;以带有ACLSV的辽宁兴城寒富苹果(Malus domestica cultivar Hanfu)为研究材料,采用RT-PCR结合RACE技术,扩增了该ACLSV分离物的全长基因组;构建了ACLSV侵染性克隆载体,为后续开展ACLSV复制、移动,与寄主互做等致病机理研究,改造用于苹果基因功能研究的基因沉默载体奠定基础。具体研究成果如下:1、建立了ACLSV RT-LAMP检测方法,优化的各反应物浓度为:6.0 mM Mg~(2+)、1.2 mM dNTPs、1.0 M Betaine、1.6μM FIP/BIP和0.2μM F3/B3引物,59℃反应60 min;特异性测试中,仅ACLSV检测结果为阳性,对照组均为阴性;灵敏性测试中,此法最低可检测到10~(-3)倍RNA稀释液;随机采取的23株苹果叶片样品RT-PCR阳性检出率为52.2%,RT-LAMP法检测ACLSV,阳性检出率为65.2%,RT-LAMP的检出率高于RT-PCR,表明RT-LAMP具有较高的灵敏性。2、ACLSV XC-HF分离物基因组全长7557个核苷酸(nt),编码3个ORF,与已经报道的19个ACLSV分离物基因组核苷酸序列的一致性为68.9%~84.4%。基于全长基因组序列的系统发育分析证明,Genbank登录的20个ACLSV分离物被划分为6个组,ACLSV XC-HF分离物位于JB组内,与中国梨分离物JB、KMS、YH和中国山楂分离物SY03聚为一支;重组分析结果显示该分离物为一个自然重组产物,重组区域发生在1-338nt。3、通过摩擦接种和木本指示植物双芽嫁接法分别将该分离物接种到草本寄主苋色黎(Chenopodiu mamaranticolor)和木本指示植物俄罗斯苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)上,该分离物在这两种寄主上分别引起褪绿和皱缩症状。4、本实验成功构建了ACLSV侵染性克隆载体,接种后的西方烟出现了感染ACLSV的症状,叶片黄化褪绿,经凝胶电泳检测ACLSV呈阳性。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-03-01）
王菲,梁芳,张艳俊,张家瑞,王海燕[5]（2017）在《小麦病程相关蛋白TaLr19TLP1的Gateway克隆载体的构建》一文中研究指出病程相关蛋白PR5,属类甜蛋白家族(Thaumatin-1ike proteins,TLPs),前期笔者对该基因结构域进行预测,综合结果分析该基因有95.1%的可能性为胞外蛋白,含有信号肽。现笔者将利用Gateway技术构建小麦病程相关蛋白TaLr19TLP1(不含信号肽)和TaLr 19TLP1-SP(含信号肽)的克隆载体。依据Gateway中定向克隆TOPO技术的要求设计引物,将目的基因连接到pENTR~(TM)/D-TOPO(入门载体)上,并对终载体pEarleyGate 103(PEG103)进行酶切改造,使目的基因在LR酶的作用下,连接到PEG103上,形成重组载体TaLr19TLP1-PEG103和TaLr19TLP1-SP-PEG103,将二者转化到农杆菌GV3101中,通过烟草瞬时表达技术,使用激光共聚焦显微镜进行亚细胞定位的观察。亚细胞定位结果显示,TaLr19TLP1定位于细胞膜,而TaLr19TLP1-SP通过质壁分离实验验证,该基因定位于胞外。Western blot证明,笔者构建的融合蛋白在烟草叶片中可以表达。本实验中使用的Gateway技术不需进行BP反应,只需要一套体系和一支LR酶即可完成,打破了传统的酶切连接转化的方法构建载体,更加方便快捷。(本文来源于《中国植物病理学会2017年学术年会论文集》期刊2017-07-25）
贺梦雪,席俊,皮江一,李爽,于秋荣[6]（2017）在《大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基的分段及克隆载体的构建》一文中研究指出利用生物信息学软件将大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基分为相互重叠的4个片段(A、B、C、D),设计和合成系列引物。利用PCR技术分别扩增β-伴大豆球蛋白α亚基Overlapping分段基因,将其插入到p MD-18T vector中,对重组质粒进行PCR和双酶切鉴定,测序结果与设计基因序列一致,成功构建了克隆载体。为研究β-伴大豆球蛋白α亚基的分段表达及抗原表位的筛选提供参考。(本文来源于《食品科技》期刊2017年07期）
刘锋[7]（2016）在《香蕉束顶病毒（BBTV）侵染性克隆载体构建及Rep/RepA作用研究》一文中研究指出香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是矮缩病毒科(Nanaviridae)香蕉束顶病毒属(Babuvirus)成员,其基因组由6个大小约1kb的环状ssDNA组成,有的株系含有1-3个不同数量的卫星组分。BBTV基因组中各组分除含有同源性很高的调控区外,几乎每个组分含有1个开放阅读框架(ORF)。BBTV各组分编码不同的蛋白,行使不同的功能,其中DNA1编码Rep蛋白,卫星组分(S2、S4)编码复制相关蛋白(RepA)。研究表明,DNA1编码的Rep蛋白和卫星组分编码的RepA蛋白在病毒基因组滚环复制中起作用,在其颈环结构区域进行剪切和连接,产生病毒基因组的各个环状单链组分。已有研究发现DNA1编码的Rep蛋白能够对DNA1、DNA3、DNA5进行剪切和连接:卫星组分(S2、S4)编码的RepA蛋白能够对自身组分起作用,进行剪切和连接,产生卫星组分。但是Rep和RepA对DNA2、DNA4、DNA6等其他组份的复制也还不是很清楚。目前针对BBTV各组分基因编码的蛋白作用尚不明确,其致病机理,与寄主间的相互作用等相关研究也不清楚。为了进一步研究BBTV侵染复制机理及深入了解病毒基因组功能,本研究以具有代表性的BBTV海南分离物(B2)为材料,在完成全基因组测序基础上,用高保真酶一步法获得了 BBTV DNA1～DNA6和卫星组分(S2、S4)原基因组1.1～1.4倍的多拷贝序列。将各组分的多拷贝序列分别插入pMD-19T载体,转化DH5 α感受态细胞并在AMPr抗性的LB平板上生长,菌液PCR筛选阳性克隆,经测序分析和酶切验证等生物分子学方法验证后获得了 BBTV各组分的克隆载体。各组分的克隆载体和植物双向表达载体pCAMBIA3300用HindⅢ和XmaI双酶切并回收,将酶切回收的各组分分别与酶切回收的pCAMBIA3300连接,转化并转化DH5 α感受态细胞并在AMpr和Rif抗性的LB平板上生长,菌液PCR筛选阳性克隆,经测序分析和酶切验证等生物分子学方法验证后获得了 BBTV侵染性克隆系列载体。为了解Rep和RepA在BBTV的复制中所起的不同作用及其分子机制,利用本研究构建的BBTV的侵染性克隆载体,利用农杆菌介导侵染烟草等方法来研究Rep和RepA对病毒基因组的复制调控机制。将各组分单独侵染烟草和将DNA1混匀后侵染烟草,含有DNA1侵染性克隆载体的农杆菌侵染烟草能够检测到DNA1,含有DNA2～DNA6侵染性克隆载体的农杆菌分别与含有DNA1侵染性克隆载体的农杆菌侵染烟草均能检测到各自组分的存在。结果表明,Rep蛋白不仅能参与BBTV DNA1,DNA3,DNA5进行剪接和连接,还能对BBTVDNA2,DNA4,DNA6组分进行剪接和连接;将卫星组分单独侵染烟草结果表明RepA蛋白能够对自身组分起作用,进行剪切和连接,产生卫星组分;将含有卫星组分(S2、S4)侵染性克隆载体的农杆菌侵染烟草,能检测到卫星组分;卫星组分和其余组分一起混合侵染烟草未能检测到其他组分的存在,表明RepA蛋白只能够对自身组分起作用,不能对DNA2～DNA6组分进行剪切和连接。(本文来源于《海南大学》期刊2016-06-01）
袁飞荣,袁耀明,李智鑫,Alessandra,Gentile,邓子牛[8]（2016）在《枳橙CPMAX2基因的克隆、载体构建及其表达研究》一文中研究指出转rolABC基因枳橙莲座状分枝、矮化性状突出。为探索其侧枝生长的植物激素调控机制,本研究通过RT-PCR法从枳橙中克隆到独脚金内酯信号转导关键元件CPMAX2基因,分析了该基因在转rolABC基因枳橙腋生嫩叶中的转录表达,构建了CPMAX2植物过表达载体。研究表明:CPMAX2与甜橙中同源基因一致性为99.66%,编码694个氨基酸,具有一个典型的Fbox蛋白结构域和两个LRR重复区,与甜橙MAX2氨基酸序列一致性为99.14%。CPMAX2在转rolABC基因枳橙3个株系腋生嫩叶中的转录表达均比野生型显着下调。实验表明CPMAX2在转rolABC基因枳橙莲座型分枝生长中扮演重要角色。(本文来源于《武汉生物工程学院学报》期刊2016年01期）
王之,石玲玲,李志英,雷明,徐立[9]（2016）在《蜻蜓凤梨AfAG基因的克隆、载体构建及遗传转化》一文中研究指出本研究以蜻蜓凤梨为材料,利用RACE技术获得一个与拟南芥AGAMOUS(AG)同源的编码基因c DNA,并将其命名为Af AG。Af AG基因的c DNA全长1 422 bp,开放阅读框为723 bp,可翻译成240个氨基酸。利用NCBI对Af AG蛋白进行序列分析,结果显示Af AG蛋白含有MADS-box蛋白家族共有的功能结构域:MADS和K-BOX两个结构域。与水稻(Os AG);玉米(Zm AGL);拟南芥(At AG);菜心(Br AGL);椰子(Cn AGL);白兰花(Ma AGL)的同源性比对结果分别为65%、63%、68%、65%、83%、75%。本研究成功构建了Ca MV35S-Af AG过表达载体,用农杆菌介导的方法将表达载体成功转入到拟南芥中,为进一步研究蜻蜓凤梨开花分子机理提供了理论依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2016年02期）
汪珊珊,陈明卫[10]（2016）在《PDX-1基因克隆载体的体外构建》一文中研究指出目的体外构建胰-十二指肠同源框-1(PDX-1)基因的克隆载体。方法采用TRIzol方法从大鼠胰岛细胞瘤细胞株中提取RNA,通过RT-PCR方法在体外扩增大鼠PDX-1 c DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定,割胶纯化后回收目的基因,与p MD-18T克隆载体连接构建,经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定p MD-18T-PDX-1的正确构建。结果正确构建了含有PDX-1 c DNA的克隆载体p MD-18T-PDX-1,其中PDX-1 c DNA全长为908 bp。将经双酶切鉴定正确的p MD-18T-PDX-1细菌克隆进行测序,测定结果与Gen Bank中大鼠PDX-1基因序列(NM_022852.3)一致。结论成功构建了PDX-1基因克隆载体。该载体可为PDX-1基因分子生物学研究及PDX-1基因在诱导非β细胞向胰岛素分泌细胞分化中作用机制的研究提供基础。(本文来源于《山东医药》期刊2016年04期）
克隆载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
工业污水的氮元素积累导致水体的富营养化是污水处理过程中的重要挑战。而节能环保的生物脱氮技术作为一种新型的脱氮方法受到大量关注和应用。在生物脱氮过程中,羟胺氧化酶作为反应的关键酶起着承上启下的作用。本文通过对欧洲亚硝化单胞菌体内的羟胺氧化酶进行生物信息学分析,根据其基因序列设计引物并构建重组载体进行全长克隆,为研究者实验进行羟胺氧化酶蛋白表达及脱氮反应机理研究提供帮助。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆载体论文参考文献
[1].吴会杰,彭斌,康保珊,刘丽锋,刘莉铭.携带GFP的甜瓜坏死斑点病毒侵染性克隆载体构建[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[2].李恺馨.羟胺氧化酶基因克隆载体构建及生物信息学分析[J].当代化工研究.2019
[3].卓维,陈倩,罗银,杨尚谕,鲁黎明.烟草乙烯转录因子ERF基因NtTOE3的克隆、载体构建及表达分析[J].植物研究.2018
[4].张双纳.苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测技术研究及侵染性克隆载体构建[D].中国农业科学院.2018
[5].王菲,梁芳,张艳俊,张家瑞,王海燕.小麦病程相关蛋白TaLr19TLP1的Gateway克隆载体的构建[C].中国植物病理学会2017年学术年会论文集.2017
[6].贺梦雪,席俊,皮江一,李爽,于秋荣.大豆主要过敏原β-伴大豆球蛋白α亚基的分段及克隆载体的构建[J].食品科技.2017
[7].刘锋.香蕉束顶病毒（BBTV）侵染性克隆载体构建及Rep/RepA作用研究[D].海南大学.2016
[8].袁飞荣,袁耀明,李智鑫,Alessandra,Gentile,邓子牛.枳橙CPMAX2基因的克隆、载体构建及其表达研究[J].武汉生物工程学院学报.2016
[9].王之,石玲玲,李志英,雷明,徐立.蜻蜓凤梨AfAG基因的克隆、载体构建及遗传转化[J].分子植物育种.2016
[10].汪珊珊,陈明卫.PDX-1基因克隆载体的体外构建[J].山东医药.2016
论文知识图
