人诱骗受体3检测试剂盒论文和设计-吴海苹

全文摘要

本实用新型提出了一种人诱骗受体3检测试剂盒，其包括盒体和放置在所述盒体内的酶联包被板以及若干个试剂瓶；若干个所述试剂瓶包含BSA干粉试剂瓶、待测物标准品瓶、检测抗体瓶、酶标剂瓶、缓冲液瓶、显色试剂瓶、稀释液瓶、洗涤液瓶以及终止试剂瓶。使得该试剂盒能够高灵敏、快速准确的检测样品中的DcR3，以提高败血症抢救成功率。

主设计要求

1.一种人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于，包括盒体和放置在所述盒体内的酶联包被板以及若干个试剂瓶；若干个所述试剂瓶包含BSA干粉试剂瓶、待测物标准品瓶、检测抗体瓶、酶标剂瓶、缓冲液瓶、显色试剂瓶、稀释液瓶、洗涤液瓶以及终止试剂瓶。

设计方案

2.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：还包括封板膜，所述封板膜用于密封所述酶联包被板。

3.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述显色试剂瓶包括装有缓冲液的显色剂A液瓶、装有TMB显色剂的显色剂B液瓶以及装有过氧化氢的显色剂C液瓶。

4.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述酶标剂瓶内装有SA-HRP酶。

5.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述稀释液瓶装有PBS或Tris-HCl缓冲液，装量为10mL。

6.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述洗涤液瓶装有PBS或Tris-HCl缓冲液，装量为50mL。

7.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述终止试剂瓶内装有2mol\/L~4mol\/L的硫酸，装量为6 mL。

8.如权利要求1所述的人诱骗受体3检测试剂盒，其特征在于：所述检测抗体瓶内装有生物素化的羊抗DcR3检测抗体。

设计说明书

技术领域

本实用新型涉及生物检测领域，特别涉及一种人诱骗受体3检测试剂盒。

背景技术

人诱骗受体3(Decoy Receptor 3，以下简称为DcR3)是肿瘤坏死因子受体超家族（TNFR）的一个成员，编码DcR3基因的调控区有二个NF的转录位点。当发生败血症 (Sepsis)时，致病菌或条件致病菌侵入血循环，并在血中生长繁殖而发生的急性全身性感染，其产生毒素可通过TLR4信号通路激发NF转录因子，使DcR3大量表达分泌，因此发生败血症时，血中DcR3骤然升高，且升高程度与临床病情的严重程度正相关。

败血症是临床常见的急重症，患者生命时间以小时计。目前，败血症的诊断金标准是血培养，常需12-72小时出报告，不能够满足临床急症需要。血清或血浆中的DcR3高度升高仅见于败血症，当血中DcR3>0.45 ng\/ml且不断升高，结合临床有发热不退、高热、寒战等一系列症状，应考虑败血症，此时血清或血浆中DcR3水平可为败血症的早期诊断提供依据。当给予及时有效的抗病原体治疗后，血中DcR3水平可降低；反之，当治疗无效、病情加重时，血中DcR3水平不断升高或居高不下；因而精确、快速的动态检测患者血中DcR3水平可用于预测疗效及预后，提高败血症抢救成功率。

但是，现有技术中DcR3的检测技术灵敏度低，普通的标准品稀释液无法反应血液或血浆的真实情况致结果不准确，而用高浓度蛋白液作为稀释液不稳定、不易保存。

实用新型内容

本实用新型旨在至少在一定程度上解决上述技术中的技术问题之一。为此，本实用新型的目的在于提出一种人诱骗受体3检测试剂盒，能够高灵敏、快速准确的检测样品中的DcR3。

根据本实用新型的一种人诱骗受体3检测试剂盒，其包括盒体和放置在所述盒体内的酶联包被板以及若干个试剂瓶；若干个所述试剂瓶包含BSA干粉试剂瓶、待测物标准品瓶、检测抗体瓶、酶标剂瓶、缓冲液瓶、显色试剂瓶、稀释液瓶、洗涤液瓶以及终止试剂瓶。

根据本实用新型实施例的一种人诱骗受体3检测试剂盒，通过在盒体内配置BSA干粉试剂可稳定保存，使用时以盒体里配套的缓冲液溶解制成标准品稀释液，用来配制不同浓度的标准品工作液，使标准品工作液更接近血清或血浆的实际情况，样本检测结果更准确；且该试剂盒灵敏度可达0.2ng\/ml以下，符合临床诊断的需要；使得该试剂盒能够高灵敏、快速准确的检测样品中的DcR3，以提高败血症抢救成功率；此外，新近的研究发现某些非炎症疾病（例如肿瘤）也存在血中DcR3浓度升高现象，因此本试剂盒还可以适用于除败血症外的其他疾病的DcR3检测。

另外，根据本实用新型上述实施例提出的人诱骗受体3检测试剂盒，还具有如下附加的技术特征：

根据本实用新型的实施例，还包括封板膜，所述封板膜用于密封所述酶联包被板。

根据本实用新型的实施例，所述显色试剂瓶包括装有缓冲液的显色剂A液瓶、装有TMB显色剂的显色剂B液瓶以及装有过氧化氢的显色剂C液瓶。

根据本实用新型的实施例，所述酶标剂瓶内装有SA-HRP酶。

根据本实用新型的实施例，所述稀释液瓶装有PBS或Tris-HCl缓冲液，装量为10mL。

根据本实用新型的实施例，所述洗涤液瓶装有PBS或Tris-HCl缓冲液，装量为50mL。

根据本实用新型的实施例，所述终止试剂瓶内装有2mol\/L~4mol\/L的硫酸，装量为6 mL。

根据本实用新型的实施例，所述检测抗体瓶内装有生物素化的羊抗DcR3检测抗体。

本实用新型的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本实用新型的实践了解到。

附图说明

图1为根据本实用新型实施例的试剂盒示意图；

附图标记说明：试剂盒1、盒体101、酶联包被板102、BSA干粉试剂瓶103、待测物标准品瓶104、检测抗体瓶105、酶标剂瓶106、缓冲液瓶107、显色试剂瓶108、显色剂A液瓶1081、显色剂B液瓶1082、显色剂C液瓶1083、稀释液瓶109、洗涤液瓶110、终止试剂瓶111、封板膜112。

具体实施方式

下面详细描述本实用新型的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本实用新型，而不能理解为对本实用新型的限制。

为了更好的理解上述技术方案，下面将参照附图更详细地描述本实用新型的示例性实施例。虽然附图中显示了本实用新型的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本实用新型而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本实用新型，并且能够将本实用新型的范围完整的传达给本领域的技术人员。

下面结合附图具体描述根据本实用新型实施例的一种人诱骗受体3检测试剂盒。

一种人诱骗受体3检测试剂盒1包括盒体101和放置在盒体101内的酶联包被板102以及若干个试剂瓶；若干个试剂瓶包含BSA干粉试剂瓶103、待测物标准品瓶104、检测抗体瓶105、酶标剂瓶106、缓冲液瓶107、显色试剂瓶108、稀释液瓶109、洗涤液瓶110以及终止试剂瓶111。

其中，酶联包被板102采用真空铝箔封装。酶联包被板102在使用时还有封板膜112将其密封。显色试剂瓶108包括装有10mL缓冲液的显色剂A液瓶1081、装有0.6mL 的TMB显色剂的显色剂B液瓶1082以及装有5μL的过氧化氢的显色剂C液瓶1083。酶标剂瓶106内装有10μL的SA-HRP酶。稀释液瓶装有10mL的抗体稀释液，可为PBS或Tris-HCl缓冲液。洗涤液瓶装110内装有50mL的浓缩洗涤液，可为PBS或Tris-HCl缓冲液。终止试剂瓶内装有6mL的硫酸。检测抗体瓶105内装有生物素化的羊抗DcR3检测抗体。

这样，通过在盒体101内配置BSA干粉试剂可稳定保存，使用时以盒体101里配套的缓冲液溶解制成标准品稀释液，用来配制不同浓度的标准品工作液，使标准品工作液更接近血清或血浆的实际情况，样本检测结果更准确；另外配置的高特异、高结合的生物素化的羊抗DcR3检测抗体和SA-HRP酶使得该试剂盒灵敏度可达0.2ng\/ml以下，符合临床诊断的需要；使得该试剂盒能够高灵敏、快速准确的检测样品中的DcR3，以提高败血症抢救成功率。此外，新近的研究发现某些非炎症疾病（例如肿瘤）也存在血中DcR3浓度升高现象，因此本试剂盒还可以适用于除败血症外的其他疾病的DcR3检测。

利用上述试剂盒1检测人诱骗受体3（DcR3）的步骤包括如下：

（1）检测前试剂准备

配制标准品稀释液：取5 mL缓冲液于1g 的BSA干粉试剂瓶103中溶解均匀。配制好的备用标准品稀释液应保存在2~8°C，用前回温至室温，当天使用。

工作浓度洗涤液的配制：用纯水（蒸馏水或去离子水）将浓缩洗涤液稀释成5倍，即为工作浓度洗涤液。备用的工作浓度洗涤液应保存在2~8℃，用前回温至室温，当天使用。

（2）稀释DcR3标准品，加入标准品以及待测样品：

按试剂盒标准品瓶104标示的标准品浓度进行稀释，以320ng\/ml为例：取1根离心管，加入380µ现配的标准品稀释液，再加入20µl 标准品（320ng\/ml）稀释至16 ng\/ml，混匀，然后，从中分别取100µl加入到包被板102中H1、H2两孔；取完后，再往离心管中加入200µl标准品稀释液，稀释至8 ng\/ml，混匀，然后，从中分别取100µl加入到包被板102中G1、G2两孔；重复上述步骤直至加到包被板102中B1、B2两孔后，停止稀释。

空白对照（标准品稀释液）2孔，分别取100µl标准品稀释液加入到包被板102中A1、A2两孔。最终浓度（DcR3,ng\/ml）分别为16，8，4，2，1，0.5，0.25，0。板中其余各孔加入100μl待测样品，建议每个样品均设置2孔；编号标记。加完后用封板膜112将包被板102密封，置37℃孵育2.5h，小心揭掉封板膜112洗板，弃去液体，拍干，包被板102中的每孔加洗涤液300µl，轻轻振摇30s后，拍干，如此重复3次。可以选择用洗板机参照该方案洗板。

（3）加入检测抗体：将检测抗体与抗体稀释液按1:6000比例稀释，混匀，在包被板102的每孔加入100µl，用封板膜112将包被板102密封后置37℃孵育1.5h，取出小心揭掉封板膜112后洗板，弃去液体，拍干，包被板102的每孔加洗涤液300µl，轻轻振摇30s后，拍干，如此重复3次。可以选择用洗板机参照该方案洗板。

（4）加入酶：将SA-HRP酶与抗体稀释液按1:8000比例稀释，混匀，包被板102的每孔加入100ul，用封板膜112将包被板102密封后置37℃孵育0.5h，取出小心揭掉封板膜112洗板，弃去液体，拍干，包被板102的每孔加洗涤液300µl，轻轻振摇30s后，拍干，如此重复5次。可以选择用洗板机参照该方案洗板。

（5）显色与测定：显色前吸取10ml显色剂A，放到一个15ml的干净棕色瓶子中，再加入0.5ml显色剂B，2µl显色剂C，充分混匀；阴暗避光环境下，在包被板102的每孔加入100µl混合液，用封板膜112将包被板102密封后，置37℃恒温箱孵育显色20~30分钟，包被板102的每孔加入终止液50µl，终止反应，把包被板102放入酶标仪，选450nm波长测量吸光度（OD值）。

（6）数据处理：以DcR3抗原标准品的吸光度为纵轴，以DcR3标准品的浓度为横轴，通过数据处理软件创建线性或四参数拟合标准曲线。将测得的样品的吸光度值在上述标准曲线上求出样品中的DcR3抗原的浓度。

通过本实用新型试剂盒1，无需自行称量配置或另行购买，使用方便，操作简单，省时省力。且其通过试剂的组合配置，使标准品工作液更接近血清或血浆的实际情况，样本检测结果更准确；试剂盒灵敏度可达0.2ng\/ml以下，符合临床诊断的需要；检测过程可在5小时内完成，快速获得检测结果；可为败血症的早期诊断提供依据。

在本实用新型的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。

此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本实用新型的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。

在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本实用新型中的具体含义。

在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正下方和斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、 “示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本实用新型的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本实用新型的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本实用新型的限制，本领域的普通技术人员在本实用新型的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

设计图

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