在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段

论文摘要

噬热栖热菌（Thermus thermophilus）是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子。利用此原理,在T. thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T. thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后（使杂合子纯合化）涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株。利用该系统成功敲除了T. thermophilus的TTC03400341基因,获得突变体的概率达到了10-2。该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 培养基及培养条件
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 基因组DNA的提取
•     1.2.2 0340＿0341基因敲除载体的构建
•     1.2.3 0340＿0341基因敲除突变体的构建
• 2 结果与分析
•   2.1 基因敲除载体pUC-Δ0340＿0341的构建
•   2.2 PCR鉴定出含有敲除型0340＿0341等位基因的菌株池
•   2.3 纯合型Δ0340＿0341突变体的构建
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李海娟,徐玲玲

关键词: 噬热栖热菌,多倍体,基因无痕敲除手段

来源: 江西农业大学学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西安文理学院生物与环境工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31700059),陕西省自然科学基础研究计划项目(2018JQ3037),陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13836/j.jjau.2019067

页码: 577-583

总页数: 7

文件大小: 1651K

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