杂交诱捕论文_赵文军,陈红运,朱水芳,谭天伟

导读:本文包含了杂交诱捕论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:荧光,实时,病毒,论文,PCR,time,real。

杂交诱捕论文文献综述

赵文军,陈红运,朱水芳,谭天伟^[1]（2007）在《杂交诱捕实时荧光PCR检测番茄环斑病毒》一文中研究指出A new virus detection method was developed by combining hybridization capture and real-time PCR technology with the sample of Tomato ringspot nepovirus.High purified DNA or RNA was crucial for the real-time PCR detection as the inhibitors of PCR reaction in template and might cause the false-negative cases.A probe was covalent bound to the surface of PCR tube for the DNA capture followed by real-time PCR detection.The steps of nucleic acids preparation and detection were both done in one the same tube.This method reduced the possibility of contamination as well increased the detection efficiency.It can be applied in plant virus detection especially for the sample with many inhibitors of PCR reaction.(本文来源于《植物病理学报》期刊2007年06期）

朱建裕^[2]（2002）在《实时荧光RT-PCR和杂交诱捕RT-PCR-ELISA检测李坏死环斑病毒的研究》一文中研究指出李坏死环斑病毒在欧美广泛分布，可侵染许多种重要的果树、蔬菜、花卉作物，引起严重病害甚至死亡，但在我国的存在尚无正式的报道，是我国对外检疫二类危险性生物。传统的血清学等方法存在漏检现象、假阳性、灵敏度不高等缺点、不易形成标准，不适合进出境检验检疫运用。因此建立标准、快速、准确、灵敏的方法具有重要的意义。本文回顾了李坏死环斑病毒的检测方法，较全面地评述了国内外病原物检测技术研究进展：在模板的扩增有各种PCR技术、NASBA技术；在信号的放大有同位素、生物素或DIG标记的cDNA和cRNA探针，分支探针和肽核酸探针；模板扩增和信号放大相结合的有PCR-基因扫描技术、PCR安捷伦芯片实验室技术；模板扩增和杂交以及信号放大相结合的有PCR-ELISA技术、实时荧光PCR技术、生物芯片技术。近年来这些技术大量发展，并迅速应用到生物学各个领域。本文根据病毒各株系外壳蛋白基因的保守序列，设计了杂交诱捕探针、Dig标记杂交探针以及确定了最佳诱捕参数和杂交检测参数，建立杂交诱捕RT-PCR—ELISA。该方法将5端氨基化的反向引物共价交链在PCR管上，在一定条件下定向诱捕核酸粗体液中的目标核酸，洗掉杂质及聚合酶抑制物质。固相引物既作为诱捕链参与核酸的诱捕，又参与PCR扩增，扩增中，在Taq酶的作用下，扩增产物沿着该引物延伸，形成一条固定在管壁上的链。对液相产物进行凝胶电泳检测的同时对固相产物进行杂交检测。该方法实现了目标核酸纯化、PCR扩增、核酸杂交以及酶联免疫检测一体化，它结合了PCR技术的高灵敏度、核酸杂交技术的特异性以及酶联免疫的信号放大作用有许多优点：1)改变核酸提取方法，利用杂交诱捕法直接从核酸粗提液中诱捕RNA，特别适合于低病毒含量、高Taq酶抑制物质的材料，减少了核酸提取的时间及试剂费用。2)结果可靠，杂交特异性诱捕目的片段，同时去除了核酸中存在的PCR抑制物质，减少了因核酸提取不纯造成的漏检现象，结果输出通过双重判定保证了结果的可靠性。3)灵敏度－高，通过杂交进行结果判定，灵敏度比传统的 RT干CR大约高 10倍。另外还设计了TaqMan荧光探针，确定了检测条件和参数，建立了实时荧光 RTWCR方法，该方法是指在PCR反应体系中加入带有荧光基团互补探针，如果有PCR反应（扩增），荧光信号就较大。这样利用荧光信号积累可以实时监测整个 PCR进程，实现了PCR扩增和核酸杂交以及荧光电信号放大检测同步进行的自动化检测技术；实时荧光PCR技术具有更大的优越性：l）不需要PCR后处理，．可消除PCR的假阳性污染、大样品量PCR产物检测困难的问题2）操作全部由仪器完成，实现自动化检测。3）灵敏度高，相对检测灵敏度达到0．卫W惑病组织，绝对灵敏度为4．49Fg阳性质粒或20个左右阳性质粒分子。我们利用建立的杂交诱捕们－PCR－ELISA和队－F－PCR对北京机场检疫局送检的樱桃样品检出了PNRSV，同时把451hP的PCR产物克隆到Ppo18－T载体上，通过序列测定，同源世最高的是GeneBank 中PNRSV 资料序号 gi 15750502gb山57046．18PNL57046，对它们的核酸序列相应片段比较，仅具7个碱基突变，二者的同源性达 98％，从而确认是 PNRSV。同时该方法对番茄环斑病毒、梨火疫细菌等对外检疫对象也能成功检测。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2002-05-20）

杂交诱捕论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

李坏死环斑病毒在欧美广泛分布，可侵染许多种重要的果树、蔬菜、花卉作物，引起严重病害甚至死亡，但在我国的存在尚无正式的报道，是我国对外检疫二类危险性生物。传统的血清学等方法存在漏检现象、假阳性、灵敏度不高等缺点、不易形成标准，不适合进出境检验检疫运用。因此建立标准、快速、准确、灵敏的方法具有重要的意义。本文回顾了李坏死环斑病毒的检测方法，较全面地评述了国内外病原物检测技术研究进展：在模板的扩增有各种PCR技术、NASBA技术；在信号的放大有同位素、生物素或DIG标记的cDNA和cRNA探针，分支探针和肽核酸探针；模板扩增和信号放大相结合的有PCR-基因扫描技术、PCR安捷伦芯片实验室技术；模板扩增和杂交以及信号放大相结合的有PCR-ELISA技术、实时荧光PCR技术、生物芯片技术。近年来这些技术大量发展，并迅速应用到生物学各个领域。本文根据病毒各株系外壳蛋白基因的保守序列，设计了杂交诱捕探针、Dig标记杂交探针以及确定了最佳诱捕参数和杂交检测参数，建立杂交诱捕RT-PCR—ELISA。该方法将5端氨基化的反向引物共价交链在PCR管上，在一定条件下定向诱捕核酸粗体液中的目标核酸，洗掉杂质及聚合酶抑制物质。固相引物既作为诱捕链参与核酸的诱捕，又参与PCR扩增，扩增中，在Taq酶的作用下，扩增产物沿着该引物延伸，形成一条固定在管壁上的链。对液相产物进行凝胶电泳检测的同时对固相产物进行杂交检测。该方法实现了目标核酸纯化、PCR扩增、核酸杂交以及酶联免疫检测一体化，它结合了PCR技术的高灵敏度、核酸杂交技术的特异性以及酶联免疫的信号放大作用有许多优点：1)改变核酸提取方法，利用杂交诱捕法直接从核酸粗提液中诱捕RNA，特别适合于低病毒含量、高Taq酶抑制物质的材料，减少了核酸提取的时间及试剂费用。2)结果可靠，杂交特异性诱捕目的片段，同时去除了核酸中存在的PCR抑制物质，减少了因核酸提取不纯造成的漏检现象，结果输出通过双重判定保证了结果的可靠性。3)灵敏度－高，通过杂交进行结果判定，灵敏度比传统的 RT干CR大约高 10倍。另外还设计了TaqMan荧光探针，确定了检测条件和参数，建立了实时荧光 RTWCR方法，该方法是指在PCR反应体系中加入带有荧光基团互补探针，如果有PCR反应（扩增），荧光信号就较大。这样利用荧光信号积累可以实时监测整个 PCR进程，实现了PCR扩增和核酸杂交以及荧光电信号放大检测同步进行的自动化检测技术；实时荧光PCR技术具有更大的优越性：l）不需要PCR后处理，．可消除PCR的假阳性污染、大样品量PCR产物检测困难的问题2）操作全部由仪器完成，实现自动化检测。3）灵敏度高，相对检测灵敏度达到0．卫W惑病组织，绝对灵敏度为4．49Fg阳性质粒或20个左右阳性质粒分子。我们利用建立的杂交诱捕们－PCR－ELISA和队－F－PCR对北京机场检疫局送检的樱桃样品检出了PNRSV，同时把451hP的PCR产物克隆到Ppo18－T载体上，通过序列测定，同源世最高的是GeneBank 中PNRSV 资料序号 gi 15750502gb山57046．18PNL57046，对它们的核酸序列相应片段比较，仅具7个碱基突变，二者的同源性达 98％，从而确认是 PNRSV。同时该方法对番茄环斑病毒、梨火疫细菌等对外检疫对象也能成功检测。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。