导读:本文包含了毕赤酵母表达系统论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,蛋白,菌株,病毒,工程,基因组,系统。
毕赤酵母表达系统论文文献综述
尹曼曼,楼觉人[1]（2019）在《利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究》一文中研究指出为研究毕赤酵母表达的兔病毒性出血症病毒(RHDV)病毒样颗粒(VLP)的免疫保护性,本研究将RHDV VP60的基因克隆到pPIC3.5K载体中,并导入毕赤酵母KM71菌株中,重组菌株经发酵和甲醇诱导,通过western blot检测目的蛋白的表达;透射电镜观察表达产物是否组装形成VLP;并通过动物试验评估VLP的免疫原性和攻毒保护效果。Western blot结果显示VP60蛋白能够在酵母内表达,电镜下观察到表达的VP60能够自发装配成大小均一的颗粒,与天然RHDV大小相当,约为30 nm～40 nm,表明表达的VP60可以自发组装成VLP。动物实验结果表明:表达的VLP与佐剂MONTANIDE GEL 01 PR混合后免疫实验兔,能够刺激实验兔产生保护性抗体,免疫后21 d攻毒,对实验兔的保护率达100%,且保护性抗体至少可以持续6个月。本研究利用毕赤酵母表达了RHDV的VLP,为研制RHDV亚单位疫苗奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年03期）
蒋慧慧[2]（2017）在《毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展》一文中研究指出毕赤酵母是真核细胞常用表达系统之一,具有细胞密度高、纯化方法简单、转录后修饰功能完善等优点。作为重要的调控元件,表达系统中启动元件的功能强弱与表达效率的高低密切相关。目前,毕赤酵母表达系统中常用的启动元件分为叁类,分别是以p AOX为代表的甲醇诱导型、以p GAP为代表的非甲醇诱导型,还有一些新型工业酵母启动子也是理想的表达系统启动元件。充分了解这些酵母启动子的最新研究进展,可以为工业酵母表达系统的优化提供重要的发展思路。(本文来源于《巢湖学院学报》期刊2017年03期）
傅小蒙,孔令聪,裴志花,刘树明,马红霞[3]（2015）在《毕赤酵母表达系统优化策略概述》一文中研究指出毕赤酵母(Pichia pastor)表达系统是近年发展起来的一种高效表达外源蛋白的系统,利用该系统表达外源基因具有良好的应用前景。尽管毕赤酵母表达系统具有比较完备的基因表达调控机制和对真核基因表达产物的加工修饰能力,但由于基因本身及表达系统等诸多因素,仍然存在外源蛋白表达产量很低甚至不表达的情况。针对毕赤酵母表达系统这一因素,对表达载体的优化,毕赤酵母菌株优化及发酵条件优化进行了综述,以期为外源基因在毕赤酵母中的高效表达提供理论基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年10期）
朱泰承,李寅[4]（2015）在《毕赤酵母表达系统发展概况及趋势》一文中研究指出毕赤酵母经过20多年的发展,在实验室和工业规模都取得了广泛的应用。文中从工业技术应用的角度,综述了近年来毕赤酵母在蛋白表达、遗传操作方法以及化学品生产方面取得的成果,同时对毕赤酵母系统存在的问题以及未来的研究方向进行了分析和展望。(本文来源于《生物工程学报》期刊2015年06期）
蔡鹏,姜宁,张爱忠,朱双,任文[5]（2015）在《毕赤酵母表达系统应用于抗菌肽表达的研究进展》一文中研究指出抗菌肽是一类具有生物体固有免疫反应的小分子多肽,其在毕赤酵母表达系统中的研究已经非常广泛,成果显着。文章以如何获得高水平表达及高产量分泌蛋白为目的,分析了抗菌肽自身及毕赤酵母表达系统双方面的影响。从启动子、密码子、载体、宿主、发酵条件等方面综合论述,并对抗菌肽及毕赤酵母表达系统的发展前景进行了探讨。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2015年11期）
皇甫洁[6]（2015）在《基于模拟微重力响应下毕赤酵母外源蛋白质高效表达系统的调控》一文中研究指出目前许多研究发现多种微生物在模拟微重力环境下的生理代谢和基因表达都发生了很大的变化。毕赤酵母因其对外源蛋白质经济高效的表达,是目前最引起关注的真核表达系统之一。本论文研究组成型重组毕赤酵母在模拟微重力(SMG)环境下单批次培养及长期继代培养过程中外源蛋白质表达特点;通过差异蛋白质组学研究诱导型重组毕赤酵母在SMG环境下促进外源蛋白质表达的关键代谢通路;对蛋白质组学和前期获得的转录组学数据挖掘,通过共表达方法筛选可促进外源蛋白质表达的功能基因;研究不同类型功能基因共表达方式与底盘酵母细胞适配性。主要结果有:(1)组成型毕赤酵母在SMG环境单批次培养及长期继代培养过程中:反应器较高转速所创造的SMG环境有利于酵母细胞增殖,促进外源蛋白质表达;SMG环境发酵液维持低pH,有利于外源蛋白质积累;SMG环境对细胞产生氧化胁迫,参与氧化胁迫应答的基因过表达,辅助蛋白质正确折迭。(2)差异蛋白质组学分析SMG环境下诱导型毕赤酵母外源蛋白质表达过程中代谢机制,发现甲醇代谢和糖类代谢、氧化胁迫应答、翻译和折迭及其他代谢途径的蛋白质过表达可以复制蛋白质正确折迭。其中参与氧化胁迫应答的相关蛋白起重要作用。(3)对组学数据挖掘,验证差异表达蛋白质对提高毕赤酵母外源蛋白质产量有影响的辅助基因,发现氧化还原应答途径的硫醇过氧化物酶PRX1和TPX、激活氧化应答途径的转录因子YAP1,分子伴侣AHA1,转运相关蛋白YPT6,可以显着提高外源蛋白质的产量。(4)研究获得功能基因模块与底盘宿主的适配性,发现:TPX单拷贝表达,PRX1和YPT6、PRX1和YAP1单拷贝协同表达,低转录强度启动子MCM1调控单拷贝YAP1过表达可以明显提高毕赤酵母外源蛋白质产量。(本文来源于《北京理工大学》期刊2015-06-01）
毛银平[7]（2015）在《毕赤酵母表达系统糖基化修饰改造研究》一文中研究指出随着蛋白质药物需求量的递增,酵母表达系统逐渐引起人们的关注。基因工程的快速发展,使酵母的人源化改造成为可能。本实验室前期已经通过二次同源重组技术成功敲除毕赤酵母的α-1,6-甘露糖转移酶(OCHlp)基因,阻断了酵母的高甘露糖基化途径,得到了过度糖基化缺陷株GJKOI (OCHI-),然后把酿酒酵母α-1,2-甘露糖苷酶(MnsI)基因内质网定位信号与来自拟南芥的α-1,2-甘露糖苷酶I(α-1, 2-mannosidase I, MDS I)基因融合,定点整合到毕赤酵母基因组上,获得了能够合成哺乳动物Man5GlcNAc2复杂型甘露糖型的人源化糖基工程酵母,部分实现了酵母的人源化改造,已用于蛋白质药物的表达。但是酵母表达系统仍然存在一些缺陷,影响了它的推广,这其中就包括糖基工程酵母N-糖基化不完全和过度O-糖基化的问题,我们对此开展了研究。对于酵母N-糖基化修饰不完全的问题,我们采用导入外源N-糖基转移酶的方式予以改善。利用尿嘧啶(URA3)营养缺陷型筛选标记,在酵母菌株4-32中转入醇氧化酶启动子(alcohol oxidase promoter, AOX1)控制的利士曼原虫N-糖基转移酶(stauroporine and temperature sensitivity3, STT3)D亚基,构建一株过表达N-糖基转移酶的糖基工程酵母菌株4-32-STT3D。通过SDS-PAGE, Western Blot和N-糖肽酶(peptide-N-asparigine amidase F, PNGase F)酶切等方法,分析其表达的抗HER2抗体(anti-human epidermal growth factor receptor 2)的N-糖基化程度。SDS-PAGE结果显示,4-32-HL酵母菌表达的抗HER2抗体除与哺乳动物细胞表达的商业化的抗体有相同的55×103左右的重链主带外,还有一条相对分子质量约为50×103的条带. PNGase F酶切后,上述重链均呈50×103的均一条带,WesternBlot分析证明这些条带均为抗体成分。则50×103的均一条带条带即为未糖基化的抗体重链。而转入STT3D的工程菌4-32-HL-STT3D菌表达的抗HER2抗体则为均一的55×103条带,无未糖基化的50×103条带。用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)作为报告蛋白验证STT3D的作用,SDS-PAGE发现普通糖基工程酵母菌4-32-GMCSF表达的GM-CSF呈现为22×103和20×103的两条带,而转入STT3D后的4-32-GM-CSF-STT3D工程菌表达的则为均一的22×103条带。PNGase F酶切后,这些条带均为相对分子质量约18×103的均一条带。由于GM-CSF有Asn27,Asn37两个N-糖基化位点,所以推测22×103是两个位点均发生了糖基化形成的条带,20×103是仅一个位点发生糖基化形成的条带。考虑到STT3D表达载体由AOX1甲醇诱导型启动子控制启动,所以我们分别研究了STT3D基因非诱导和STT3D诱导时对酵母生长的影响。统计学分析显示STT3D非诱导时,转入STT3D的4-32-HL-STT3D菌(+STT3D)与未转入STT3D的阴性对照菌4-32-HL(-STT3D)生长情况相比,p=0.032>0.01,说明两者无显着区别,提示STT3D非诱导时对酵母生长没有影响；STT3D诱导时,p<0.0001,两者差异性显着,提示STT3D诱导表达对酵母生长影响十分明显。另一方面对于酵母过度O-糖基化修饰的问题,常规手段是采用敲除的方式阻断基因表达,但是考虑到酵母O-糖基转移酶PMTs对酵母生长是不可或缺的,敲除致死,拟采用可诱导的阻遏方式抑制该过程。根据参考文献报道的CRISPR-Cas9具有的靶向敲除功能,将Cas9突变为dcas9,并由dcas9设计成由诱导型启动子D6控制诱导表达,这样dcas9既保留了与靶位点特异性结合的能力,又失去了核酸内切酶活性,还具有诱导控制PMTs基因启动的特点。为了让dcas9阻遏蛋白进入细胞核发挥作用,我们采用了在dcas9基因的3’端融合核定位信号(nuclear localization sequence, NLS)编码区和在dcas9基因的5’端和3’端均融合NLS编码区两种策略。pmt-gRNA基因由pmt1-gRN、pmt2-gRNA和pmt4-gRNA基因串联形成,其转录出的pmt1-gRNA, pmt2-gRNA和pmt4-gRNA mRNA分别锚定到pmt1、pmt2和pmt4的转录起始位点上游,由此构建了pGE-D6-dcas9-pmt-gRNA和pGE-D6-NLS-dcas9-pmt-gRNA两种靶向阻遏载体,利用尿嘧啶(URA3)营养缺陷型筛选标记转入酵母JC3O7 (ura3-,his-)菌。再将仅有O-糖基化位点而不具有N-糖基化位点的粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor, G-CSF)导入JC307 (ura3-, his-)作为报告蛋白,诱导表达后质谱分析两种靶向阻遏载体表达的阻遏蛋白对G-CSF的O-糖基化抑制效果。MALDI-TOF-MS质谱结果显示,无dcas9的阴性对照菌表达的G-CSF两个峰值有9803.2,19612.9两个峰值,仅C端含NLS的dcas9菌株表达的G-CSF有9801.9,19614两个峰值,和阴性组峰值接近,表明该方式融合的CRISPR-dcas9靶向阻遏系统无抑制O-糖基化的作用：而dcas9的两端均有NLS的菌株表达的G-CSF有四个峰值：9645.4,9806.9,19296.3和19620.7,其中9806.9和19620.7与阴性组峰值接近,另外还出现的19296.3峰和19620.7相差324.4,约是两个甘露糖残基的相对分子质量,提示G-CSF O-糖基化程度减弱,说明该方式融合的CRISPR-dcas9靶向阻遏系统发挥了作用,一定程度上抑制了G-CSF的过度O-糖基化修饰。(本文来源于《安徽大学》期刊2015-05-01）
任耀军,孙慧兰,颜赛勋[8]（2014）在《一种快速制备毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的方法》一文中研究指出文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。(本文来源于《新疆师范大学学报(自然科学版)》期刊2014年04期）
朱井玲,汪海燕,王旭晖,黄瑾[9]（2014）在《Neuritin毕赤酵母分泌表达系统的构建》一文中研究指出为构建Neuritin毕赤酵母分泌表达系统,进一步得到高纯度的具有天然活性的Neuritin蛋白提供实验基础。采用人工合成去除信号肽的neuritin基因并在N端引入His标签序列,两端引入Eco RⅠ和NotⅠ酶切位点,克隆至p PIC9K分泌型表达载体。重组质粒经PCR与测序鉴定正确后电击转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,经MD平板与G418平板筛选阳性重组子,抽提毕赤酵母基因组PCR鉴定重组质粒的插入。结果显示,p PIC9K-neuritin重组质粒经测序鉴定完全正确,电转后成功插入毕赤酵母基因组中。由此可知,成功构建Neuritin的毕赤酵母分泌表达系统。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2014年06期）
胡亚冬,谢春芳,姚冬生[10]（2013）在《用于毕赤酵母表达系统的生物积块的构建及验证》一文中研究指出生物积块(BioBrick)是合成生物学(Synthetic Biology)的一项重要内容,每一个积块都拥有标准化接头,积块之间按一定操作流程可以任意组装形成更高层次的系统。这些标准化的部件和操作流程形成了合成生物学区别于现有生物学其他学科的主要特点,即"工程化"。将合成生物学新颖的设计理念和工程化的本质引入到异源表达系统中,不仅可以使单个表达系统的构建显得简便易行,而且更方便研究人员对表达系统的改造和多方向探索。"转移一个基因,表达一种蛋白质"的模式将被改变,一个表达系统中(本文来源于《第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2013-11-14）
毕赤酵母表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
毕赤酵母是真核细胞常用表达系统之一,具有细胞密度高、纯化方法简单、转录后修饰功能完善等优点。作为重要的调控元件,表达系统中启动元件的功能强弱与表达效率的高低密切相关。目前,毕赤酵母表达系统中常用的启动元件分为叁类,分别是以p AOX为代表的甲醇诱导型、以p GAP为代表的非甲醇诱导型,还有一些新型工业酵母启动子也是理想的表达系统启动元件。充分了解这些酵母启动子的最新研究进展,可以为工业酵母表达系统的优化提供重要的发展思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毕赤酵母表达系统论文参考文献
[1].尹曼曼,楼觉人.利用毕赤酵母表达系统表达兔出血症病毒样颗粒及其免疫原性研究[J].中国预防兽医学报.2019
[2].蒋慧慧.毕赤酵母表达系统中启动元件的研究进展[J].巢湖学院学报.2017
[3].傅小蒙,孔令聪,裴志花,刘树明,马红霞.毕赤酵母表达系统优化策略概述[J].中国生物工程杂志.2015
[4].朱泰承,李寅.毕赤酵母表达系统发展概况及趋势[J].生物工程学报.2015
[5].蔡鹏,姜宁,张爱忠,朱双,任文.毕赤酵母表达系统应用于抗菌肽表达的研究进展[J].黑龙江畜牧兽医.2015
[6].皇甫洁.基于模拟微重力响应下毕赤酵母外源蛋白质高效表达系统的调控[D].北京理工大学.2015
[7].毛银平.毕赤酵母表达系统糖基化修饰改造研究[D].安徽大学.2015
[8].任耀军,孙慧兰,颜赛勋.一种快速制备毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的方法[J].新疆师范大学学报(自然科学版).2014
[9].朱井玲,汪海燕,王旭晖,黄瑾.Neuritin毕赤酵母分泌表达系统的构建[J].石河子大学学报(自然科学版).2014
[10].胡亚冬,谢春芳,姚冬生.用于毕赤酵母表达系统的生物积块的构建及验证[C].第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2013
论文知识图
