一株高效降解羽毛废弃物菌株的筛选及表达条件优化

论文摘要

筛选和构建高效降解羽毛角蛋白的菌株,以提高角蛋白酶分泌表达量。从全国5个不同地方的猪、羊圈土壤中取样,在牛奶平板上进行初筛,以羽毛为唯一碳氮源对产角蛋白酶菌株进行复筛。通过形态学观察、16S rDNA序列分析,对菌株进行分类鉴定。为进一步提高菌株的发酵活力,筛选和优化了5个不同来源的信号肽序列（KerK、YoaW、DacB、NprE和SacB）,选用pWB980作为表达载体,构建重组质粒并转化到Bacillus subtilis WB600进行表达。获得一株高效降解羽毛的菌株M,经鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。37℃发酵培养48 h后,菌株M角蛋白酶酶活力为21.98 U/mL。通过筛选和优化信号肽,获得含有信号肽DacB的重组菌株R3-DacB,该菌株分泌表达角蛋白酶活力最高,达到了226.34 U/mL,是初始菌株M的10倍。获得了一株降解羽毛废弃物效果较好的重组菌株R3-DacB,对角蛋白酶实现工业化生产具有重要意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 土样
•     1.1.2 LB培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 产角蛋白酶菌株的筛选
•     1.2.2 菌落和菌体形态观察
•     1.2.3 角蛋白酶活力的测定
•     1.2.4 分子生物学鉴定
•     1.2.5 角蛋白酶基因的获取
•     1.2.6 表达载体的构建
• 2 结果
•   2.1 产蛋白酶菌株的初筛与复筛
•   2.2 形态学观察及菌株鉴定
•   2.3 角蛋白酶基因kerK及重组载体的构建
•   2.4 重组菌株初筛
•   2.5 发酵上清液的SDS-PAGE检测
•   2.6 不同信号肽对角蛋白酶分泌的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张钰文,袁航,于江悦,马晓晓,史超硕,李玉

关键词: 角蛋白酶,异源表达,信号肽,芽孢杆菌

来源: 生物技术通报 2019年09期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,环境科学与资源利用

单位: 工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院

基金: 国家重点研发计划(2017YFB0308401),大学生创新创业训练计划(201810057131)

分类号: X172

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0370

页码: 93-98

总页数: 6

文件大小: 3688K

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