论文摘要
实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）广泛应用于基因转录水平的差异分析.选择稳定表达的参比基因,设计理想的参比引物扩增参比基因进而对样本进行标准化处理是得到可靠的qRT-PCR分析结果的前提.地钱具有基因组小、生长周期短、易于培养繁殖、转基因效率高等优势,已成为一种新兴的合成生物学模式植物.植物合成生物学的研究产生了大量的转基因和突变系等地钱材料,同时也提出了在地钱底盘中提升qRT-PCR的效率和可靠性,从而快速准确分析外源以及内源基因表达水平的现实需求.对地钱基因组进行生物信息学分析发现,地钱中参比基因ACT7存在两个高度同源的基因序列,其中任一基因的表达均不太稳定,但两个基因的表达存在一定的互补性.为了在地钱中构建简易、高效的qRT-PCR分析体系,利用数学模型,分析qRT-PCR误差传导机制,建立参比引物的综合评价指标体系.研究发现,能够同时扩增两个ACT7高度同源基因的共退火引物对应的表达水平更为稳定,其中编号为3～6的引物在扩增效率、表达水平及稳定性等多个指标上表现均衡优越,从而开发了一种在地钱中快速准确检测基因表达水平的qRT-PCR平台技术,同时也为在其他物种中如何优化qRT-PCR检测体系指明方向.
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 苗志奇,周璐,徐美慧
关键词: 实时荧光定量,地钱,参比基因,共引物设计
来源: 天津大学学报(自然科学与工程技术版) 2019年06期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: 上海交通大学农业与生物学院
基金: 国家自然科学基金资助项目(30700061),上海科技支撑计划资助项目(144319057001),国家重点基础研究发展计划(973计划)资助项目(2015CB755700)~~
分类号: Q78
页码: 661-668
总页数: 8
文件大小: 2075K
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