导读:本文包含了生茸类干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鹿茸,Gal-1基因,RNAi,生茸区骨膜细胞
生茸类干细胞论文文献综述
秦欣欣[1]（2013）在《梅花鹿生茸区骨膜干细胞Galectin-1基因RNAi重组慢病毒载体的构建》一文中研究指出当代，随着养鹿产业的快速发展，鹿肉在欧洲很多国家已成为一种餐桌食品，但在一些东南亚国家例如中国、日本等，人们更注重的是鹿茸的价值。鹿茸在中医药学中具有提高机体免疫力、抗衰老、促进创伤愈合和骨质修复等作用，被广泛的用于治疗或滋补。鹿茸是哺乳动物中唯一能周期性完全再生的附属器官，是研究哺乳动物器官修复及再生的绝佳生物模型。鹿茸的再生源于生茸干细胞，最快生长速度可以达到1～2cm/d，媲美癌细胞，但高速的生长并未使鹿茸发生癌变，这为癌症的研究提供了新的医学模型。Galectin-1（半乳糖凝集素1）分子量约为14kDa，是一种糖结合蛋白，动物凝集素家族的成员之一。Galectin-1（Gal-1）与神经修复、血管再生、软骨形成等多个生物过程相关，现阶段对它的研究主要集中在癌变过程中，也有其在胚胎发育过程中的研究报道。鹿茸的再生过程涉及了神经、血管、软骨、皮肤等的生长，研究表明，Gal-1在生茸干细胞中的表达量与普通细胞中的不同，在两种生茸干细胞之中的表达量也不相同。令人感兴趣的是，Gal-1在生茸干细胞中的大量表达并未引起鹿茸的癌变，也就是说，研究Gal-1在鹿茸再生机制中的作用十分重要的。本实验采用慢病毒载体介导的RNAi（RNA interference）技术，以生茸区骨膜干细胞为研究对象，为后期在离体条件下探讨Gal-1在鹿茸血管、神经、软骨形成中的作用及活体研究打下基础。总体实验设计如下：利用在线设计软件、通用设计法则及文献报道进行RNAi高分靶位点的筛选，使用NCBI中的Blast工具除去脱靶效应（offtarget）情况。根据实验室经验设计shRNA（短发夹RNA）寡核苷酸链，进行化学合成。将化学合成的shRNA正义链和反义链进行体外退火，使其形成双链，并插入经过酶切的载体质粒进行重组连接。对重组质粒进行PCR初步鉴定，测序进一步鉴定；将重组成功的载体质粒pLVTHM及包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G，进行无内毒素的大量提取，使用罗氏转染试剂，共转染293t细胞，分别在24h和48h时收集、浓缩病毒。将采集的生茸区骨膜进行细胞原代培养，利用浓缩病毒液感染生茸区骨膜干细胞，并在72h后利用倒置荧光显微镜观察感染效果。结果：首先，成功筛选出2条针对梅花鹿Gal-1基因的RNAi高分靶位点，成功将化学合成的shRNA正义链与反义链进行体外退火形成双链核苷酸链；其次，根据实验需要成功重组了载体质粒pLVTHM；然后，利用慢病毒叁质粒系统成功转染了293t细胞，获得了大量的重组慢病毒粒子；同时，成功对生茸区骨膜干细胞进行了原代培养，并获得感染成功的生茸区骨膜干细胞。结论：本实验成功构建出针对梅花鹿Gal-1基因的慢病毒载体，获得大量的浓缩病毒液且成功感染鹿生茸区骨膜干细胞，获得了能够遗传的，Gal-1有效沉默的生茸区骨膜干细胞系，为Gal-1基因的功能研究打下了基础。(本文来源于《江苏科技大学》期刊2013-05-02）
鲁晓萍,赵海平,杨福合,秀梅,李春义[2]（2010）在《梅花鹿生茸区骨膜干细胞cDNA表达文库的构建》一文中研究指出本研究提取鹿生茸区骨膜干细胞RNA,进而纯化mRNA,利用Oligo(dT)引物反转录合成双链cDNA,然后在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并酶切,将cDNA分子定向连接到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体中,经过柱分级分离后,体外包装成初级文库,进行文库库容量测定和扩增,初级文库库容量约为1.5×10~6pfu/毫升。PCR检测cDNA文库的质量表明,插入片段均分布在300bp以上。因此,我们认为我们已在鹿茸的研究史上成功地构建了梅花鹿鹿生茸区骨膜干细胞的cDNA文库,为进一步开展鹿茸发育的分子生物学研究奠定了基础。(本文来源于《2010中国鹿业进展》期刊2010-08-28）
赵海平,杨福合,邢秀梅,崔学哲,李春义[3]（2010）在《梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体的制备及滴度测定》一文中研究指出为了获取梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体。本试验培养了梅花鹿生茸骨膜干细胞,从该细胞中提取可溶性总蛋白。以其可溶性总蛋白为抗原,通过淋巴结和皮下注射两种方式免疫试验动物,注射的抗原量分别为70微克/只和280微克/只。分别于末次免疫后第10天和第20天采血,分离血清,通过ELISA试验检测血清中抗体滴度。结果表明,280微克皮下免疫和70微克淋巴结免疫均获得了较好的免疫效果,末次免疫后第10天的抗体滴度较高。(本文来源于《2010中国鹿业进展》期刊2010-08-28）
赵海平,杨福合,邢秀梅,崔学哲,李春义[4]（2010）在《梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体的制备及滴度测定》一文中研究指出为了获取梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体。本试验培养了梅花鹿生茸骨膜干细胞,从该细胞中提取可溶性总蛋白。以其可溶性总蛋白为抗原,通过淋巴结和皮下注射两种方式免疫试验动物,注射的抗原量分别为70μg/只和280μg/只。分别于末次免疫后第10天和第20天采血,分离血清,通过ELISA试验检测血清中抗体滴度。结果表明,280μg皮下免疫和70μg淋巴结免疫均获得了较好的免疫效果,末次免疫后第10天的抗体滴度较高。(本文来源于《特产研究》期刊2010年01期）
鲁晓萍,赵海平,杨福合,邢秀梅,李春义[5]（2009）在《梅花鹿生茸区骨膜干细胞cDNA表达文库的构建》一文中研究指出鹿茸是雄鹿额部生长出来的尚未骨化的嫩角,是雄鹿的第二性征,具有较高的药用价值。鹿茸是唯一的失去后还能完全再生的器官,它每天能生长1~2 cm,是生长最快的组织。鹿茸不会出现癌变特征,可以作为很好的器官再生研究模型。搞清楚鹿茸再生机制将为动物组织器官再生提(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2009年19期）
赵丽红,冯海华,范君文,吴建英,张学明[6]（2006）在《梅花鹿生茸干细胞的分离培养》一文中研究指出鹿茸骨膜由外层的纤维层和内层的细胞层组成,结构类似于胚胎早期的结缔组织。本实验取10-12月龄梅花鹿,茸角处于角柄阶段,形成了高约2cm的额侧嵴。眠乃宁全身麻醉后,用环切方式摘除顶部带有生茸骨膜的组织,置入盛有D-hank’s液或无血清培养液的叁角瓶中,PBS缓冲液冲洗叁次,洗净血污,在无菌操作台中剪去皮肤组织,将骨膜与下层的前软骨和软骨组织分离,放入小瓶内,用眼科剪将组织充分剪碎,先后用0．25％胰酶和1mg／ml Ⅱ型胶原酶消化,边消化边在倒置显微镜下观察细胞的分离状况,防止消化过度,然后移入离心管中,以1000r／min的速度离心,离心后弃去消化液,用含血清的DMEM培养液吹打制成细胞悬液,接种于培养瓶中,放入5％CO2培养箱中,37℃条件下培养。倒置显微镜下观察,细胞呈梭形或多边形,碱性磷酸酶鉴定呈阳性,具有干细胞的结构特点。这些细胞传至第四代后仍具有较强的增殖活性,经诱导可分化为软骨细胞,Ⅱ型胶原和甲苯胺蓝染色为阳性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集》期刊2006-08-01）
董红[7]（2006）在《新疆马鹿生茸类干细胞的研究》一文中研究指出马鹿属国家二级保护野生动物,鹿茸在药用、保健、美容等方面的功效十分显着,产品倍受青睐,是值得开发利用的资源之一。本研究以马鹿鹿茸为实验材料,对其解剖结构和鹿茸骨膜超微结构进行了观察,对生茸类干细胞进行了培养和鉴定,结果如下:1.鹿茸组织胶原纤维丰富,细胞数量少,分布不均匀,种类少,主要位于茸骨骨膜层,细胞呈长梭形,核质比高,核仁明显,个别为双核仁,细胞器少,符合成体干细胞的特征。2.建立了马鹿耳部皮肤成纤维细胞和马鹿生茸类干细胞的培养方法和培养体系。3.鹿茸类干细胞以hDMEM培养液效果较好,采用FCS与NCS 1:2混合培养效果较好,原代培养添加20%血清为宜,传代以10%为宜,添加FGF、雄激素、胰岛素生长因子有助于鹿茸细胞的生长,鹿茸细胞对接种密度较敏感,以106个/毫升为宜,太高或太低易引起细胞衰老和分化。4.鹿茸类干细胞具有贴壁生长特性,在原代培养早期,主要为宽大扁平的成纤维细胞样,生长密集时呈旋涡状或鸟巢状,传至第3代出现衰老,在体外培养条件下,能够自发分化为前成骨细胞和软骨细胞。5.鹿茸细胞采用常规细胞DMSO冻存法复苏贴壁率优于程序式冻胚仪冷冻法、乙二醇常规细胞冻存法。6.建立的鹿茸类干细胞系经AKP染色呈阳性,通过观察培养形态、电镜分析也已证明分离得到鹿茸类干细胞,完全符合干细胞鉴定特征。(本文来源于《石河子大学》期刊2006-03-01）
生茸类干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究提取鹿生茸区骨膜干细胞RNA,进而纯化mRNA,利用Oligo(dT)引物反转录合成双链cDNA,然后在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并酶切,将cDNA分子定向连接到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体中,经过柱分级分离后,体外包装成初级文库,进行文库库容量测定和扩增,初级文库库容量约为1.5×10~6pfu/毫升。PCR检测cDNA文库的质量表明,插入片段均分布在300bp以上。因此,我们认为我们已在鹿茸的研究史上成功地构建了梅花鹿鹿生茸区骨膜干细胞的cDNA文库,为进一步开展鹿茸发育的分子生物学研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
生茸类干细胞论文参考文献
[1].秦欣欣.梅花鹿生茸区骨膜干细胞Galectin-1基因RNAi重组慢病毒载体的构建[D].江苏科技大学.2013
[2].鲁晓萍,赵海平,杨福合,秀梅,李春义.梅花鹿生茸区骨膜干细胞cDNA表达文库的构建[C].2010中国鹿业进展.2010
[3].赵海平,杨福合,邢秀梅,崔学哲,李春义.梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体的制备及滴度测定[C].2010中国鹿业进展.2010
[4].赵海平,杨福合,邢秀梅,崔学哲,李春义.梅花鹿生茸骨膜干细胞可溶性总蛋白抗体的制备及滴度测定[J].特产研究.2010
[5].鲁晓萍,赵海平,杨福合,邢秀梅,李春义.梅花鹿生茸区骨膜干细胞cDNA表达文库的构建[J].黑龙江畜牧兽医.2009
[6].赵丽红,冯海华,范君文,吴建英,张学明.梅花鹿生茸干细胞的分离培养[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集.2006
[7].董红.新疆马鹿生茸类干细胞的研究[D].石河子大学.2006