猪伪狂犬病毒gE蛋白的酵母表达及其单克隆抗体的筛选

论文摘要

为获得具有生物学活性的猪伪狂犬病毒（PRV）gE蛋白及其特异性单克隆抗体,利用电转技术将pPICZαA-gE重组质粒转入毕赤酵母X-33并筛选出阳性克隆,通过SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出PRV gE蛋白表达菌株。通过诱导表达获得gE分泌蛋白,并利用Ni柱进行纯化,应用Western blot、Dot blot、ELISA方法对纯化蛋白进行活性鉴定。同时将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合后通过免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）筛选单克隆抗体,并对单克隆抗体进行了反应性测定、效价测定及亚型鉴定。结果显示,PRV gE蛋白在毕赤酵母中成功表达,并获得了纯化蛋白,纯度达90%以上,且具有良好的生物学活性,与PRV阳性血清反应性良好;筛选到4株敏感性强、特异性良好的gE单克隆抗体,均可同时特异识别PRV gE蛋白及病毒,分别命名为2F10、4C10、9E1、10C3。综上,用酵母系统成功表达了PRV gE蛋白,并筛选到4株针对PRV gE蛋白的单克隆抗体。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 病毒、质粒和细胞
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 重组gE蛋白的表达及纯化
•     1.3.1 重组gE蛋白的表达
•       1.3.1.1 SDS-PAGE鉴定
•       1.3.1.2 Westen blot鉴定
•     1.3.2 重组gE蛋白的纯化
•     1.3.3 重组gE蛋白的活性鉴定
•       1.3.3.1 Dot blot鉴定
•       1.3.3.2 ELISA鉴定
•   1.4 PRV gE蛋白单克隆抗体的筛选
•     1.4.1 免疫小鼠
•     1.4.2 细胞融合
•     1.4.3 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）筛选阳性克隆
•     1.4.4 亚克隆
•     1.4.5 单克隆抗体的腹水制备
•   1.5 单克隆抗体的鉴定
•     1.5.1 单克隆抗体效价的测定
•     1.5.2 单克隆抗体与重组gE蛋白的反应性
•     1.5.3 单克隆抗体与病毒的反应性
•     1.5.4 单克隆抗体亚型的鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 重组gE蛋白的表达及纯化
•     2.1.1 重组gE蛋白的表达
•     2.1.2 重组gE蛋白的纯化
•     2.1.3 重组gE蛋白的活性鉴定
•   2.2 PRV gE蛋白单克隆抗体的制备
•   2.3 单克隆抗体的鉴定
•     2.3.1 单克隆抗体的效价
•     2.3.2 单克隆抗体与重组gE蛋白的反应性
•     2.3.3 单克隆抗体与病毒的反应性
•     2.3.4 单克隆抗体亚型的鉴定
• 3 结论与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王垚,金前跃,周稳,李旭锋,柴永笑,丁培阳,陈晓,邢云瑞,李艳华,郭军庆,张改平

关键词: 猪伪狂犬病毒,蛋白,毕赤酵母,单克隆抗体

来源: 河南农业科学 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学牧医工程学院,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心,西北农林科技大学

基金: 国家重点研发计划项目(2016YFD0500701)

分类号: S852.651

DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.10.020

页码: 133-139

总页数: 7

文件大小: 1142K

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