尼罗罗非鱼PPARδ的原核表达及其多抗制备和纯化

论文摘要

【目的】为研究尼罗罗非鱼过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）的表达情况,通过大肠杆菌表达系统表达PPARδ,纯化重组蛋白并获得多克隆抗体。【方法】对PPARδ进行生物信息学分析后设计特异性引物,扩增PPARδ,将其克隆至原核表达载体pET-B2m中,构建重组表达载体;重组质粒转入大肠杆菌B21并用IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物。用镍柱纯化重组蛋白后免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用间接ELISA技术检测抗体效价,Western Blot鉴定抗体的特异性。【结果】成功构建了原核表达载体pET-B2m-PPARδ,实现了重组蛋白的原核表达和纯化,重组蛋白以包涵体蛋白和可溶性蛋白2种形式存在,分子量约为90 kD;制备的多克隆抗体效价为1∶2 048 000,Western Blot检测结果表明该抗体能特异性识别尼罗罗非鱼PPARδ。【结论】成功实现了尼罗罗非鱼PPARδ重组蛋白的融合表达,在大肠杆菌中高效表达后纯化重组蛋白,免疫日本大耳兔获得了效价高、特异性强的多克隆抗体,为尼罗罗非鱼PPARδ的功能研究奠定了基础。

论文目录

• 0 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 PPARδ蛋白结构分析和抗原预测
•     1.2.2 PPARδ基因扩增及原核表达质粒构建
•     1.2.3 重组蛋白的表达和纯化
•     1.2.4 多克隆抗体制备和效价检测
•     1.2.5 抗体特异性的Western blotting分析
•     1.2.6 抗体纯化
• 2 结果与分析
•   2.1 跨膜区和抗原性分析
•   2.2 表达载体的构建
•   2.3 融合蛋白的诱导表达和纯化
•   2.4 多克隆抗体的效价测定
•   2.5 抗体特异性检测结果
•   2.6 抗体纯化结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 潘传燕,冯鹏霏,张永德,罗洪林

关键词: 尼罗罗非鱼,原核表达,多克隆抗体

来源: 福建农业学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 水产和渔业

单位: 广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31372553,31760765),广西重点研发计划项目(桂科AB16380074)

分类号: S917.4

DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2019.09.009

页码: 1053-1058

总页数: 6

文件大小: 1561K

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