导读:本文包含了纤维蛋白基因治疗论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:纤维蛋白,基因治疗,心肌梗死,基质,胰岛素,甘油,论文。
纤维蛋白基因治疗论文文献综述
李军[1]（2013）在《纤维蛋白基质承载的IGF-I基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病的研究》一文中研究指出近年来,干细胞移植修复损伤心肌一直是基础和临床研究的热点。骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)因为具有来源广泛、取材方便、无免疫原性以及不涉及伦理问题等优点在缺血性心脏病的治疗中应用最为广泛。胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I, IGF-I)是胰岛素家族的-种单链多肽类生长因子,作为生长因子生物学效应的主要介质,IGF-I在调节细胞增殖、分化及抑制细胞凋亡、坏死等方面具有重要作用。以往的研究表明,对小动物,山梗模型单独或联合应用MSCs和IGF-I进行治疗,均可不同程度的改善心肌梗死后的心功能。但将MSCs与IGF-I联合应用于和人类更为接近的大动物模型研究甚少,疗效尚不明确。并且,如何最有效地将干细胞与细胞因子联合起来,如何最大程度提高细胞移植手术安全性等问题也并不十分明了,而这恰恰正是关系到细胞治疗最终能否为临床所用的关键问题。因此本研究在对猪心梗模型进行优化的基础上,综合运用基因工程和组织工程技术,以多孔纤维蛋白基质为载体将IGF-I过表达MSCs稳转细胞株移植到猪的梗死心肌,观察其对梗死后心脏功能的影响以及在梗死心肌修复等方面的作用,并对其作用机制进行初步探讨。本文由四部分组成：第一部分猪骨髓间充质干细胞的分离及鉴定目的：研究猪骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离培养及向心肌细胞定向诱导分化的方法,并对所得MSCs及其分化结果进行鉴定；为心肌梗死的干细胞治疗提供种子细胞来源。方法： (1)采用密度梯度离心法,将MSCs从猪骨髓血液中分离出来,置于低糖DMEM中进行传代培养。利用换液的方法将其纯化。 (2)MTT法测定细胞P2、P5、P8增殖曲线：(3)台盼蓝染色细胞活性鉴定。(4)倒置相差显微镜观察其形态结构和生物学特性,通过台盼蓝染色、免疫细胞化学染色和流式细胞分选方法对其细胞膜CD44、CD90表型进行鉴定。 (5)5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导P2、P5代MSCs向心肌分化,计算心肌细胞的转化率。结果： (1)通过密度梯度离心联合贴壁筛选培养的方法,可以在体外分离培养出增殖能力强的猪MSCs,细胞生长状态良好,各代细胞形态基本一致；原代与传代培养细胞的生长曲线都为S型,但是传代培养的细胞生长速度比原代快。传代培养的结果显示,在经历了8代培养以后,猪MSCs才出现衰老征象。与原代培养细胞的生长曲线相比,传代培养的细胞生长潜伏期短,每代只要3～4天就可铺满培养皿底壁。(2)台盼蓝细胞活性结果：P2>P5>P8。(3)免疫荧光实验结果得知：CD44和CD90阳性表达率高于80%。 (4)在相同浓度的5-Aza作用下,MSCs向心肌细胞的转化率随着传代次数的增加逐渐降低。P2代心肌数量显着高于P5代。结论：本实验在体外成功培养了猪MSCs。5-Aza体外可诱导猪MSCs分化为心肌样细胞；P2代MSCs在浓度为10μmol/L的5-Aza作用下,诱导效果最明显。差显微镜观察其形态结构和生物学特性,通过台盼蓝染色、免疫细胞化学染色和流式细胞分选方法对其细胞膜CD44、CD90表型进行鉴定。 (5)5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导P2、P5代MSCs向心肌分化,计算心肌细胞的转化率。第二部分IGF-I慢病毒载体构建及感染猪骨髓间充质干细胞的初步研究目的：构建过表达和干扰IGF-I陧病毒表达载体Lenti-IGF-I,观察过表达和干扰IGF-I对5-Aza诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的影响。方法：使用工具质粒pCDH-GFP/pLKO.I-TRC和猪IGF-I基因相连接,构建出表达融合基因GFP-IGF-I重组质粒pCDH-GFP-IGF-I.利用在pCDH-GFP-IGF-I质粒的上下游引物中加入BamHI/EcoRI酶的酶切位点方法以及与Xhol酶是同尾酶的特点,将融合基因GFP-IGF-I与经BamHI/EcoRI晦双酶切的pCDH质粒相连接,转化DH5α感受态细胞中,构建的重组慢病毒转移质粒命名为pCDH-GFP-IGF-I,转化后挑选单克隆扩增进行PCR鉴定,正确克隆行测序鉴定。接着以脂质体转染法分别将重组质粒pCDH-GFP-IGF-I和包装质粒psPAX2、包膜蛋白质粒pMD2.G共同转染293T细胞,收获病毒。携带pCDH-GFP-IGF-I融合基因的慢病毒感染MSCs细胞后,经过荧光显微镜观察绿色荧光表达情况以明确慢病毒成功感染MSCs细胞。利用荧光实时定量PCR、蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法观察过表达和干扰IGF-I对5-Aza诱导MSCs分化为心肌的IGF、GATA-4、 NKX2.5、p-MHC和MEF-2c的变化。结果:通过PCR和测序鉴定重组质粒pCDH-GFP-IGF-I构建正确。重组质粒pCDH-GFP-IGF-I的PCR结果应为GFP-IGF-I融合基因片段大小约393bp,与双酶切pCDH-GFP-IGF-I释放出的片段大小一致,证明了融合基因成功插入pCDH质粒中。包装带有猪IGF-I基因序列的慢病毒并感染靶细胞,经过荧光显微镜观察,感染成功并且感染效率可达80%。荧光实时定量PCR、蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法结果得出,过表达IGF-I的MSCs田胞组IGF、GATA-4、NKX2.5、β-MHC和MEF-2c表达量显着高于其他组,siRNA-IGF-I的MSCs细胞组各指标显着低于其他组。结论：成功构建了猪IGF-I慢病毒表达载体Lenti-IGF-I, MSCs细胞高表达IGF-I时有利于向心肌分化。病毒感染MSCs细胞后,经过荧光显微镜观察绿色荧光表达情况以明确慢病毒成功感染MSCs细胞。利用荧光实时定量PCR、蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法观察过表达和干扰IGF-I对5-Aza诱导MSCs分化为心肌的IGF、GATA-4、 NKX2.5、p-MHC和MEF-2c的变化。第叁部分 猪心肌梗死/再灌注后左室重构模型的改进及其评价目的：评价采用阻断钝缘支和/或对角支建立猪急性心肌梗死/再灌注后左室重构模型的有效性和稳定性。方法：40只上海白猪随机分为3组；其中假手术组(Shame组)10只,改良组(OPTI组)和LAD组各15只。所有动物术前行心脏核磁共振(MRI)检查,记录基础数据。全麻气管插管后,经左侧第四肋间进胸,改良组采用选择性阻断左冠状动脉钝缘支和/或对角支；LAD组采用阻断左冠状动脉前降支远端1/3处,引起急性心肌梗死,阻断60分钟后,解除阻断恢复心肌血供；假手术组仅开胸观察60分钟后常规关胸。术中全程监测并记录心电图及血流动力学指标。存活动物术后4周复查MRI、记录血流动力学指标后处死。比较各组间解剖数据、血流动力学指标。比较改良组和LAD组手术死亡率、恶性心律失常发生率的差别；比较两组经过MRI检测所得出的左室射血分数(LVEF)变异度,收缩期室壁增厚率(STF)、收缩室壁张力(SWS)变异度及心梗面积(SS)变异度,进而判断改良法建立猪急性心梗模型的优劣。结果：改良组3例术中发生室颤(20%),2例死亡(13%)；LAD组6例术中出现室颤(40%),5例死亡(33%)。与对照组相比,手术4周后改良组和LAD组均有明显的梗死瘢痕形成,出现明显的梗死后代偿性左心室重构。MRI检测结果显示两模型组整体心功能均较假手术组有明显下降。改良组在梗死面积(SS)、和整体心功能(LVEF)方面的变异程度极显着低于LAD组(P<0.01),但两组间局部室壁收缩功能指标STF和SWS无显着性差异(P>0.05)。结论：冠状动脉左前降支(LAD)供血范围大,而且变异较多,以往使用的LAD结扎建立心梗模型的方法不仅死亡率高,而且所建模型稳定性差。采用选择性阻断左冠状动脉钝缘支(OM)和/或对角支(D)血供的改良法可成功建立梗死后/再灌注左心室重构模型。改良法建模不仅手术成功率更高,而且所建模型在梗死面积、左室整体收缩功能等方面的变异度均明显优于左前降支结扎法,为进一步评价干细胞对大动物急性心梗的治疗作用打下了坚实的基础。厚率(STF)、收缩室壁张力(SWS)变异度及心梗面积(SS)变异度,进而判断改良法建立猪急性心梗模型的优劣。第四部分多孔纤维蛋白基质承载的IGF-I基因修饰MSCs移植对猪心肌梗死的治疗作用及其机制目的：探讨以多孔纤维蛋白基质为载体行IGF-I基因修饰MSCs移植对猪心肌梗死的治疗作用和机制。方法：将从猪骨髓中分离出的间充质干细胞(MSCs)经基因修饰后分为仅GFP阳性表达之MSCs (cMSCs)、IGF-I干扰MSCs (siMSCs)及IGF-I过表达MSCs (oeMSCs),将这些MSCs用于猪心肌梗死模型,测试其疗效。2-3月龄雌性上海白猪31头,体重22-28kg,术前行MR扫描测定基础心功能数据。以改良法选择性阻断左冠状动脉系统左室面分支60min后恢复血供,建立急性心肌梗死／再灌注模型。恢复血供15分钟后将存活动物随机分为4组：对照组(MI,n=7)、cMSCs移植组(MI+cMSCs, n=7)、 siMSCs移植组(MI+si-IGF-I-MSCs, n=7)及oeMSCs移植组(MI+OE-IGF-I-MSCs, n=7)将包裹移植细胞的纤维蛋白基质粘附于各细胞移植组梗死区心外膜表面,将纤维蛋白基质包裹等量细胞培养液粘附于对照组病变处。分别于术后1周和4周行MRI检查,评估左室整体收缩功能(LVEF)、梗死节段心肌局部收缩功能(STF),测量心梗面积(SS)和心室容积,计算室壁张力(SWS)；比较各细胞移植组治疗效果。术后第4周MR检查后,对动物实施安死术,完成组织取材。通过组织学观察、免疫荧光染色、免疫组化、Western blot等技术从干细胞迁移分化,新生血管形成以及增殖相关指标IGF、Bcl-2口凋亡相关因子BAX表达情况等方面对IGF-I修饰MSCs移植后的作用机制进行研究。结果：MR检测发现,从术后1周起细胞移植组的LVEF和STF即较对照组有显着改善(P<0.05),此种改善可延续至术后4周,术后4周时oeMSCs组梗死面积和梗死边缘区STF明显优于siMSCs组；术后4周时,细胞移植组反应左室重构程度指标(LVW/BW)显着优于对照组(P<0.05),细胞移植组的收缩室壁张力(SWS)亦显着低于对照组(P<0.05)。手术4周后,组织学观察发现病变心肌心外膜缘仍有纤维蛋白基质附着；免疫荧光染色不仅证实细胞移植区仍有MSCs存活,还在梗死边缘区发现己有少量MSCs分化为心肌样细胞或与自体心肌发生细胞融合。oeMSCs组在梗死及边缘区血管密度均显着高于其他各组(P<0.05)。免疫组化及Western blot检测统计结果得知,过表达组IGF蛋白表达量显着高于其他各组(P<0.05)；Bcl-2和CD31蛋白表达量与IGF表达趋势是一致的,而凋亡相关蛋白BAX表达趋势与IGF恰相反。结论：多孔纤维蛋白基质是干细胞移植的优良载体,MSCs移植可有效改善心肌梗死后的左室重构,明显提高心功能,IGF-I过表达修饰的MSCs治疗效果优于单纯MSCs移植。其主要机制可能是通过提高移植MSCs存活率,增强MSCs旁分泌作用,从而更有效地促进梗死区尤其是梗死边缘区新生血管形成、减少缺血心肌细胞凋亡。(本文来源于《复旦大学》期刊2013-04-01）
宁远[2]（1995）在《在治疗NIDDM中确定血纤维蛋白溶酶原活化抑制因子1活性及与其基因多态性的关系》一文中研究指出据美国《Diabetes》1995年44卷第1期报道非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者体内血纤维蛋白溶酶原活化抑制因子1(PAI-1)活性升高,这可能与其患心血管病的危险性增加有关。英国Panahloo等对146例NIDDM病人进行了检查,通过(本文来源于《中华医学信息导报》期刊1995年08期）
纤维蛋白基因治疗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
据美国《Diabetes》1995年44卷第1期报道非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者体内血纤维蛋白溶酶原活化抑制因子1(PAI-1)活性升高,这可能与其患心血管病的危险性增加有关。英国Panahloo等对146例NIDDM病人进行了检查,通过
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纤维蛋白基因治疗论文参考文献
[1].李军.纤维蛋白基质承载的IGF-I基因修饰骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病的研究[D].复旦大学.2013
[2].宁远.在治疗NIDDM中确定血纤维蛋白溶酶原活化抑制因子1活性及与其基因多态性的关系[J].中华医学信息导报.1995
论文知识图
