全长聚合酶链反应论文_罗睿,张大明

导读:本文包含了全长聚合酶链反应论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:全长,序列,产物,基因,干扰,蛋白,形态。

全长聚合酶链反应论文文献综述

罗睿,张大明^[1]（2007）在《非全长链合成导致连续聚合酶链式反应(PCR)扩增失败和复杂产物的形成》一文中研究指出在进行连续PCR(以产物为模板进行多轮次的连续重复PCR扩增)实验时,我们观察到了一种新的异常现象——用不同来源的模板连续PCR扩增不同长度的靶序列最终都会导致扩增失败,表现为在常规琼脂糖电泳检测时特异产物条带的消失和不能泳动出点样孔之复杂异常产物的出现.连续PCR扩增失败的时期依扩增靶序列的长度不同而不同,越长的靶序列在连续PCR中扩增失败的时期越早.扩增得到的复杂产物主要由连续分布的小于靶序列长度的具有相当程度多样性的非全长链组成.复杂产物在内部具有局部的双链区域和大量的单链区域而在外部具有单链分支结构,能够被单链特异的S1核酸酶消化,但是不能被双链特异的限制性内切酶消化.人工处理完整双链形成的非全长链长产物与完整双链以不同比例混合后作为模板进行连续PCR,结果表明同源的非全长链成分对PCR扩增有严重的干扰作用.已有的证据表明PCR扩增过程中形成的非全长链成分是导致这种异常现象的关键因素,多个不同长度的非全长链复性形成“杂种分子”最终表现为复杂产物.连续PCR扩增失败、PCR介导重组和长片段PCR难于操作有共同的产生基础——扩增过程中非全长链成分的产生.任何降低PCR扩增过程中非全长链成分产生的措施,特别是聚合酶忠实性的提高,都能缓解异常扩增产物的出现和利于长片段PCR操作.(本文来源于《中国科学(C辑:生命科学)》期刊2007年03期）

俞莉敏,党耕町,杨吉成,郑祖根^[2]（2007）在《巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建》一文中研究指出目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第叁医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2007年14期）

闾宏伟,杨向东,何淑雅,杨永宗^[3]（2002）在《cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端延伸快速分离全长cDNA序列》一文中研究指出建立一种cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端快速扩增分离人类新基因全长cDNA序列的新技术。以文库载体序列与待扩增目的基因片段为模板各设计引物进行热启动聚合酶链反应扩增 ,从人胎肝cD NA文库中获得氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化过程中差异表达序列标签片段 (FRG4 )的全长cDNA序列 ,聚合酶链反应产物克隆到pGEM T载体中 ,并测序鉴定 ,从而成功获得FRG4的全长cDNA序列。该技术是一种快速有效的分离人类新基因全长cDNA序列的方法(本文来源于《中国动脉硬化杂志》期刊2002年05期）

全长聚合酶链反应论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第叁医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。