毕赤酵母Kex2蛋白酶的同源表达及酶学性质

论文摘要

Kex2蛋白酶是一种来源于酵母的前体加工蛋白酶。利用毕赤酵母（Pichia pastoris）同源表达来源于毕赤酵母的Kex2蛋白酶（PPKex2）,研究其表达特性和酶学性质,同时与毕赤酵母表达的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） Kex2蛋白酶（SCKex2）进行比较。首先,分别从毕赤酵母和酿酒酵母基因组中获得Kex2基因,将其插入到表达载体p PIC9K中,并转化毕赤酵母菌株GS115。重组菌株经甲醇诱导表达后,结果表明PPKex2的发酵上清液比活是SCKex2的7倍。Kex2蛋白酶经Q-FF强阴离子交换柱纯化后进行酶学性质研究。酶学性质研究结果表明,PPKex2的最适反应pH是8. 0～9. 0,最适反应温度是37℃,与SCKex2性质相近。在稳定性方面,PPKex2在pH 7. 0时最稳定,在碱性条件下的稳定性高于SCKex2,在酸性条件下的稳定性低于SCKex2,另外PPKex2的温度稳定性略低于SCKex2。酶促反应动力学研究表明,PPKex2的kcat和kcat/Km值分别为SCKex2的4. 8倍和3. 3倍。首次报道了同源表达毕赤酵母Kex2蛋白酶的表达特性及酶学性质,为其今后的研究及应用奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒与菌株
•   1.2 主要试剂与培养基
•   1.3 表达菌株的构建
•   1.4 Kex2蛋白酶菌株的表达
•   1.5 重组Kex2蛋白酶的纯化
•   1.6 Kex2蛋白酶酶活测定方法
•   1.7 Kex2蛋白酶酶学性质研究
•     1.7.1 最适pH和最适温度的测定
•     1.7.2 pH稳定性和温度稳定性的测定
•     1.7.3 动力学参数的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 PPKex2和SCKex2的序列分析
•   2.2 重组菌株的构建与表达
•   2.3 Kex2蛋白酶的纯化
•   2.4 Kex2蛋白酶的酶学性质
•     2.4.1 最适反应pH和最适反应温度
•     2.4.2 pH稳定性和温度稳定性
•     2.4.3 动力学参数的测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王彤,徐岩,喻晓蔚

关键词: 毕赤酵母,同源表达,酶学性质

来源: 中国生物工程杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,宿迁市江南大学产业技术研究院

基金: 国家自然科学基金面上项目(31671799),江苏省“大人才高峰”计划(NY-010)资助项目

分类号: Q55

DOI: 10.13523/j.cb.20190105

页码: 38-45

总页数: 8

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