·病例报告·
摘要：目的 2018 年在青海省河南县发生了1 起因牧民接触病死牦牛而引起的疑似炭疽疫情，河南县疾控中心采集了患者病灶渗出液并于当日送至黄南州疾控中心进行炭疽杆菌的分离鉴定。方法对采集的患者病灶渗出液标本进行分离培养，以生化、噬菌体裂解、青霉素敏感等实验进行鉴定。结果从患者标本中检出炭疽芽孢杆菌。结论炭疽芽孢杆菌的检出率与患者用药和采集标本及时性有很大关系。
关键词：疫情；炭疽芽孢杆菌；标本；及时性
0 引言
炭疽是由炭疽芽胞杆菌所引起的一种人畜共患急性传染病，人类炭疽主要是由于接触病、死畜或其皮毛而受感染[1]。
（2）中臺司中主宗室，上星應諸侯公王，下星應卿大夫，下臺司祿主兵。（《太上說玄天大聖真武本傳神呪妙經註》卷二，《中华道藏》30/550）
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2018 年在青海省黄南州河南县托叶玛乡宁塞大队发生了1 起因牧民接触病死牦牛而引起的皮肤炭疽疫情。患者在县医院就诊时出现了发热、伤口破溃、有黑色焦痂形成、周围红肿、无明显压痛等体征。当地疾控接到报告后立即采集了患者焦痂渗出液送至黄南州疾控中心进行分离鉴定。
1 材料与试剂
1.1 检样
患者疱疹分泌液。
1.2 培养基
普通琼脂、血琼脂、脑心沁肉汤培养基、克氏双糖铁培养基。
1.3 试剂
（1）疱疹分泌液（保存液）直接涂片革兰氏染色镜检。
2 方法与结果
炭疽芽孢杆菌诊断用噬菌体（兰州生物制品研究所生产）、青霉素（80 万IU/ 瓶，北京天坛生物药物科技开发公司生产）、20%甲醛溶液、无菌生理盐水、革兰氏染色液。
（4）挑取克氏双糖铁培养基斜面菌落划线接种普通琼脂平板，在平板中央滴入两滴炭疽杆菌噬菌体，培养12 h，观察结果。
结果：克氏双糖铁培养基37 ℃培养12 h 见该菌分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，不产生硫化氢，穿刺线有试管刷样生长。
结果：血平板培养后见菌落大小2～5 mm，灰白色、不透明、表面粗糙、边缘不整齐、呈毛玻璃样，不溶血，低倍镜观察菌落边缘呈卷发状。涂片革兰氏染色镜检发现革兰氏阳性粗大杆菌，竹节状，有荚膜。脑心沁肉汤培养基培养后呈絮状沉淀生长，肉汤透明，无菌膜和壁环。
（2）疱疹分泌液接种血平板培养基和脑心沁肉汤培养基，37 ℃培养12 h，观察细菌生长情况和菌落形态并涂片革兰氏染色镜检。
结果：经培养发现有明显噬菌斑，噬菌体试验阳性。
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结果：镜检未找见革兰氏阳性杆菌。
（3）挑选可疑菌落接种克氏双糖铁培养基37 ℃培养12 h，观察细菌生长情况。
（5）挑取斜面培养基菌落接种至3 管4.5 mL 脑心沁肉汤培养基，37 ℃水浴培养4 h，3 管分别加入0.5 mL 的5 U、10 U 青霉素和无菌生理盐水，培养1 h，每管再加入0.5 mL 20%甲醛溶液，静置10 min，弃去上清液，取沉渣滴于载玻片上，高倍镜镜检。
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结果：高倍镜镜检发现串珠形态杆菌，串珠试验阳性，确证为炭疽芽胞杆菌。
3 讨论
《中华人民共和国传染病防治法》中将炭疽列为乙类传染病，发生肺炭疽时要求按甲类传染病报告和处理。炭疽在我国30 个省（区）市都有过病例发生，大约有90%以上的发病数集中于西藏、青海等10 个省区[2]。黄南藏族自治州时有炭疽疫情散发，主要集中在泽库、河南两个牧业县，以皮肤炭疽多见，传染源以当地牛羊为主。但近年来因多数患者在采样之前大量使用抗生素药物及采样不及时、标本不合格而很少分离出炭疽芽孢杆菌[3]。2018 年河南县发生的这起炭疽疫情，由于采样前患者未服用任何药物，加之送检及时，在患者病灶渗出液标本分离出了典型的炭疽芽孢杆菌，并通过生化试验、噬菌体裂解及青霉素敏感试验得到了确证。近年来炭疽芽孢杆菌的检出率一直较低，这与样本采集的及时性和样本质量有很大关系。所以，提示大家对皮肤炭疽患者应在用药前采集合格标本，并及时送检，以提高炭疽芽孢杆菌的检出率。
参考文献
[1] 梁旭东.炭疽防治手册[M].北京：中国农业出版社,1995：12-77.
[2] 俞东征,海荣,杨瑞馥,等.WS283-2008.炭疽诊断标准[S].北京：中华人民共和国卫生部,2008.
[3] 马韶辉,汪春翔,葛华.两起炭疽突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离鉴定[J].中国人畜共患病学报,2010,27(7)：703-706.
Isolation and Identification of Bacillus Anthracis in Exudate From Lesions of Patients with Cutaneous Anthrax
LIANG Xiao-lin
(Huangnan Prefecture Center for Disease Control and Prevention, Huangnan, Qinghai, China)
ABSTRACT:Objective In 2018, a suspected anthrax epidemic occurred in Henan County of Qinghai Province due to herdsmen's contact with dead yaks. Henan CDC collected the exudate from the patient's focus and sent it to the CDC of Huangnan Prefecture for isolation and identification of anthrax bacilli on the same day. Methods The specimens of exudate from patient's lesions were isolated and cultured, and identified by biochemical, bacteriophage lysis and penicillin sensitivity tests. Results Bacillus anthracis was detected from the patient's specimens. Conclusion The detection rate of Bacillus anthracis is closely related to the timeliness of drug use and sample collection.
KEY WORDS: Epidemic situation; Bacillus anthracis; Specimens; Timeliness
中图分类号：R517.2
文献标识码：B
DOI：10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.87.162
本文引用格式：梁晓林.皮肤炭疽患者病灶渗出液中炭疽芽孢杆菌的1 例分离鉴定[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(87)：250-251.
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