人cGAS基因启动子的克隆鉴定及功能初探

论文摘要

目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS）基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法:采用PCR方法扩增人cGAS基因5′上游1 254 bp（-1 178～+76 bp）的片段,酶切后连接到pGL3-basic质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果:人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后,cGAS启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加（P<0.05）。人cGAS近端启动子区域（-414～+76 bp）经生物信息学软件分析可能含有Sp1、CREB、USF1、RAP1、C-JUN、OCT-1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论:人cGAS近端启动子区域（-414～+76bp）存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 细胞培养
•     1.2.2 基因组DNA的提取
•     1.2.3 生物信息学软件预测
•     1.2.4 克隆人cGAS基因启动子区序列
•     1.2.5 人cGAS基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建与鉴定
•     1.2.6 转染质粒进行荧光素酶功能分析
•     1.2.7 定点突变
•   1.3 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 生物信息学分析
•   2.2 人cGAS基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建
•   2.3 人cGAS基因启动子5′侧翼区缺失突变体的构建
•   2.4 cGAS启动子活性的检测
•   2.5 人cGAS基因启动子区转录因子结合位点预测
•   2.6 转录因子突变分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈海燕,徐妍妍,周国平,徐华国

关键词: 环鸟苷酸腺苷酸合成酶,启动子,转录调控

来源: 南京医科大学学报(自然科学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 南京医科大学第一附属医院检验学部,南京医科大学第一附属医院儿科

基金: 江苏省自然科学基金面上项目(SBK2018022334),江苏省研究生科研创新项目(KYCX17_1287)

分类号: Q78

页码: 856-861

总页数: 6

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