王艳付伟光韩希红（山东省寿光市人民医院山东寿光262700）
【摘要】目的探讨阿魏酸川芎醇酯对H2O2引起的体外培养人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法采用H2O2诱导体对培养的人脐静脉内皮细胞进入氧化应激状态，造成氧化损伤模型，观察阿魏酸川芎醇酯对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用，结果阿魏酸川芎醇酯能减少内皮细胞脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成，提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性，具有良好的抗氧化能力，从而对内皮细胞损伤起到很好的保护作用。
阿魏酸川芎醇酯在临床中有有活血化淤、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、抗血栓形成等作用，在临床上被广泛应用于各种缺血性心脑血管病的防治，但其体内代谢快，半衰期短，生物利用度低缺点，影响了药物疗效。以川芎嗪（TMP）为先导化合物，引入活性药物基团阿魏酸，合成阿魏酸川芎醇酯。
本实验采用H2O2诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞进入氧化状态造成氧化损伤模型，对察阿魏酸川芎醇酯对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用，报告如下：
方法：实验分组：将出于对数生长期的ECV304细胞胰酶消化后，用含10％FBS的RPMI—1640培养基混悬成单细胞悬液，计数，按照每孔1×105个细胞接种于6孔培养板中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后，将细胞随机分为以下几组：
1).正常对照组：用1640完全培养基正常培养ECV304细胞。
2).H2O2损伤组：加入终浓度150μmol／L的H2O2进行损伤。
3).TMP保护组：加入终浓度150μmol／L的H2O2的同时分别加入终浓度为12.51μmol／L，25μmol／L，50μmol／L，100μmol／L的TMP进行干预实验。
4).阿魏酸川芎醇酯保护组：加入终浓度150μmol／L的H2O2的同时分别加入终浓度为12.5μmol／L，251μmol／L，50μmol／L，100μmol／L的阿魏酸川芎醇酯进行干预实验。
实验步骤：进行处理的细胞在37℃，5％CO2培养箱中培养12h后，取出培养板，吸弃培养液，用PBS冲洗两遍，每孔加入200μl细胞裂解液，用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，1～2min细胞充分裂解后，10000～14000rpm，离心5min，取上清按如下步骤进行操作以测定胞内MDA含量及SOD含量。
结果：1.人脐静脉内皮细胞内MDA、SOD含量变化
与正常组比较，损伤组细胞内的MDA含量明显升高，且有统计学差异(p<0.01)。TMP与阿魏酸川芎醇酯各浓度保护组MDA含量明显低于损伤组，均有统计学差异，阿魏酸川芎醇酯各浓度组与损伤组比较差异显著(p<0.01)，阿魏酸川芎醇酯且保护组MDA含量均低于同剂量TMP保护组。
与正常组比较，损伤组细胞内的SOD水平明显降低，且有统计学差异(p<0.01)。在12.5μmol／LTMP保护组阿魏酸川芎醇酯和保护组与损伤组相比不存在统计学差异，在TMP和阿魏酸川芎醇酯的其它浓度上与损伤组相比均存在统计学差异，且阿魏酸川芎醇酯100μmol／L保护组与损伤组相比差异显著(p<0.01)。
附表
不同浓度阿魏酸川芎醇酯及TMP在内皮细胞氧化损伤后增殖率、MDA含量、SOD活性
讨论：SOD是体内重要的抗氧化酶，对细胞有保护作用。MAD是自由基导致的脂质过氧化产物，其异常增多能干扰细胞正常的生理代谢，这两者的变化能反映体内自由基的变化情况。内皮细胞氧化损伤后，细胞培养液MAD含量增加，SOD活性下降。阿魏酸川芎醇酯与TMP各剂量组均能损伤细胞MDA的生成，提高SOD活性。与同剂量组相比，阿魏酸川芎醇酯比TMP具有更高的活性，具有良好的抗氧化能力，从而对损伤的内皮细胞起到很好的保护作用。