论文摘要
TET（ten-eleven translocation）蛋白最初以在21世纪早期急性髓细胞白血病患者中鉴定的染色体易位命名,是存在于生物体内的一种α-酮戊二酸（α-KG）和Fe2+依赖的双加氧酶,在DNA去甲基化的过程具有催化作用的酶,对胚胎的发育起关键性作用。小鼠的精子和卵子结合后,会发生一系列的表观遗传重编程,其中很重要的DNA甲基化会发生一个改变,甲基化状态的改变主要发生在父本基因组上,发生去甲基化的一个过程。5mC是全基因组甲基化的代表性胞嘧啶,若基因发生去甲基化的过程,基因组5mC会氧化成为5hmC。而5mC和5hmC的表达量作为总体甲基化的评价标准。以上5mC会氧化成为5hmC的过程主要是TET蛋白主要利用氢键结合以及5mC嘧啶环的堆积作用将5mC转化为5hmC。抗坏血酸（Vc）是一种Fe2+和α-KG依赖性双加氧酶的辅助因子,是一种TET蛋白的激动剂,能够刺激TET蛋白的表达;而DMOG（二甲基烯丙基甘氨酸）是2-氧戊二酸辅因子的结构类似物,可作为2-氧戊二酸（2-OG）依赖性双加氧酶的小分子抑制剂,是一种TET蛋白的抑制剂,能够抑制TET表达。表观遗传修饰与小鼠的早期胚胎发育潜力具有很大的相关性,DNA甲基化被认为是参与印记的表观遗传修饰之一,被认为是一个主要的表观遗传修饰。甲基化印迹的异常可能孤雌胚胎发育失败的一部分原因。为了研究TET蛋白在孤雌胚胎发育中的作用,在早期胚胎发育期间的培养基中添加Vc和DMOG进行处理。结果显示,Vc处理可提高孤雌胚胎的囊胚率（26.57±0.53%与20.73±0.46相比）。可以显著的提高孤雌胚胎的发育能力。相比之下,DMOG降低了孤雌胚胎的囊胚率（11.18±0.13%与20.73±0.46相比）,对孤雌胚胎的发育起到抑制作用。我们利用实时定量PCR和免疫荧光染色的方法对孤雌胚胎中5mC和5hmC的表达以及三种TET蛋白的表达进行了分析,实时定量PCR和免疫荧光染色结果显示,与正常受精（Con）胚胎相比,孤雌胚胎（PA）中TET1,TET2和TET3表达都显着降低。我们的结果表明,在孤雌胚胎中Vc刺激了TET,促进了蛋白的表达。而用DMOG处理显着抑制TET蛋白的表达。此外,在孤雌胚胎中用Vc处理后5hmC表达增加,其促进5mC向5hmC的转化,而DMOG处理的时候其抑制作用。总之,这些结果表明在孤雌胚胎发育过程中TET蛋白的表达起介导5mC向5hmC转化的重要作用。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 高伟
导师: 俞先峰
关键词: 蛋白,甲基胞嘧啶,羟甲基胞嘧啶,抗坏血酸,二甲基烯丙基甘氨酸,孤雌胚胎发育
来源: 吉林大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 吉林大学
分类号: Q954.4
总页数: 55
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