飞蝗发育相关基因Omb的克隆、原核表达及时空表达分析

论文摘要

【目的】本研究克隆飞蝗Locusta migratoria发育相关的optomotor-blind（Omb）基因,并对其进行序列和表达分析,旨在更好地了解Omb基因在飞蝗翅发育中的作用及为进一步蝗灾的治理和防治提供新的理论依据。【方法】利用RT-RCR扩增飞蝗Omb基因cDNA序列,采用生物信息学软件分析该基因的核苷酸和氨基酸序列,利用MEGA 6. 0构建昆虫纲分子系统进化树;构建重组表达载体pET-30a/LmOmb,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）中,SDS-PAGE及Western blot鉴定重组表达蛋白;基于qPCR技术分析Omb基因在飞蝗不同发育时期及成虫不同组织中的表达谱。【结果】克隆获得飞蝗Omb基因部分cDNA序列,命名为LmOmb（GenBank登录号:MG867658）,其长792 bp,编码264个氨基酸,在第37-219位氨基酸之间存在一个T-box superfamily保守结构域。同源序列比对分析表明Lm Omb与褐飞虱Nilaparvata lugens Nl Omb氨基酸序列一致性为93%。在IPTG诱导下目标蛋白以6×His标签融合蛋白的形式在宿主菌中得到稳定表达。荧光定量PCR结果显示LmOmb基因在飞蝗不同发育时期均有表达,其中胚胎期的表达量最高,进入若虫期后表达量下降,且各龄若虫之间表达量相对平稳。Lm Omb基因在雌性和雄性成虫的胸部、足、腹部和翅中都有表达,且雌性和雄性之间表达量明显不同。【结论】LmOmb基因可能参与了飞蝗的胚胎发育。研究结果为进一步研究飞蝗LmOmb的功能提供了依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试虫与试剂
•   1.2 总RNA的提取和反转录
•   1.3 引物设计
•   1.4 飞蝗Omb基因克隆与测序
•   1.5 生物信息学分析
•   1.6 原核表达及Western blot检测
•   1.7 q PCR检测Omb基因在飞蝗不同发育时期和成虫组织中的表达谱
• 2 结果
•   2.1 飞蝗Omb基因克隆与分析
•   2.2 Lm Omb氨基酸的同源比对及系统进化分析
•   2.3 原核表达及Western blot检测
•   2.4 LmOmb在飞蝗不同发育时期及成虫组织中的表达谱
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张晓红,冯莉,刘亚超,乔宁,印红

关键词: 飞蝗,基因克隆,原核表达,表达谱

来源: 昆虫学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 河北大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基因项目(31872274),河北自然科学基金项目(C2018201082)

分类号: Q963

DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.01.004

页码: 33-40

总页数: 8

文件大小: 2857K

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