导读:本文包含了耐热碱性磷酸酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:磷酸酶,碱性,耐热,热稳定性,结构,耐热性,分枝。
耐热碱性磷酸酶论文文献综述
张颖,孙冰纯,钟永红,廖靖[1]（2013）在《妊娠中晚期大鼠耐热性碱性磷酸酶及胎盘超微结构在不同二氧化碳气腹作用时间下的变化》一文中研究指出目的:探讨不同二氧化碳(CO2)气腹作用时间对妊娠中、晚期大鼠血浆耐热性碱性磷酸酶(HSAP)含量及胎盘超微结构的影响。方法:建立妊娠中期大鼠的CO2气腹模型,以气腹作用时间随机分为气腹0 h组(对照)、1 h组和2 h组,然后每组再随机分为2个亚组,即中孕组和晚孕组。用酶联免疫吸附测定法检测大鼠血浆HSAP含量,并用透射电子显微镜观察大鼠胎盘超微结构。结果:气腹1 h组孕中、晚期血浆HSAP值与同期对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);气腹2 h组孕晚期血浆HSAP值低于同期对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组及气腹1 h组孕中、晚期大鼠胎盘超微结构均为正常表现,气腹2 h组孕中期大鼠胎盘内质网扩张,线粒体肿胀、嵴断裂、空泡化,核内染色质异常分布;孕晚期大鼠胎盘游离缘表面微绒毛受损、排列紊乱,局部性脱失,胞质内细胞器减少,线粒体固缩变小。结论:气腹2 h组可导致妊娠中、晚期大鼠血浆HSAP下降及胎盘超微结构有缺氧表现,可能影响胎盘功能。(本文来源于《生殖与避孕》期刊2013年05期）
李建波[2]（2007）在《栖热菌属菌株Thermus thermophilus XM中耐热碱性磷酸酶的克隆、表达以及重组酶的性质研究》一文中研究指出海洋是人类最后一块没有开发的疆域,海洋中的各种资源吸引着越来越多的科学工作者。海洋生物资源研究更是吸引着世界各国生物学家的注意。嗜热的微生物是海洋生物中一个重要的成员,对它们的研究已经成为国际热点。有证据表明嗜热菌是地球上形成的第一类生命形式,对他们的研究有重要的科学意义,同时对它们产生的各种酶的研究也具有各种工业和科学研究方面的意义。本研究利用基因工程方法对分离到的栖热菌属的一菌株Thermus thermophilus XM的碱性磷酸酶进行了克隆、表达,对可溶的重组蛋白进行了Ni柱纯化。同时,对重组酶(rTAPase)的一些基本的酶学性质进行了测定。实验表明Thermus thermophilus XM的AP基因的编码序列由1506bp组成,编码一个501个氨基酸残基的多肽,其分子量为54.7KDa,N端有一个27个氨基酸残基的信号肽。推测出的氨基酸一级结构与同属的其他菌株的AP具有高度保守性,与一些典型的中温AP和其它属的AP的对比表明,在这些AP中,它们的活性位点和金属结合位点具有高度保守性。该基因以N端加上一个6-His的形式在大肠杆菌中进行了表达。纯化得到的可溶重组蛋白的浓度为154mg/ml。对rTAPase的性质测定结果表明,该重组酶是一个高度耐碱的(最适反应pH12.0)、中度耐热的(最适反应温度在75-80℃范围内)在AP。其在80℃保温6小时后,活性仍然保留50%以上。作为一种金属酶,一些二价金属离子如Co~(2+), Mg~(2+),Mn~(2+)和Fe~(2+)等对rTAPase活性有促进作用,而另外一些金属离子如Cu~(2+), Ca~(2+), Zn~(2+)和K~+等对rTAPase活性有不同程度的抑制作用。两种表面活性剂SDS和Triton X-100对rTAPase具有强烈的抑制作用。在最适反应条件下,rTAPase催化水解对硝基苯磷酸二钠盐水解的Km值为0.034mM,着和其他的一些中温和高温的AP基本相同,表明rTAPase和其它来源的AP具有相近的催化能力。嗜热细菌是耐热酶的主要来源,但是它们培养条件苛刻,不能大量培养,且天然酶的产量低。但是在中温酶中生产耐热酶就不会有以上问题。本研究描述了在中文菌中表达耐热AP的过程并且对重组酶性质进行了测定,为该酶的生产和应用奠定了基础(本文来源于《厦门大学》期刊2007-06-10）
李雁楠[3]（2006）在《耐热碱性磷酸酶分子突变体的结构与功能变化》一文中研究指出碱性磷酸酯酶(Alkaline Phosphatase，简称AP，EC3.1.3.1)是一种磷酸单酯酶，可作为工具酶以及同位素标记应用于分子生物学各项研究。近年来，一类能够在极度高温环境下生存的生物引起了国内外科学家们的关注，研究者们发现，这些生物的酶具有特有的结构和功能，即很高的耐热性和70℃以上的最适反应温度，有些酶在110℃甚至更高的温度都有活性。高度的耐热性以及较高的最适反应温度使得这些酶类成为研究蛋白质结构与功能关系以及蛋白质耐热机制的极好的模型材料。 本实验采用亚硝基胍和PCR诱变法获得了200余个耐热碱性磷酸酯酶基因的随机突变体。我们对其中八个突变体进行了核苷酸序列的测定和突变体基因的原核表达、表达产物的分离纯化、表达产物的酶活、最适反应温度、热稳定性等指标的测定；并将所得到的TAP全序列提交到丹麦技术大学(Technical University of Denmark)CBS中心的CPHmodels服务器(http://www.cbs.dtu.dk/services/CPHmodels/)进行高级结构预测，在获得了与突变体具有最大相容性的已知结构的大肠杆菌碱性磷酸酶(BAP)的一个突变体(D153hd330n)A链的高级结构之后，采用分子模拟的方法模拟出突变体酶蛋白前319肽的叁级结构，同时使用SWISS-PORT的Swiss-PDBviewer软件对TAP突变体进行了二级结构预测，分析了引起耐热性变化的机理。取得的主要研究结果如下： 1)8个突变体的突变情况： 3号突变体 核苷酸CCC→CUC~(1271) 氨基酸P→L~(424) 5号突变体 核苷酸CGG→CGA~(663) GUG→AUG~(1093) 氨基酸V→M~(365) 25号突变体 核苷酸CUC→CUU~(221) ACG→AUG~(323) 氨基酸T→M~(108) 35号突变体 核苷酸CCC→CUC~(1271) CUG→GGG~(1340) 氨基酸P→L~(424) L→G~(447) 52号突变体 核苷酸ACC→AUC~(419) 氨基酸T→I~(140) 所有突变体 核苷酸AGC→AAC~(299)，氨基酸N→S~(100) 2)8个突变体的最适反应温度：3、6、9、48号突变体的最适反应温度有所下降，而5、35、52号基本不变；25号略有上升。但所有突变体的最适反应温度都在70℃左右的小范围内变化。8个突变体的酶活力：几乎所有突变体在70℃时都表现出了最大酶活力；同样条件下诱导表达，25号和35号突变体的蛋白表达较其它突变体稍低。8个突变体酶的热稳定性：25号和35号热稳定性有所上升；5号、6号、9号、48号热稳定性有所(本文来源于《南京师范大学》期刊2006-06-30）
龚宁萍[4]（2004）在《云南热泉栖热菌产耐热碱性磷酸酶的研究及其菌株鉴定》一文中研究指出碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AP)是一种水解酶，能催化磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、酚或糖，也能催化磷酸基团的转移反应，将磷酸基团从磷酸酯转移到醇、酚或糖等磷酸受体上，并产生对应的醇、酚或糖。AP广泛存在于微生物界和动物界，尚未发现存在于高等植物体内。在磷生物地球化学循环过程中，AP起了极其重要的作用。AP广泛应用于诊断学、生物化学及分子生物化学领域。应用较广的是小牛肠碱性磷酸酶CIAP(calf intestine alkaline phosphatase)和E．coli AP，这两种酶的活力高，研究较为透彻，适于常温反应，高温下比较容易失活。耐热碱性磷酸酶(TAP，thermostable alkaline phosphatase)是一种耐热的碱性磷酸酶，其催化机制与一般的碱性磷酸酶相同，且适合高温下反应，常应用于高温环境，一般来源于高温微生物，有更广阔的应用领域。 本研究从高温热泉中分离得到的非芽孢菌中筛选出31株碱性磷酸酶阳性菌，从中初步筛选到6株活性较高的菌株，往复筛，筛选出一株菌株RHY12-2，从该细菌得到的TAP的活性最高和热稳定性最好。通过测定该菌株的形态、生理、生化和基因方面的特性，鉴定该菌株可能为Thermus sp．的新种，拟命名为Thermus yunnanensis(AY557603)。 通过正交实验优化菌株RHY12-2的发酵培养基和依照菌株的生长曲线调整发酵时间，收集菌体，获得的细胞上清液的TAP比活为16.7 u／mg，提高30倍。 通过盐析、正丁醇萃取、阴离子交换层析和亲和层析，纯化后RHY12-2 TAP的比活为3223 u／mg，纯化倍数为193，经SDS-PAGE电泳检测蛋白质溶液为单一条带。RHY12-2 TAP为亚基相同的二聚体蛋白，分子量为100 KDa，亚基的分子量为52 KDa。通过亚基的N-末端氨基酸序列的比较，RHY12-2 TAP与已研究的来源于Thermus sp．的TAP的相似性为80％。 在水解对硝基苯酚磷酸二钠(PNPP)的反应中，RHY12-2 TAP的作用温度域和pH域广。在65～80℃之间，酶活性较高，不易失活，半衰期长，但在90℃下会较快失活。Mg(Ⅱ)和Co(Ⅱ)能提高酶的耐热性，Co(Ⅱ)在高温下对酶有激活作用。RHY12-2 TAP在2mM EDTA溶液中作用18h，能够保留50％的活摘要力。这些特性使得RHY12一TAP具有很好的研究和应用前景。(本文来源于《昆明理工大学》期刊2004-04-01）
郁锋,许晓风[5]（2004）在《耐热碱性磷酸酶功能结构域的进一步定位》一文中研究指出为了进一步精确定位耐热碱性磷酸酶 (TAP)的功能结构域和建立酶功能结构域定位的有效方法 ,在对TAP进行序列相容性比对及二级结构统计预测的基础上 ,以二级结构单元的完整性为依据对其功能结构域进行定位 .TAP的功能结构域在 35～ 4 76氨基酸之间 ,记为TAPN3 4C2 5(TAP的N端去掉 34个氨基酸而C端去掉 2 5个氨基酸 ) ,比盛小禹等定位的少 15个氨基酸 .克隆、表达实验结果证明了TAPN3 4C2 5的酶学活性 ,其最适反应温度为 72℃ ,比TAPND2 7(N端去除了 2 7个信号肽氨基酸的TAP)上升了 7℃ ,而最高耐受温度为 83℃ ,比TAPND2 7下降了 16℃ .实验结果表明 ,以二级结构预测结果进行酶功能结构域定位是一种更为精确的方法 .(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2004年01期）
王卉放,许化溪,黄新祥,王胜军,夏圣[6]（2003）在《耐热碱性磷酸酶在细菌染色体定量杂交方法中的应用》一文中研究指出定量DNA杂交是细菌遗传学分类的重要方法 ,其结果受到杂交温度和对杂交体进行检测时环境温度的影响。本研究利用耐热碱性磷酸酶取代传统的不耐热酶于微量板定量杂交试验 ,获得了较为满意的结果。一、材料和方法1.细菌菌种 :结核分枝杆菌 (ATCC 2 72 9(本文来源于《中华检验医学杂志》期刊2003年12期）
郁锋,许晓风,金詟[7]（2003）在《耐热碱性磷酸酶突变体耐热性变化机理研究》一文中研究指出从耐热碱性磷酸酶 (TAP) 2 0 0多个随机突变体的克隆库中选出耐热性明显下降的 4株突变体 ,进行全序列及表达产物的最高耐受温度和最适反应温度测定和酶分子高级结构的模拟 ,分析突变位点、高级结构和耐热性表现叁者的关系 ,探讨引起耐热性变化的机理。结构模拟显示所有突变位点都仅能引起细微的、局部的结构变化 ,除T3 2 0→I外都未直接触及酶的活性中心 ;结构上的细微改变虽然对最适反应温度影响不明显 ,但却使最高耐受温度降低了 10℃左右 ;T3 2 0→I靠近酶的活性中心 ,尽管未能引起结构的较大变化 ,但却使最高耐受温度和最适反应温度同时显着降低。可见 ,多数点突变对高级结构的影响都不剧烈 ,但对耐热性尤其是最高耐受温度的影响却比较明显 ,一般地 ,在非活性区的突变通常只能引起最高耐受温度的降低 ,靠近活性区的突变则能同时引起最适反应温度和最高耐受温度的降低(本文来源于《生物工程学报》期刊2003年04期）
郁锋[8]（2003）在《耐热碱性磷酸酶耐热机理研究和互补密码子使用关系探讨》一文中研究指出耐热碱性磷酸酶TAP(thermostable alkaline phosphatase)来源于栖热菌Thermus sp．FD3041，全序列长501个氨基酸，和大肠杆菌等生物的碱性磷酸酶比较有40％的相似性，与活性中心相关的氨基酸残基高度保守，说明TAP也有和其他碱性磷酸酶相似的空间结构和催化机制，而其最适反应温度可以达到70℃以上，属于耐热酶。对于蛋白质耐热机理的研究，TAP是一个很好的模型材料。利用法国的NPS@服务器预测TAP的二级结构，并依据保持末端二级结构稳定性的前提选择了合适的切除位点去除TAP两端的非功能结构域，经过克隆、表达得到了有活性的TAP~(N34C25)(TAP的N端去掉34个氨基酸而C端去掉25个氨基酸)。其最适反应温度和活化能比TAPND27有所上升；而最高耐受温度和Km值有所下降。TAP的功能结构域由此被进一步定位在35～476氨基酸之间。本实验不仅更为精确地定位了TAP的功能结构域，而且提供了以二级结构预测结果指导切割位点选择的范例，为功能结构域的定位提供了一种新的有效方法。利用突变的方法研究突变位点对TAP耐热性的影响，构建了两个单位点突变体(A410→T和P396→S)和两个多位点突变体(N100→S、T320→I和N100→S、P396→S、A410→V、P490→S)，进行全序列及表达产物的最高耐受温度和最适反应温度测定和酶分子高级结构的模拟，分析突变位点、高级结构和耐热性表现叁者的关系，探讨引起耐热性变化的机理。结构模拟显示所有突变位点都仅能引起细微的、局部的结构变化，除T320→I外都未直接触及酶的活性中心；结构上的细微改变虽然对最适反应温度影响不明显，但却使最高耐受温度降低了10℃左右；T320→I由于靠近酶的活性中心，尽管未能引起结构的较大变化，但却使最高耐受温度和最适反应温度同时显着降低。可见，多数点突变对高级结构的影响都不剧烈，但对耐热性尤其是最高耐受温度的影响却比较明显，一般地，在非活性区的突变通常只能引起最高耐受温度的降低，靠近活性区的突变则能同时引起最适反应温度和最高耐受温度的降低。二价金属离子对TAP耐热性的影响也作了一些探讨，在Mn~(2+)，Zn~(2+)，Mg~(2+)和Ca四种离子存在的条件下分别检测了耐热碱性磷酸酶TAP和它的两个多位点突变体耐热性和最适反应温度的变化，结果发现Mn~(2+)，Zn~(2+)，Mg~(2+)使得这两个突变体的耐热性有所升高，而Ca~(2+)却降低了它们的耐热性。另外，对于互补密码子对的使用关系也进行了一些统计分析。使用基于．NET平台的C#语言编制了密码子使用频率统计软件CodonP。该软件利用两个本地化的数据库密码子使用频率数据库和物种分类数据库并采用自定义的脚本语言实现了对互补密码子使用频率相关性和各种密码子使用偏好性参数的统计计算，是研究密码子使用频率的生物学意义的有力工具。系统分析了古细菌，真细菌和真核生物各100种随机样本的密码子与互补密码子及同域生物内32个密码子-互补密码子对使用频率的相关性。结果发现：绝大多数生物的密码子与。互补密码子的使用都呈显着正相关；叁域生物32个密码子——互补密码子对的使用关系基本一致，但真细菌与真核生物更近，古细菌与真细菌和真核生物两者都较远；密码子——互补密码子对使用关系的性质取决于密码子氢键的左右对称性。这些新发现不仅论证了前人有关密码子偏爱使用假说的合理性，而且揭示了密码子与互补密码子使用的内在联系及其隐含的生物学意义。文中还就密码子对的使用规律与遗传密码的起源和进化之间的关系进行了讨论。(本文来源于《南京师范大学》期刊2003-05-11）
白晓阳,季朝能,姜涛,盛小禹,毛裕民[9]（2001）在《无机磷酸盐对耐热碱性磷酸酶耐热性的影响》一文中研究指出为研究体外磷酸根离子对嗜热菌 (Thermussp .30 4 1)碱性磷酸酶TAPND2 7耐热性的影响 ,通过克隆于高表达质粒上编码TAPND2 7的基因在E .coli中的诱导表达和蛋白产物的纯化 ,获得了电泳纯的TAPND2 7.耐热性实验表明磷酸根离子能显着提高该酶的热稳定性 ,在 10mmol L磷酸根离子存在下 ,TAPND2 7的Tm 值从 91℃上升到了 97℃ ;酶的动力学实验证实无机磷酸盐 (Pi)对TAP ND2 7的酶活性有可逆竞争性抑制作用 ,Ki 值为 0 99× 10 -4 mol L .上述结果说明 ,TAPND2 7耐热性的提高是由于磷酸根离子对TAPND2 7活性位点的竞争性结合 ,这种结合 ,推测为Pi 与氨基酸残基间的非共价相互作用 ,减小了TAPND2 7的自由能 ,从而提高了它的热稳定性(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2001年04期）
戴林森,季朝能,王健,高大操,盛小禹[10]（2001）在《耐热碱性磷酸酶(FD-TAP)的结构模型研究》一文中研究指出以大肠杆菌碱性磷酸酶 (BAP)为主要结构模板 ,用计算机同源结构模拟方法构建了耐热碱性磷酸酶 (FD TAP)的叁维结构 ,对它们的结构特征进行了分析比较 ,并用Profile 3D和Ramachand ran图等方法分析了结构的合理性 .在此基础上 ,又构建了FD TAP 3个突变体的结构 ,用CHARMM能量计算法研究了FD TAP及其 3个突变体的能量与酶蛋白热稳定性之间的关系 ,得到了与实验完全一致的结果 .结果说明 ,如果氨基酸残基置换使蛋白质分子的总能量降低 ,疏水性增高和柔韧性减小 ,往往使蛋白质的耐热性增加(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2001年03期）
耐热碱性磷酸酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
海洋是人类最后一块没有开发的疆域,海洋中的各种资源吸引着越来越多的科学工作者。海洋生物资源研究更是吸引着世界各国生物学家的注意。嗜热的微生物是海洋生物中一个重要的成员,对它们的研究已经成为国际热点。有证据表明嗜热菌是地球上形成的第一类生命形式,对他们的研究有重要的科学意义,同时对它们产生的各种酶的研究也具有各种工业和科学研究方面的意义。本研究利用基因工程方法对分离到的栖热菌属的一菌株Thermus thermophilus XM的碱性磷酸酶进行了克隆、表达,对可溶的重组蛋白进行了Ni柱纯化。同时,对重组酶(rTAPase)的一些基本的酶学性质进行了测定。实验表明Thermus thermophilus XM的AP基因的编码序列由1506bp组成,编码一个501个氨基酸残基的多肽,其分子量为54.7KDa,N端有一个27个氨基酸残基的信号肽。推测出的氨基酸一级结构与同属的其他菌株的AP具有高度保守性,与一些典型的中温AP和其它属的AP的对比表明,在这些AP中,它们的活性位点和金属结合位点具有高度保守性。该基因以N端加上一个6-His的形式在大肠杆菌中进行了表达。纯化得到的可溶重组蛋白的浓度为154mg/ml。对rTAPase的性质测定结果表明,该重组酶是一个高度耐碱的(最适反应pH12.0)、中度耐热的(最适反应温度在75-80℃范围内)在AP。其在80℃保温6小时后,活性仍然保留50%以上。作为一种金属酶,一些二价金属离子如Co~(2+), Mg~(2+),Mn~(2+)和Fe~(2+)等对rTAPase活性有促进作用,而另外一些金属离子如Cu~(2+), Ca~(2+), Zn~(2+)和K~+等对rTAPase活性有不同程度的抑制作用。两种表面活性剂SDS和Triton X-100对rTAPase具有强烈的抑制作用。在最适反应条件下,rTAPase催化水解对硝基苯磷酸二钠盐水解的Km值为0.034mM,着和其他的一些中温和高温的AP基本相同,表明rTAPase和其它来源的AP具有相近的催化能力。嗜热细菌是耐热酶的主要来源,但是它们培养条件苛刻,不能大量培养,且天然酶的产量低。但是在中温酶中生产耐热酶就不会有以上问题。本研究描述了在中文菌中表达耐热AP的过程并且对重组酶性质进行了测定,为该酶的生产和应用奠定了基础
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
耐热碱性磷酸酶论文参考文献
[1].张颖,孙冰纯,钟永红,廖靖.妊娠中晚期大鼠耐热性碱性磷酸酶及胎盘超微结构在不同二氧化碳气腹作用时间下的变化[J].生殖与避孕.2013
[2].李建波.栖热菌属菌株ThermusthermophilusXM中耐热碱性磷酸酶的克隆、表达以及重组酶的性质研究[D].厦门大学.2007
[3].李雁楠.耐热碱性磷酸酶分子突变体的结构与功能变化[D].南京师范大学.2006
[4].龚宁萍.云南热泉栖热菌产耐热碱性磷酸酶的研究及其菌株鉴定[D].昆明理工大学.2004
[5].郁锋,许晓风.耐热碱性磷酸酶功能结构域的进一步定位[J].中国生物化学与分子生物学报.2004
[6].王卉放,许化溪,黄新祥,王胜军,夏圣.耐热碱性磷酸酶在细菌染色体定量杂交方法中的应用[J].中华检验医学杂志.2003
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[8].郁锋.耐热碱性磷酸酶耐热机理研究和互补密码子使用关系探讨[D].南京师范大学.2003
[9].白晓阳,季朝能,姜涛,盛小禹,毛裕民.无机磷酸盐对耐热碱性磷酸酶耐热性的影响[J].中国生物化学与分子生物学报.2001
[10].戴林森,季朝能,王健,高大操,盛小禹.耐热碱性磷酸酶(FD-TAP)的结构模型研究[J].中国生物化学与分子生物学报.2001
论文知识图
