导读:本文包含了橄榄绿链霉菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:木聚糖酶,热稳定性,最适pH,酶学性质
橄榄绿链霉菌论文文献综述
杨浩萌[1]（2006）在《来源于橄榄绿链霉菌A1的木聚糖酶XYNB的分子改良》一文中研究指出木聚糖酶可将木聚糖降解成低聚木糖和木糖,内切β-1,4-木聚糖酶以内切方式水解木聚糖分子中的β-1,4糖苷键,是一类重要的半纤维素酶。木聚糖酶在造纸、饲料、食品等行业和能源科学上都有着广泛的应用前景。来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一种性质优良的木聚糖酶,具有高比活性,抗胃蛋白酶和胰蛋白酶,已在饲料中作为添加剂应用。但该酶的热稳定性一般,在应用上存在不足。 本研究从提高该酶的热稳定性入手,通过定点突变和DNA shuffling的方法对木聚糖酶XYNB进行定向改良,将突变酶在毕赤酵母中表达纯化并对其酶学性质进行分析,以确定突变效果。同时,对该酶的催化残基、影响最适pH的因素也做了一定的分析。 通过定点突变的方法,获得了热稳定性有所提高的突变酶N13D、S40E、T11Y、XS和TB。其中,突变酶N13D和S40E在70℃处理5min,热稳定性分别比XYNB提高了24.76%和14.46%;T11Y突变酶在70℃处理10min,热稳定性是XYNB的2.8倍;增加二硫键的突变酶XS在70℃的半衰期由XYNB的3min提高到9min;氨基端替换获得的融合酶TB,热稳定性较XYNB有很大的提高,在70℃的半衰期由XYNB的3min提高到20min。 再对以上突变位点进行优化组合,获得了突变酶TS(氨基端替换结合二硫键的加入),最终比XYNB在70℃处理20min的热稳定性提高了12.4倍,半衰期由原来的3min提高到150min。突变酶TS由于具有很好的热稳定性和pH稳定性,在工业上有较好的应用前景。 通过同源建模和定点突变,获得突变酶E87F、E177F和N46D。突变酶E87F、E177F的酶活性几乎完全丧失,推断E87、E177是木聚糖酶XYNB的催化残基。突变酶N46D的最适pH值由5.2下降到4.2,pH稳定性也向酸性pH偏移,同时,最适温度和热稳定性也有一定的提高,结果证实木聚糖酶XYNB的第46位的氨基酸与其最适pH值相关,并对酶的酸碱催化反应起重要的作用。 通过DNA shuffling的方法构建木聚糖酶XYNB的突变体库,定向筛选热稳定性有所提高的突变酶,从700个表达菌株中筛选出sh-94#突变酶,将突变酶基因在毕赤酵母中表达,研究发现,sh-94#在70℃的热稳定性较野生型酶XYNB提高了1倍。又筛选到sh-17#突变酶,它的最适温度由原酶的60℃下降到40℃,热稳定性有所下降。初步建立了应用DNA shuffling的方法对木聚糖酶XYNB进行热稳定性的定向改良的研究体系,为今后木聚糖酶的进一步改良奠定了基础。 本研究通过基因工程的手段,定向改良了木聚糖酶XYNB的热稳定性,推测出了木聚糖酶XYNB的催化残基并分析了在催化反应中起重要作用的氨基酸残基。研究中获得的一系列突变酶对研究木聚糖酶结构和功能的关系起到了重要的作用,对指导木聚糖酶的进一步改良提供了良好的研究材料。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2006-06-01）
杨培龙[2]（2005）在《来源于橄榄绿链霉菌A1的高比活木聚糖酶在植物中的高效表达》一文中研究指出木聚糖是一种由β-1,4-木糖苷键连接形成并带有多种取代基的多聚糖,大量存在于饲料植物的细胞壁中。木聚糖可以增加单胃动物消化道内的食麇粘性,降低动物对营养的吸收和饲料消化率,是重要的抗营养因子。木聚糖的降解可以通过内源性木聚糖酶和木糖苷酶完成。其中木聚糖酶可以将木聚糖降解成低聚木糖和木单糖,在饲料、制浆造纸、食品医药等行业中有着广阔的应用前景。目前木聚糖酶的生产主要在微生物发酵系统中进行,但是转基因植物可以提供一种经济、高效、安全且便于直接饲喂的重组酶生产方式。已经有几种微生物来源的木聚糖酶在烟草,大麦等植物中得到表达,但是酶的表达量和酶活性较低,不能满足工业生产的需要。 来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一种性质优良的木聚糖酶,具有高比活性,已在饲料中作为添加剂应用。本研究首次进行高比活性木聚糖酶转基因植物的研究,并获得了具有高木聚糖酶活性的转基因植株。 首先克隆了块茎特异的马铃薯Patatin启动子以及马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ信号肽序列,并构建了4种含有木聚糖酶的编码基因xynB的组成型和块茎特异性植物表达载体。 携带双35S启动子和AMV增强子的组成型表达载体被用于转化烟草。分子生物学检测确证了XYNB蛋白在细胞质和细胞间隙的高效组成型表达,表达的XYNB最高占烟草叶片总蛋白含量的6.8%。细胞内和分泌表达的木聚糖酶分子量均为21kD。转基因烟草中表达的木聚糖酶具有正常的生物学活性。木聚糖酶活性表现最高为170IU/g鲜叶片(23IU/mg总蛋白),是目前报道最高的水平。转基因烟草的叶片蛋白粗提液在不同温度处理后,仍保持木聚糖酶活性,具有稳定性。转基因植株可以正常生长和繁殖,具有遗传稳定性。 马铃薯(Solanum tuberosum L.)可以作为植物生物反应器的原料,具有易于转化、遗传稳定且成本低廉的优势,本研究首次利用转基因马铃薯进行组成型和块茎特异性木聚糖酶表达。PCR检测证实xynB基因整合入转基因植株的基因组中。RT-PCR,ELISA,SDS-PAGE以及Western Blotting分析表明转基因马铃薯可以组成型高效表达木聚糖酶XYNB,含量最高占叶片总蛋白含量的5%。细胞内表达的木聚糖酶分子量为21 kD,信号肽引导木聚糖酶分泌到细胞间隙表达,分子量为31kD,可能存在糖基化修饰。转基因马铃薯叶片蛋白提取液中可以表现木聚糖酶活性,最高为90 IU/g鲜叶片(10 IU/mg总蛋白)。木聚糖酶在马铃薯块茎中也有表达并表现活性,活性最高为13 IU/g鲜块茎。 利用Patatin启动子构建的马铃薯块茎特异植物表达载体,转化获得马铃薯再生植株并诱导块茎产生。RT-PCR,Western Blot及酶活性分析证明,xynB基因只在转基因植株的块茎中特异表达,且块茎特异表现木聚糖酶活性,活性最高为10 IU/g鲜块茎。 转基因马铃薯组成型表达的木聚糖酶具有一定的热稳定性。马铃薯植株具有遗传稳定性。研究的结果表明表达高比活性木聚糖酶的转基因马铃薯具有较高的应用价值。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2005-06-01）
邓伟[3]（2005）在《橄榄绿链霉菌木聚糖酶组的性质和应用》一文中研究指出本文首次研究了橄榄绿链霉菌E-86的变异株QM-6产生的木聚糖酶组的性质和应用,主要结果有: 1.通过对橄榄绿链霉菌E-86发酵产酶组条件的研究,发现在所研究的诱导物中玉米芯木聚糖是诱导酶组产生的最好底物;有机氮源胰蛋白胨,无机氮源中(NH_4)_2HPO_4作为氮源时都能产生木聚糖酶组;在pH 4.5～6.0,27.5～35℃的条件下培养到第五天菌株能产生木聚糖酶组;并且经3.5%～15%的活性梯度胶及酶谱分析得出酶组的分子量约为1200 kDa。 2.橄榄绿链霉菌E-86产生的木聚糖酶组经30%～50%的硫酸铵沉淀后过S-300凝胶层析柱,达到电泳纯要求(Native-PAGE),SDS-PAGE分析得出该酶组至少由分子量为12～60 kDa的8个亚基组成。相应酶谱分析发现其中30 kDa亚基具有纤维素酶活力;47,35,32和23 kDa四个亚基具有木聚糖酶活性;亚基N-末端氨基酸序列分析发现47 kDa和23 kDa两个亚基是已报道的蛋白FXYN和GXYN。另外,不同碳氮源培养条件对产生的木聚糖酶组亚基组成也存在很大的影响。 3.对该木聚糖酶组的酶学性质研究得出:其反应的最适pH和最适温度分别为pH 6.0和60℃,在pH 4.1～10.3和在pH 6.0低于60℃的条件下都较稳定。该酶组对燕麦木聚糖具有很强的水解能力,对pNP-α-L-阿拉伯呋喃糖苷也表现出较高活力,不同碳氮源培养产生的木聚糖酶组的水解特性也存在很大的差异;水解桦木木聚糖、榉木木聚糖、燕麦木聚糖和玉米芯木聚糖的产物主要是木叁糖、木二糖和木糖,水解面粉阿拉伯木聚糖产物为木叁糖、木二糖、木糖和阿拉伯糖,说明该酶组具有内切木聚糖酶和切支酶活性。酶组对水不溶燕麦木聚糖具有较高的结合能力,这很好的解释了该酶组对水不溶性木聚糖具有较高特异性的能力。 4.在本文中,对橄榄绿链霉菌E-86产生的酶组在面包焙烤工业应用方面和水解天然玉米芯粉方面也进行了研究。焙烤试验结果显示:在添加20 mg/kg该酶组时,面包比容增加了38.8%,硬度比对照降低了1/3,面包老化速率也明显降低;模拟WUAX和WEAX在面粉中的天然组成比例进行酶解结果显示该酶组水解WUAX的速率大于水解WEAX的速率,从这个角度解释了酶组改善面包品质的机制。另外比较不同酶量对天然玉米芯粉的水解效果得出添加80U/100 mL为玉米芯粉较合适的水解酶量,在24 h时水解率达到12.52%,这也显示该酶组对天然玉米芯粉具有一定程度的水解作用。(本文来源于《中国农业大学》期刊2005-03-01）
邓伟,李秀婷,江正强,杨绍青,李里特[4]（2005）在《橄榄绿链霉菌木聚糖酶组对面包品质的改善》一文中研究指出本文研究了橄榄绿链霉菌(Streptomycesolivaceovirdis)E-86产生的分子量约1200kDa木聚 糖酶组对面包品质的影响。焙烤试验结果表明,添加20ppm木聚糖酶组的面包比容增加了38.8%,新鲜面包 芯硬度降低了1/3,面包老化速率也明显减小。该木聚糖酶组具有内切酶和切枝酶的活性,在面粉中水溶性和 水不溶性阿拉伯木聚糖组成比例范围内,对水不溶性阿拉伯木聚糖的降解作用比水溶性阿拉伯木聚糖快。因 此,该酶组能够改善面包的品质。(本文来源于《中国粮油学报》期刊2005年01期）
韦赟,江正强,李里特,邓伟,日下部功[5]（2004）在《橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究》一文中研究指出本文研究了橄榄绿链霉菌(Streptomycesolivaceoviridis)E-86固体发酵产木聚糖酶,系统探讨了不同碳源、不同氮源、温度、初始含水量、初始pH、接种量及培养时间对该菌产木聚糖酶的影响。结果表明:麸皮是橄榄绿链霉菌E-86固体发酵产木聚糖酶的最优碳源。发酵条件为麸皮100%,酵母提取物(yeast)1%+胰蛋白胨(tryptone)1%,基本营养盐溶液200%,发酵温度35℃,初始pH值6.5左右。木聚糖酶活最高,达1558.5U/g。(本文来源于《食品科学》期刊2004年S1期）
李里特,艾志录,江正强,朱运平,张宁[6]（2004）在《橄榄绿链霉菌E-86产木聚糖酶水解玉米芯汽爆液生产低聚木糖》一文中研究指出本文以橄榄绿链霉菌E-86产木聚糖酶水解玉米芯汽爆液生产低聚木糖为目的,研究了玉米芯汽爆液的水解特征,并与玉米芯木聚糖的酶解产物组成进行了比较,得到如下结果:加酶量120U/100ml、酶解反应8h可获得较好的酶解效果,直接还原糖量46μmol/ml、平均聚合度3.1、水解率46%;玉米芯汽爆液和玉米芯木聚糖的酶解产物中低聚糖组成大致相同,主要是木二糖和少量的木叁糖、木糖,汽爆液酶解产物中还含有极少量的鼠李糖和阿拉伯糖;玉米芯汽爆液可代替玉米芯木聚糖为底物生产低聚木糖。(本文来源于《食品科学》期刊2004年08期）
何永志,姚斌,王亚茹,袁铁峥,罗会颖[7]（2004）在《来源于橄榄绿链霉菌A1的高比活木聚糖酶XYNB的高效表达及性质的比较分析》一文中研究指出高效表达高比活木聚糖酶是进一步提高木聚糖酶发酵效价、降低其生产成本的有效途径。将橄榄绿链霉菌 (Streptomycesolivaceoviridis)A1的高比活木聚糖酶成熟蛋白编码基因xynB克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9中 ,转化毕赤酵母得到重组酵母 ,在重组酵母中木聚糖酶基因得到了高效分泌表达 ,且表达产物具有生物学活性。在 3L发酵罐中蛋白表达量约 1 4mg mL ,酶活性 (效价 )为 1 2 0 0IU mL。SDS PAGE分析表明 ,表达的木聚糖酶XYNBa为糖基化蛋白 ,分子量为 31kD ,经脱糖基化处理得到 2 1kD的XYNBb ,与橄榄绿链霉菌A1所产原酶XYNB大小一致。通过对XYNB、XYNBa及XYNBb酶学性质的比较发现 :叁者在比活性、Vmax及热稳定性方面有较大差异。该酶对不同木聚糖的酶解产物的糖份分析表明 :酶解产物的主要成分为木二糖、木叁糖和木四糖 ,占总糖含量的 95 %以上(本文来源于《微生物学报》期刊2004年03期）
艾志录[8]（2004）在《橄榄绿链霉菌E-86木聚糖酶的固定化及低聚木糖制备研究》一文中研究指出本论文针对低聚木糖工业化生产中的关键技术问题，研究木聚糖酶固定化技术，通过对30多种不同性能的载体的固定化试验筛选出效果优良的载体，对其固定化工艺进行了优化，进而系统研究了固定化酶的酶学特征和应用特性，并对固定化酶直接利用稀碱处理玉米芯生产低聚木糖和利用玉米芯汽爆液生产低聚木糖进行了研究，优化了固定化酶水解的工艺条件。主要研究内容和结果如下： 1．对30多种不同性能的载体进行了固定化试验，筛选出对橄榄绿链霉菌E-86来源的木聚糖酶固定化效果优良的Eudragit S-100、Eupergit C和大孔苯乙烯系阳离子交换树脂D380。 2．在国内首次引入可逆溶解性聚合物固定化酶方法，对橄榄绿链霉菌E-86来源木聚糖酶的固定化效果最好，1％的Eudragit S-100固定化得率91.8％，固定化酶活力74.68 U·ml~(-1)，为国内最高固定化得率和固定化木聚糖酶活性。 3．在国际首次报道采用环氧基载体固定化木聚糖酶，酶与载体比232 U·g~(-1)，在1M、pH5.8的磷酸二氢钾缓冲溶液中固定化36～48h，橄榄绿链霉菌来源木聚糖酶的活力回收35％，固定化酶活性82U·g~(-1)。 4．与游离酶相比，Eudragit S-100固定化橄榄绿链霉菌来源木聚糖酶的最适pH由5.8升高到6.3，在pH 4～10之间稳定性良好。固定化酶的最适温度由60℃提高到65℃，温度稳定性明显增加，半衰期提高50％以上。Eudragit固定化基本保持了原有的酶与底物亲合性，对桦木木聚糖、榉木木聚糖、水溶性燕麦木聚糖的K_m值由原酶的1.54、1.42和1.15mg·ml~(-1)，微弱增加到2.34、2.07和1.36 mg·ml~(-1)，但固定化后V_(max)，显着增加，这在以前的固定化研究中尚未见报道。供试的所有离子对木聚糖酶都没有激活作用，Cu、Ag、Hg以及NBS则使酶完全失活。固定化酶具有良好的重复使用性能，连续4批次操作产糖能力仍保持80％以上。 5．在玉米芯浓度4％、加酶量150U·g~(-1)(玉米芯)、水解时间8小时可获得良好的水解效果，此时水解液糖组分中单糖含量11.0％、木二糖45.7％、木叁糖32.5％、木四糖量10.8％，低聚木糖量占总糖量的89％，以总糖计的水解率为(对玉米芯木聚糖)72％、33.5％(对原料玉米芯)。与目前酶法生产低聚木糖在相同水解时间时的最高水平相当。而固定化酶法直接利用稀碱处理玉米芯水解生产低聚木糖在国际上尚未见报道。 6．Eupergit C固定化橄榄绿链霉菌E-86来源木聚糖酶研究结果表明：固定化酶的最适pH、pH稳定性和最适温度基本无变化，但温度稳定性明显提高，与Eudragit固定化相比其对金属离子的稳定性显着提高。在55℃、pH 5.8的条件下，中浓度汽爆液(总糖含量12.8mg·ml~(-1)，直接还原糖含量5.39mg·ml~(-1))以底物空间流速1.5 h~(-1)(底物流速0.5ml·min~(-1)、停留时间40min)下行通过填充床式固定化酶反应器连续生产低聚木糖，可获得52％的总糖水解率，固定化酶反应器生产效率0.1 mg·ml~(-1)(酶柱体积)·min~(-1)，固定化酶生产效率0.12mg·g~(-1)(湿酶)·min~(-1)，低聚木糖占总糖含量78.88％。连续操作10天相对产糖量保持在93％以上，半衰期可达107天。 本研究的特点与创新在于： ① 利用可逆溶解性聚合物载体固定化酶在国内尚未见报道，而利用固定化酶直接水解玉米芯生产低聚木糖在国际上尚未见报道。本研究采用可逆溶解性聚合物Eudragit S-100固定化木聚糖 中国农业大学博士学位论文摘要里里照里里里里口里月里里里里里里里典目里里里里里里里里里里里里皿里里里里酶工艺简单、条件温和、通过改变环境pH值可以很容易的实现在溶解状态下进行酶反应，降低固定化酶扩散限制，改善酶与底物的亲合性，而在不溶状态下进行酶与酶解产物的分离和重复利用。采用稀碱液预处理玉米芯则可以简单有效地脱除木聚糖结合的木质素，改善底物与酶的亲和性，消除了木质素的屏蔽效应对固定化酶作用的影响，两者的结合使得固定化酶能高效利用玉米芯中的木聚糖生产低聚木糖。本研究为利用固定化酶直接水解玉米芯生产低聚木糖开辟了一种全新的思路，为工业化利用固定化酶法生产低聚木糖提供了基础。因此可以期待其在工业化低聚木糖生产中发挥其应有的作用。 ②在国际上首次报道采用环氧基载体固定化木聚糖酶得到良好效果，并经连续水解玉米芯汽爆液生产低聚木糖证明了其可行性。(本文来源于《中国农业大学》期刊2004-06-01）
艾志录,江正强,李里特,石波,日下部功[9]（2004）在《大孔树脂D380固定化橄榄绿链霉菌E-86来源木聚糖酶的研究》一文中研究指出选择有代表性的 1 4种吸附和离子交换树脂进行了橄榄绿链霉菌E 86来源的木聚糖酶固定化试验 ,筛选出固定化效果较好的 72 4和D3 80两种树脂 ;对含伯氨基的离子交换树脂D3 80采用戊二醛进行交联固定化 ,研究了其固定化条件。结果表明 ,戊二醛浓度为1 % ,处理 3 0min ,加酶量为 0 8～ 1mL ,酶液pH 5 8,2 5℃ ,5～ 1 0h固定化处理效果最好 ,获得的固定化酶活力可达 64U/ g(载体 )。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2004年02期）
何永志[10]（2003）在《橄榄绿链霉菌Streptomyces olivaceoviridis A1木聚糖酶基因xynB在毕赤酵母中的高效表达》一文中研究指出木聚糖酶是可将木聚糖降解为低聚糖和木糖的一类酶的总称。它广泛地存在于各种微生物中，在饲料、造纸、食品医药以及能源工业中有着广阔的应用前景。我们将来源于橄榄绿链霉菌A1(Streptomyces olivaceoviridis A1)的木聚糖酶基因xynB的成熟蛋白编码序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9α中，转化Pichia pastoris GS115得到重组子，实现了木聚糖酶基因xynB的高效表达，表达产物能有效分泌且具有正常的生物学活性。在3升发酵罐中木聚糖酶的表达量达1200IU／mL。SDS-PAGE分析表明，毕赤酵母表达产物XYNBa的分子量为31kD，大于橄榄绿链霉菌A1所产原酶XYNB的23kD。进一步对XYNBa进行了脱糖基化处理得到XYNBb,其分子量恢复到23kD，证明XYNBa是糖基化蛋白。通过对毕赤酵母重组表达的木聚糖酶XYNBa、脱糖基化的木聚糖酶XYNBb以及橄榄绿链霉菌A1所产原酶XYNB之间酶学性质的比较发现：叁种酶的最适pH差异不大，XYNB和XYNBa均为5.2，XYNBb为5.0；XYNB和XYNBa的最适温度均为60℃，XYNBb降为50℃：在耐热性上，XYNBa由于糖基化作用热稳定性明显高于未糖基化的XYNB和XYNBb；XYNBa和XYNBb的比活性分别为883.88IU／mg和832.51IU／mg，明显低于原酶的比活2814.45IU／mg；XYNB和XYNBa的Km值相当，分别为21.56(g／Kg)和20.87(g／Kg)，而XYNBb的Km值较大为27.10(g／Kg)；XYNBa和XYNBb的Vmax相差不大，分别为4568μmol／mg·min和5329μmol／mg·min，明显低于XYNB的27623μmol／mg·min此外叁种酶均无纤维素酶活性，对胃蛋白酶和胰蛋白酶有很好的抗性，且对作用环境中的各种离子、表面活性剂、螯合剂不敏感。通过对不同木聚糖的酶解产物的糖份分析发现：以桦木木聚糖为底物时，酶解产物主要为木叁糖和木四糖，含量分别为68.43％和16.50％，另外还含有11.79％的木二糖；以玉米芯木聚糖为底物时，酶解产物主要为木二糖和木叁糖，含量分别为81.78％和11.55％。证实该酶为内切β—1—4木聚糖酶，非常适用于低聚木糖的工业化生产。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2003-06-01）
橄榄绿链霉菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
木聚糖是一种由β-1,4-木糖苷键连接形成并带有多种取代基的多聚糖,大量存在于饲料植物的细胞壁中。木聚糖可以增加单胃动物消化道内的食麇粘性,降低动物对营养的吸收和饲料消化率,是重要的抗营养因子。木聚糖的降解可以通过内源性木聚糖酶和木糖苷酶完成。其中木聚糖酶可以将木聚糖降解成低聚木糖和木单糖,在饲料、制浆造纸、食品医药等行业中有着广阔的应用前景。目前木聚糖酶的生产主要在微生物发酵系统中进行,但是转基因植物可以提供一种经济、高效、安全且便于直接饲喂的重组酶生产方式。已经有几种微生物来源的木聚糖酶在烟草,大麦等植物中得到表达,但是酶的表达量和酶活性较低,不能满足工业生产的需要。 来源于橄榄绿链霉菌(Streptomyces olivaceoviridis)A1的木聚糖酶XYNB是一种性质优良的木聚糖酶,具有高比活性,已在饲料中作为添加剂应用。本研究首次进行高比活性木聚糖酶转基因植物的研究,并获得了具有高木聚糖酶活性的转基因植株。 首先克隆了块茎特异的马铃薯Patatin启动子以及马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ信号肽序列,并构建了4种含有木聚糖酶的编码基因xynB的组成型和块茎特异性植物表达载体。 携带双35S启动子和AMV增强子的组成型表达载体被用于转化烟草。分子生物学检测确证了XYNB蛋白在细胞质和细胞间隙的高效组成型表达,表达的XYNB最高占烟草叶片总蛋白含量的6.8%。细胞内和分泌表达的木聚糖酶分子量均为21kD。转基因烟草中表达的木聚糖酶具有正常的生物学活性。木聚糖酶活性表现最高为170IU/g鲜叶片(23IU/mg总蛋白),是目前报道最高的水平。转基因烟草的叶片蛋白粗提液在不同温度处理后,仍保持木聚糖酶活性,具有稳定性。转基因植株可以正常生长和繁殖,具有遗传稳定性。 马铃薯(Solanum tuberosum L.)可以作为植物生物反应器的原料,具有易于转化、遗传稳定且成本低廉的优势,本研究首次利用转基因马铃薯进行组成型和块茎特异性木聚糖酶表达。PCR检测证实xynB基因整合入转基因植株的基因组中。RT-PCR,ELISA,SDS-PAGE以及Western Blotting分析表明转基因马铃薯可以组成型高效表达木聚糖酶XYNB,含量最高占叶片总蛋白含量的5%。细胞内表达的木聚糖酶分子量为21 kD,信号肽引导木聚糖酶分泌到细胞间隙表达,分子量为31kD,可能存在糖基化修饰。转基因马铃薯叶片蛋白提取液中可以表现木聚糖酶活性,最高为90 IU/g鲜叶片(10 IU/mg总蛋白)。木聚糖酶在马铃薯块茎中也有表达并表现活性,活性最高为13 IU/g鲜块茎。 利用Patatin启动子构建的马铃薯块茎特异植物表达载体,转化获得马铃薯再生植株并诱导块茎产生。RT-PCR,Western Blot及酶活性分析证明,xynB基因只在转基因植株的块茎中特异表达,且块茎特异表现木聚糖酶活性,活性最高为10 IU/g鲜块茎。 转基因马铃薯组成型表达的木聚糖酶具有一定的热稳定性。马铃薯植株具有遗传稳定性。研究的结果表明表达高比活性木聚糖酶的转基因马铃薯具有较高的应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
橄榄绿链霉菌论文参考文献
[1].杨浩萌.来源于橄榄绿链霉菌A1的木聚糖酶XYNB的分子改良[D].中国农业科学院.2006
[2].杨培龙.来源于橄榄绿链霉菌A1的高比活木聚糖酶在植物中的高效表达[D].中国农业科学院.2005
[3].邓伟.橄榄绿链霉菌木聚糖酶组的性质和应用[D].中国农业大学.2005
[4].邓伟,李秀婷,江正强,杨绍青,李里特.橄榄绿链霉菌木聚糖酶组对面包品质的改善[J].中国粮油学报.2005
[5].韦赟,江正强,李里特,邓伟,日下部功.橄榄绿链霉菌固体发酵产木聚糖酶的研究[J].食品科学.2004
[6].李里特,艾志录,江正强,朱运平,张宁.橄榄绿链霉菌E-86产木聚糖酶水解玉米芯汽爆液生产低聚木糖[J].食品科学.2004
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