海洋低温碱性脂肪酶论文_邵铁娟,孙谧,郑家声,王跃军,邱秀宝

导读:本文包含了海洋低温碱性脂肪酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:碱性,低温,脂肪,海洋,菌种,酵母,理化。

海洋低温碱性脂肪酶论文文献综述

邵铁娟,孙谧,郑家声,王跃军,邱秀宝^[1]（2004）在《Bohaisea-9145海洋低温碱性脂肪酶研究》一文中研究指出从 2 0 0 0多份渤海海区海水海泥样品中分离获得一株新型脂肪酶高产菌株BohaiSea 914 5 ,经鉴定为适冷性海洋酵母 (Yarrowialipolytica)。菌株在以豆饼粉、棉籽饼粉和花生粕作为碳氮源并添加 0 5 %花生油的培养基中能较好地生长产酶 ,最适产酶温度 2 6± 1℃ ,产酶周期为 2 3h。所得脂肪酶的最适反应温度为 35℃ ,最适pH 8 5 ,pH4 0～ 9 0范围内稳定 ,热稳定性差。该酶与常见金属离子和化学试剂的配伍性较好 ,受表面活性剂SDS的激活 ,且具有良好的耐盐及抗氧化特性 ,是一种新型的海洋低温碱性脂肪酶 ,在洗涤剂行业特别是冷洗行业中具有良好的应用前景(本文来源于《微生物学报》期刊2004年06期）

董宏伟,孙谧,王跃军,于建生^[2]（2004）在《海洋微生物低温碱性脂肪酶的纯化与性质研究》一文中研究指出以海洋微生物通过发酵制备的脂肪酶为材料 ,对该酶的分离纯化条件及理化性质进行了研究。在脂肪酶纯化中 ,采用氯仿萃取、中空纤维柱超滤及CM SepharoseFF阳离子交换柱层析等技术对发酵制备的脂肪酶进行了纯化 ,结果得到达到电泳纯的脂肪酶。在脂肪酶理化性质研究中 ,采用SDS PAGE电泳对该脂肪酶分子量进行测定 ,并在实验中以橄榄油为底物采用脂肪酶酸碱滴定测活法 ,对脂肪酶的最适水解条件、各种因素对脂肪酶稳定性的影响进行了研究。结果显示 ,该脂肪酶分子量为 ( 38 0± 1 )kD ,最适水解温度为 35℃ ,最适pH为 8 5 ,为一低温碱性脂肪酶。该脂肪酶可在 35℃以下、pH =4 0— 9 0范围内保持良好的稳定性 ,与常见金属离子、化学试剂等的配伍性较好 ,并且具有良好的耐盐及抗氧化性能。研究中还以p NPL(月桂酸对硝基苯酚酯 )为底物采用脂肪酶化学发光测活法 ,对脂肪酶进行了酶促动力学的研究。结果表明 ,该脂肪酶在最适条件下Km 值为 7 80 5 μmol/L ,Vmax为 1 2 385mmol/ (L·min)。通过对Zn2 +抑制脂肪酶水解活性的研究 ,发现Zn2 +对脂肪酶具有可逆抑制作用 ,从而筛选到该脂肪酶的可逆抑制剂Zn2 +。(本文来源于《海洋与湖沼》期刊2004年04期）

卜宪娜^[3]（2004）在《海洋嗜冷杆菌的鉴定及所产低温碱性脂肪酶的基因工程和生物信息学研究》一文中研究指出海洋低温脂肪酶是(Marine low-temperature Alkaline Lipase，MLAL)是由一株海洋细菌EastSeaG5-1415产生的一种胞外酶。本论文主要进行了EastSeaG5-1415菌株的鉴定低温脂肪酶多克隆抗体的制备及所产低温脂肪酶基因的克隆、序列测定、生物信息学分析和其空间结构的模建：从东海深海底泥中筛选得到一株低温脂肪酶产生菌EastSeaG5-1415，对它进行了形态、生理生化和生长特征的观察，结合对其16SrRNA序列的分析比较，将其鉴定为嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola，并将该菌株命名为嗜冷杆菌P.glacincola EastSeaG5-1415。利用纯化的低温脂肪酶采用背皮内多点注射和皮下组织免疫相结合的方法对新西兰白兔进行免疫，制备得到多克隆抗体，再对其进行纯化。用ELISA的方法对其效价进行检测，结果表明其效价为64000，并用Western印迹实验证明了抗原抗体的结合具有高度特异性。利用不完全酶切和末端半补齐技术构建了嗜冷杆菌P．glacincola EastSeaG5-1415的基因文库。末端半补齐技术的优点有：(1)彻底消除载体自环化的可能性；(2)消除了插入片段自身相互连接的可能性；(3)同常用的碱性磷酸酯酶法相比较，采用半补齐技术、处理的连接产物为完整的共价闭环质粒，不像碱性磷酸酯酶法那样留有缺口，因而半补齐法的连接产物其转化率不受影响。采用叁丁酸甘油酯平板和ELISA两种方法相结合从基因文库中筛选得到一株阳性克隆(命名为pPGl)。序列测定分析表明，此重组质粒包含有长度为此95lbp的低温脂肪酶基因的完整的开放读码框架(ORF)和上游调控序列。此片段编码由317个氨基酸组成的酶，计算其分子量为35001.83Dal。通过Southern杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌P.glacincola EastSeaG5-1415基因组DNA。并通过构建表达载体在大肠杆菌中得到了表达。利用已有的各种生物信息学软件对得到的低温脂肪酶氨基酸序列进行了分析。同源性分析结果表明此脂肪酶含有一个G-X1-S-X2-G的保守催化序列。采用CPHmodels同源模建方法得到的模型显示，低温脂肪酶PGLip共有10个α螺旋和7个β片层，组成其活性位点的三个氨基酸残基排列顺序为Ser_(142)-Asp_(166)-His_(292)。该活性位点被包埋在脂肪酶分子内部，被一个由螺旋构成的盖子所覆盖。脂肪酶PGLip的氢键数量明显少于作为模板的蛋白质1g1h，该酶中碱性氨基酸的摩尔比例(Arg／Arg+Lys)(接近于0.27)较中温脂肪酶(0.4)和高温脂肪酶(0.48)中的比值低得多，这些特性都使脂肪酶PGLip结构变得松散，有助于形成更具柔性的叁级结构，从而有助于酶在低温环境中催化作用时的构中国海洋大学硕士论文.海洋嗜冷杆菌的鉴定及所产低温碱性脂肪酶的基因工程和生物信息学研究象变化。本实验结果具有一定的先进性和技术创新性，在一定程度上填补了国内低温脂肪酶研究领域的空白，对于加速开发我国海洋生物活性物质资源有重要的理论和实际意义。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2004-05-01）

海洋低温碱性脂肪酶论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

以海洋微生物通过发酵制备的脂肪酶为材料 ,对该酶的分离纯化条件及理化性质进行了研究。在脂肪酶纯化中 ,采用氯仿萃取、中空纤维柱超滤及CM SepharoseFF阳离子交换柱层析等技术对发酵制备的脂肪酶进行了纯化 ,结果得到达到电泳纯的脂肪酶。在脂肪酶理化性质研究中 ,采用SDS PAGE电泳对该脂肪酶分子量进行测定 ,并在实验中以橄榄油为底物采用脂肪酶酸碱滴定测活法 ,对脂肪酶的最适水解条件、各种因素对脂肪酶稳定性的影响进行了研究。结果显示 ,该脂肪酶分子量为 ( 38 0± 1 )kD ,最适水解温度为 35℃ ,最适pH为 8 5 ,为一低温碱性脂肪酶。该脂肪酶可在 35℃以下、pH =4 0— 9 0范围内保持良好的稳定性 ,与常见金属离子、化学试剂等的配伍性较好 ,并且具有良好的耐盐及抗氧化性能。研究中还以p NPL(月桂酸对硝基苯酚酯 )为底物采用脂肪酶化学发光测活法 ,对脂肪酶进行了酶促动力学的研究。结果表明 ,该脂肪酶在最适条件下Km 值为 7 80 5 μmol/L ,Vmax为 1 2 385mmol/ (L·min)。通过对Zn2 +抑制脂肪酶水解活性的研究 ,发现Zn2 +对脂肪酶具有可逆抑制作用 ,从而筛选到该脂肪酶的可逆抑制剂Zn2 +。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。