Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达

Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达

论文摘要

为了验证杂合启动子Kap147/Kpn的体内、外功能,构建了Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠。体外细胞转染和激素诱导证实Kap147/Kpn启动子具有细胞特异性,且受雄激素诱导。通过RT-PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)和荧光定量PCR(Polymerase Chain Reaction)证实Kap147/Kpn启动子引导Cre重组酶在转基因鼠(Cre-F0-2)睾丸组织中特异表达。荧光定量PCR检测发现,Cre mRNA在转基因鼠睾丸中的表达量与小鼠年龄相关,经15 mg/(kg·d)二氢睾酮(DHT)处理后睾丸中Cre mRNA表达量增加1.7倍,经100 mg/(kg·d)醋酸环丙孕酮(CAP)处理后Cre mRNA表达量降低约50%,证实Kap147/Kpn启动子在转基因鼠体内受雄激素调控。荧光组化显示,转基因鼠Cre-F0-2与双荧光Cre重组酶报告鼠杂交后,能成功介导子代鼠睾丸组织特异性的基因敲除。杂合启动子Kap147/Kpn引导的Cre重组酶转基因鼠(Cre-F0-2)具有雄激素调节性和睾丸靶向性,是一个潜在的研究睾丸基因功能的有力工具。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 质粒的构建
  •   1.2 细胞培养与转染
  •   1.3 Kap147/Kpn-Cre转基因鼠的培育
  •   1.4 RNA提取,RT-PCR检测和荧光定量PCR检测
  •   1.5 雄激素对Cre基因的调控
  •   1.6 双荧光基因表达检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 Kap147/Kpn杂合启动子的细胞特异性和雄激素可调节性
  •   2.2 Cre重组酶在Kap147/Kpn-Cre转基因小鼠睾丸组织中的特异性表达
  •   2.3 Cre-F0-2转基因小鼠睾丸组织中Cre基因表达的激素调控
  •   2.4 Cre-F0-2转基因小鼠体内Cre重组酶活性的评估
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘飞,孟军,范立强

    关键词: 基因打靶,肾脏雄激素调节蛋白,转基因鼠,睾丸

    来源: 华东理工大学学报(自然科学版) 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(81071252)

    分类号: Q78

    DOI: 10.14135/j.cnki.1006-3080.20180830001

    页码: 919-927

    总页数: 9

    文件大小: 1488K

    下载量: 83

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