导读:本文包含了声学造影剂论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:造影,超声,声学,纳米,靶向,心系,阿霉素。
声学造影剂论文文献综述
洪然,张小杉[1]（2018）在《超声心动图声学造影剂的进展》一文中研究指出自1976年Gramiak率先发现声学造影现象以来,超声心动图声学造影剂一共经历了右心系统声学造影剂阶段、左心系统声学造影剂阶段以及心肌声学造影剂阶段,逐渐发展成为了可以辅助诊断右心系统疾病、左心系统疾病以及心肌血流微灌注情况的多种类多用途的声学造影剂,为临床心脏大血管相关疾病的诊断提供了新途径以及新思路。本文即结合中外各个时期的文献,对超声心动图声学造影剂的进展做一个大致的梳理、回顾及展望。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2018年88期）
郝鑫[2]（2018）在《RGD靶向载DOX声学造影剂空化增敏肝癌化疗的实验研究》一文中研究指出目的:肝癌是一种恶性程度较高的消化系统肿瘤,其治疗方式以手术为核心,但因其发病隐匿,只有少数患者就诊时可以获得手术机会。化疗为晚期肝癌治疗方式之一,但大部分患者无法承受化疗药物全身毒副作用,故限制了其临床应用。近年来研究发现超声造影剂可作为载体实现药物靶向递送,从而减少药物毒副作用。因此,本文研究制备RGD靶向载阿霉素纳米泡减少化疗副作用,增敏晚期肝癌的化疗效果。方法:(1)采用薄膜水合法制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD载DOX磷脂纳米泡(RDPD),通过透射电子显微镜及光学显微镜观察其形态,粒径检测仪检测其粒径大小、粒径分布情况及表面电位情况,利用酶标仪测量RDPD载药量及包封率,评价其载药能力。(2)检测DP纳米泡、RDP纳米泡及RDPD纳米泡体外显影效果。应用细胞计数原理检测以上纳米泡体外稳定性,并绘制体外稳定性曲线。(3)利用超声诊断仪检测其体内稳定性及测定TIC曲线,评估叁种造影剂达峰强度、达峰时间及曲线下面积(AUC),并比较叁种纳米泡以上指标差异。(4)利用细胞培养技术,检测DP、RDP、RDPD纳米泡体内急性毒性及细胞毒性,评价以上叁种纳米泡生物安全性。(5)建立裸鼠肝癌皮下瘤模型,利用超声诊断仪评价DP、RDP及RDPD纳米泡肿瘤靶向性。采用免疫组织化学染色的方法检测正常裸鼠肝脏及皮下瘤αvβ3整合素阳性表达情况。(6)将成功建模荷瘤鼠分为5组,分别给予同等剂量生理盐水、空白纳米泡、RGD纳米泡、RGD携DOX纳米泡、DOX溶液,比较各组间给药前后肿瘤大小、超声弹性成像及组织病理差异。结果:(1)采用薄膜水合法成功制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD携DOX磷脂纳米泡(RDPD),其粒径分别为292 nm、303 nm、322 nm,其电位分别为-3.69 mv、-2.69 mv、-2.68 mv。RDPD载药量为3.02%,包封率为71%,载药能力良好。(2)DP、RDP、RDPD纳米泡均可实现体外显影,且显影效果良好。初始纳米泡浓度叁组间无明显差异(P>0.05)。(3)评估DP、RDP、RDPD叁种造影剂达峰强度、达峰时间及AUC曲线下面积均无明显差异(P=0.176、0.100、0.733>0.05)。体内稳定性DP与RDP、RDPD差异有统计学意义(P=0.046、0.038<0.05)。(4)DP与RDP不具有细胞毒性,而DOX溶液与RDPD具有细胞毒性。DOX溶液组与RDPD组细胞毒性差异有统计学意义(P<0.001)。DP与RDP无明显体内毒性,DOX溶液与RDPD均有体内毒性。RDPD组体内毒性与DOX差异有统计学意义(P=0.0493<0.05)。病理表现可见DOX组具有心脏毒性,其余各组病理表现均正常。(5)RDP及RDPD组空化前后db值差异有统计学意义(P=0.007、0.004<0.05),RDP、RDPD组空化前后db值差值与DP组差异有统计学意义(P=0.032、0.008<0.05)。免疫组化结果表明肿瘤组织αvβ3表达阳性,而肝脏组织表达极低。(6)RDPD组与DOX组肿瘤体积变化较空白组差异有统计学意义(P<0.001),RDPD组较DOX组肿瘤体积变化差异有统计学意义(P=0.008<0.05)。RDPD组与DOX组瘤体硬度较空白组差异有统计学意义(P=0.001、0.002<0.05),RDPD组较DOX组瘤体硬度差异有统计学意义(P=0.011<0.05)。各组瘤体病理结果显示:RDPD组肿瘤坏死最为明显,DOX组可见部分坏死,RDP组可见极少坏死,DP组与空白对照组未见明显坏死区域。结论:1、采用薄膜水合法可制备空白磷脂纳米泡、RGD靶向纳米泡及RGD携载DOX纳米泡,其粒径分布均匀,体内外稳定性、成像效果均较好,载药量与包封率尚佳。空白纳米泡及RGD纳米泡不具有体内毒性及细胞毒性,但RGD载DOX纳米泡具有细胞毒性。相比于DOX溶液,RDPD体内毒性较低,可实现化疗药物体内减毒。2、肝癌新生血管avβ3受体表达程度较高,而正常肝脏组织avβ3受体表达极低。携RGD肽纳米泡载体具有肝癌靶向性,可靶向肝癌新生血管,结合UTMD技术,可实现化疗药物靶向释放,从而提高肿瘤局部血药浓度。起到增敏晚期肝癌化疗效果的作用。但本实验未对其机制进行研究,故后期仍需进一步探索。(本文来源于《天津医科大学》期刊2018-05-01）
冯坤[3]（2018）在《3种不同手振激活声学造影剂在经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验中应用的对比研究》一文中研究指出目的:对比使用手振激活加血生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液与传统手振激活生理盐水进行经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验,为临床选择右心声学造影剂提供参考;对比静息状态下与Valsalva动作下应用3种造影剂行经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验对于右向左分流的阳性检出率,评价Valsalva动作的应用价值。方法:选取2015年1月至2017年8月成都市第叁人民医院、成都大学附属医院门诊及住院患者中怀疑有右向左分流患者(不明原因脑卒中、短暂性脑缺血发作、先兆性偏头痛)105例。所有患者均采用振荡20次的3种不用手振声学造影剂进行经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验。记录患者右心微泡显影持续时间;观察右向左分流情况并进行半定量分析;观察对比静息状态下与Valsalva动作下经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验对右向左分流的检出率;监测患者造影前后心率、血压、呼吸频率、血氧饱和度。结果:手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液较传统手振激活生理盐水在进行经胸超声心动图右心声学造影时右心内空气微气泡显影持续时间长,差异有统计学意义(P<0.01),手振加血生理盐水空气微气泡较手振50%葡萄糖溶液空气微气泡右心微泡显影持续时间长,差异有统计学意义(P<0.05);手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液较传统手振激活生理盐水对于右向左分流检出率更高,差异有统计学意义(P<0.05),手振加血激活生理盐水与手振激活50%葡萄糖溶液对右向左分流检出率对比差异无统计学意义(P>0.05),但手振加血激活生理盐水对于Ⅱ、Ⅲ级分流敏感度更高,差异有统计学意义(P<0.05);Valsalva动作下行经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验对右向左分流检出率高于静息状态下,差异有统计学意义(P<0.05);所有患者造影前后心率、血压、呼吸频率、血氧饱和度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液是两种经济、安全、有效的右心声学造影剂,尤其是手振加血激活生理盐水,其造影效果较传统手振激活生理盐水更好,制备方便,值得临床推广;对于临床怀疑有卵圆孔未闭合并右向左分流患者,应联合行经胸超声心动图右心声学造影及经颅脑血管微泡试验;改良Valsalva动作更有利于提高右向左分流的检出率。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-05-01）
冯坤,唐炯,范新荣,何川,黄深[4]（2017）在《3种不同手振声学造影剂在右心声学造影中应用的对比研究》一文中研究指出目的:比较使用手振激活加血生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液与传统手振激活生理盐水进行右心声学造影的稳定性、有效性、敏感性、安全性,为临床选择右心声学造影剂提供参考。方法:选取2015-01-2017-08成都市第叁人民医院、成都大学附属医院门诊及住院患者中怀疑有右向左分流(RLS)的患者(不明原因脑卒中、短暂性脑缺血发作、先兆性偏头痛)105例。所有患者均采用振荡20次的3种不同手振声学造影剂进行造影。记录患者右心微泡显影持续时间;观察RLS情况并进行半定量分析;监测患者造影前后的心率、血压、呼吸频率、血氧饱和度。结果:手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液较传统手振激活生理盐水空气微气泡使用时右心微泡显影持续时间长,差异有统计学意义(P<0.01),手振加血生理盐水空气微气泡较手振50%葡萄糖溶液空气微气泡右心微泡显影持续时间长,差异有统计学意义(P<0.05);手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液较传统手振激活生理盐水对于RLS检出率更高,差异有统计学意义(P<0.05),手振加血激活生理盐水与手振激活50%葡萄糖溶液对RLS检出率无统计学差异(P>0.05),但手振加血激活生理盐水对于Ⅱ、Ⅲ级分流敏感度更高,差异有统计学意义(P<0.05);所有患者造影前后心率、血压、呼吸频率、血氧饱和度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:手振加血激活生理盐水、手振激活50%葡萄糖溶液是2种经济、安全、有效的右心声学造影剂,尤其是手振加血激活生理盐水,其造影效果较传统手振激活生理盐水更好,制备方便,值得临床推广。(本文来源于《临床心血管病杂志》期刊2017年12期）
肖凡,姚涵文[5]（2017）在《声学造影剂在超声心动图中的应用进展》一文中研究指出随着超声造影剂制备技术的不断改进和超声影像新技术的不断发展,声学造影技术在心脏疾病中的诊断作用日益重要。本文总结近年来声学造影技术在临床上应用的资料,评价声学造影在临床实践中的具体应用价值。(本文来源于《海峡药学》期刊2017年11期）
许丽[6]（2017）在《携抗p53抗体纳米金微囊声学造影剂早期诊断乳腺癌的超声分子显像研究》一文中研究指出目的:制备携抗p53抗体包载全氟丙烷(C_3F_8)的纳米金壳聚乳酸羟基乙酸(PLGA)核声学造影剂,对其物理性质进行表征,并定性定量观察其体内外超声靶向显像性能。方法:采用改进的单乳化挥发法、种子生长法及碳二亚胺法制备携抗p53抗体的纳米靶向超声造影剂(gold nanoshelled poly(D,L-lactide-co-glycolic acid)nanocapsules carrying anti p53 antibody,p53-PLGA@Au NCs),用高分辨扫描及透射电镜、马尔文纳米粒度电位分析仪等观察其形态粒径等;用细胞毒性实验考察其体内外细胞毒性;利用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等评估其体外寻靶能力及超声显像效果;建立裸鼠乳腺癌动物模型,采用22和50 MHz两种超声频率探讨纳米微囊体内超声分子显像效果,并检测裸鼠体内金元素观察微囊体内分布。结果:p53-PLGA@Au NCs呈球形或类球形,分散性好,平均粒径为247.7±108.2 nm,分散指数为0.127,Zeta电位是-34.2±5.8 mV;体外寻靶实验显示高表达p53蛋白的人乳腺癌MCF-7细胞周围有大量靶向纳米微囊环绕,流式细胞仪结果显示p53-PLGA@AuNCs与乳腺癌MCF-7细胞的结合率为73.00±5.21%,显着高于其与低表达p53蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞(2.21±0.45%)的结合率,差异有统计学意义(P<0.001);体外超声实验中p53-PLGA@Au NCs在2mg/mL浓度时超声强度峰值达86.8 dB,成像时间可持续8 min以上;体内超声显像实验中,在22 MHz及50 MHz两种不同频率下,p53-PLGA@Au NCs绿色彩色编码增强信号均十分明显,时间-强度曲线量化数据也显示靶向微囊的成像效果优于非靶向材料组和靶向封闭组。结论:成功制备携抗p53抗体的PLGA@Au靶向纳米微囊声学造影剂,粒径小,稳定性高,无明显细胞毒性,体内外靶向超声显像效果良好,有望为乳腺癌的早期诊断提供新思路。(本文来源于《上海交通大学》期刊2017-04-01）
朱连华,郭燕丽,范校周,熊星宇,黄海韵[7]（2016）在《携载CAIX多肽纳米级声学造影剂的制备及其在肿瘤超声分子显像中的实验研究》一文中研究指出目的制备携载CAIX多肽靶向多种恶性肿瘤的纳米级声学造影剂,并探讨其体外寻靶能力及体内特异性靶向显像能力。方法利用生物素-亲和素系统制备携载CAIX多肽的脂质纳米级声学造影剂,并对其物理特性及细胞毒性进行研究;用细胞免疫荧光鉴定CAIX在恶性肿瘤细胞膜上的表达及分布;普通光镜下观察靶向声学造影剂对CAIX表达阳性细胞的寻靶能力,并通过流式细胞术检测其与CAIX表达阳性细胞的亲和力,同时以CAIX表达阴性细胞作对照;体外多浓度梯度对比观察靶向纳米级声学造影剂与空白纳米级声学造影剂的显像效果;在裸鼠肝、肾及多种恶性肿瘤皮下移植瘤进行靶向声学造影剂的显像研究,同时以空白声学造影剂作对照。结果携载CAIX多肽的靶向纳米级声学造影剂形态圆整,平均粒径为(503.7±78.47)nm,其浓度低于2×10~6/ml时,对细胞无明显毒性作用,浓度高于2×10~7/ml时,对细胞有毒性作用;细胞免疫荧光表明肾癌786-O和宫颈癌Hela细胞膜高表达CAIX,胰腺癌BxPC-3细胞膜未表达CAIX;构建的靶向纳米级声学造影剂较对照组可特异性靶向聚集在786-O和Hela细胞周围,而与BxPC-3细胞结合的靶向声学造影剂数量与对照组比较差异无统计学意义,流式细胞术结果显示靶向声学造影剂与786-O和Hela细胞亲和力远远高于细胞与空白声学造影剂的亲和力,且两种声学造影剂与BxPC-3细胞的亲和力比较差异无统计学意义;两种声学造影剂在体外各浓度梯度的显像强度及在裸鼠的肝肾、BxPC-3细胞移植瘤中的峰值强度和消退时间无统计学差异;较空白纳米级声学造影剂,携载CAIX多肽的靶向纳米级声学造影剂在786-0和Hela细胞皮下移植瘤中的显像峰值强度明显增强,且消退时间明显延长。结论自制的携载CAIX多肽靶向纳米级声学造影剂特异性靶向CAIX表达阳性的细胞,并在相应移植瘤组织中有明显的增强显影效果,为多种恶性肿瘤的超声分子显像与靶向治疗奠定基础。(本文来源于《第叁届全国暨国际超声分子影像及生物效应和治疗学术会议论文集》期刊2016-04-08）
敖颖,简国亮,罗锦鳞[8]（2016）在《口服胃窗声学造影剂超声对胃部疾病的诊断价值》一文中研究指出[目的]探讨口服胃窗声学造影剂超声对胃部疾病疾病的诊断价值。[方法]入选经病理诊断确诊的108例胃部疾病患者作为观察组,均接受胃区常规超声、口服胃窗声学造影剂超声和胃镜检查;另选择同期经体检示无胃部疾病的健康志愿者33例作为对照组。对比观察2组超声表现和胃壁厚度,以病理诊断为金标准,观察常规超声、超声造影诊断胃部疾病的准确率。[结果]对照组胃壁超声图像呈清晰的5层结构,回声表现为3层强回声夹着2层弱回声,胃蠕动正常,胃壁连续完整,无增厚;观察组胃壁病变处出现不同程度增厚,局部胃壁蠕动减弱或消失,部分胃壁层次结构不清,并向周围邻近处浸润或转移;与对照组相比,观察组患者的胃病变处胃壁厚度显着增加(P<0.05);同时在良、恶性病灶的胃壁厚度对照中发现,恶性病灶的胃壁厚度明显大于良性病灶的胃壁厚度(P<0.05),超声造影诊断准确率显着高于胃常规超声(χ~2=34.012,P<0.05)。[结论]与胃常规超声相比,口服胃窗声学造影剂超声可以显着提高胃部疾病的诊断准确率,且操作简单,安全无痛苦,值得临床积极借鉴。(本文来源于《临床消化病杂志》期刊2016年01期）
张慧,刘学彬,杨姣,马果丰,袁莉[9]（2015）在《口服胃窗声学造影剂超声对十二指肠瘀滞症的诊断价值》一文中研究指出目的探讨口服造影剂超声对十二指肠瘀滞症的诊断价值。方法回顾性分析由X线消化道钡餐检查确诊的26例十二指肠瘀滞症病例的超声结果和临床表现。结果 26例患者在口服造影剂超声检查中均可见十二指肠近端受压,球部、降部及水平部近端持续性充盈,肠腔扩张,呈"漏斗形"、"葫芦形"等改变征象,造影剂在十二指肠近端来回流动,其中19例通过缓慢,20例腹主动脉(AO)与肠系膜上动脉(SMA)夹角减小。结论超声检查对十二指肠瘀滞症具有较高的敏感性和准确性,与X线相比无放射性、可重复性好,可作为本症的一种新诊断方法而应用临床。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2015年01期）
韩小华[10]（2014）在《可用以评价子宫内膜容受性的KDR单抗脂质声学造影剂的制备及靶向结合实验研究》一文中研究指出研究背景与目的子宫内膜容受性是指子宫内膜处于一种允许胚泡黏附直至完成胚胎着床的状态。在月经周期中子宫内膜仅有一段时间允许胚胎着床,一般为黄体中晚期,其受严格的时间和空间限制,一般仅为排卵后的6-8天,持续不到48小时,临床上也称为子宫内膜“种植窗”期。体外受精-胚胎移植(in vitrofertilization-embryo transfer, IVF-ET)技术为不孕症患者提供了福音,但在临床实际工作中,即使应用相当高的技术筛选了相对优质的受精卵,即体外受精及胚泡移植入子宫的成功率在90%以上,但胚胎种植的成功率一般仅为30%-40%。有研究表明60%以上胚胎种植失败的因素归因于不合适的子宫内膜容受性。如何客观评价“种植窗”期子宫内膜容受性,避免盲目移植,以提高胚胎着床率是生殖医学界关注的热点问题之一。现阶段评价子宫内膜容受性的方法有多种,子宫内膜活检随后进行组织及相关生物学指标的测定是临床较公认的评估方法,但其为有创性检查,在IVF-ET周期中不具可操作性。宫腔灌洗液、宫颈粘液生物标记物的测定,血液特殊激素表达测定及基因标记现阶段也有应用,但缺乏相应准确而又敏感的指标或价格昂贵、技术要求较高。彩色多普勒超声技术可作为一种无创手段测定子宫血流灌注情况来评价子宫内膜容受性,但其敏感性、特异性学术界尚存在争议。寻找一种既无创、又能客观评价子宫内膜容受性的方法以提高胚胎种植率是一个亟待解决的问题。Kodaman等多位学者证实,多种细胞因子和生长因子在黄体中晚期短暂、瞬间性高表达,具有显着的时空表达特征,且定位较专一,参与胚胎着床过程,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、白血病抑制因子、整合素、白细胞介素、表皮生长因子等。在受精卵着床、胚胎植入过程中,血管的成熟无疑是最重要的,VEGF是子宫血管发育重要的调节因子之一。Kaczmarek等研究发现,动物“种植窗”期子宫内膜VEGF及其受体flk-1/KDR均显着上调,且VEGF及其受体的表达部位存在从子宫内膜普遍表达到着床位点局部高表达的转变,提示VEGF可作为植入胚胎与接受状态子宫内膜的血管结构之间的局部信号分子。Hwu YM等证实VEGF与受体flk-1/KDR结合后发挥多种生物学功能,以利于胚胎着床,如血管内皮细胞增殖、血管生成、增加血管通透性、介导信号转导、改变内皮细胞基因的表达、调节子宫内膜生长等。“种植窗”期子宫内膜VEGF及其受体flk-1/KDR表达均显着增加,表达定位于上皮细胞、基质细胞、子宫肌层和血管内皮细胞,以促进血管生成、重构、扩张以及增加血管通透性,这一过程是胚胎成功种植的必要条件。Sengupta等证明于排卵后5-10天给予恒河猴VEGF拮抗剂后,其临床妊娠率较对照组显着下降。以上实验表明VEGF及受体KDR的表达水平对评价子宫内膜容受性具有重要意义。靶向超声造影剂是近年来萌芽的一项新兴研究领域,并逐渐成为国际上探讨的热点课题。靶向超声微泡表面携带的特异性抗体或配体能与靶细胞表面的抗原或受体结合,超声检测靶向造影剂在组织和器官中的分布,可获得组织和器官的分子学特征,称之为“超声分子学成像”,是一种无创检测分子水平的成像技术,其在炎症、血栓、心肌缺血、肿瘤等诸多方面均展示了一些十分诱人的前景。以子宫内膜血管组织的KDR为靶点进行靶向特异性显影而评价子宫内膜容受性的研究,国内外尚未见报道。本研究拟利用超声分子影像学优势,以KDR为靶目标,借助生物素-亲和素桥,制备携KDR单抗的靶向超声造影剂(Microbubblles-Biotin-Avidin-Biotin-KDR, MB-BAB-KDR),并通过体内外的靶向结合实验来探讨其在评价子宫内膜容受性中的价值。材料与方法1MB-BAB-KDR的制备及生物活性测定1.1普通生物素化脂质微泡(MB-B)的制备将生物素化二硬脂酞磷脂酞乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG-2000-Biotin)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DistearoylsnGlyeeroPhosPhoethanola, DPPC)、聚乙二醇-4000(PEG-4000)、泊洛沙姆等材料,参照文献,按一定比例溶于蒸馏水中,在75℃恒温水浴箱上摇匀使其充分溶解；通入全氟丙烷(C3F8)气体,机械振荡法振荡至成为乳白色液体；4℃度静置分层,弃下清液,纯化微泡叁次收集上层白色微泡,制得MB-B。1.2生物素-亲和素桥连的靶向脂质微泡(MB-BAB-KDR)及单纯单抗脂质微泡(MB-B-KDR)制备按一定比例向MB-B中加入亲和素,冰上孵育30min,洗涤纯化3次后,再加入一定比例的生物素化KDR单抗,静置后洗涤纯化3次,制得生物素-亲和素桥连的靶向脂质微泡MB-BAB-KDR。向MB-B中直接加入相同比例的生物素化KDR单抗,静置后洗涤纯化3次,制得单纯单抗脂质微泡MB-B-KDR。所有微泡盛于安剖瓶内,于4℃冰箱内保存、备用。1.3光学显微镜及库尔特粒径分析仪测定微泡物理性质将载玻片及盖玻片擦拭干净,轻轻用注射器将微泡悬液吸出少许,滴在载玻片中央,并将盖玻片盖在载玻片上；使悬液充满盖玻片和载玻片之间,倒置并静置3min,使其靠浮力作用附于载玻片上；普通光学显微镜下观察微泡的镜下形态。另外用注射器吸取MB-B、MB-B-KDR、MB-BAB-KDR叁种微泡悬浮溶液各1ml,以1：10000比例稀释,取2ml微泡上机,库尔特颗粒粒度分析仪测定微泡粒径、浓度及粒径分布情况。1.4MB-BAB-KDR生物活性的测定分别取MB-BAB-KDR、MB-B-KDR、MB-B各lml与等量FITC标记的羊抗大鼠IgG(H+L)(简称二抗)孵育,洗涤纯化3次后,荧光显微镜下观察叁种微泡与二抗的结合情况。依据以下目测标准对荧光强度进行分级：0级：未见明显荧光；Ⅰ级：可见到荧光,但荧光微弱或暗淡；Ⅱ级：可见明亮荧光。2MB-BAB-KDR的体外特异性结合及黏附稳定性实验2.1脐静脉内皮细胞(IUVECs)KDR的表达检测2.1.1流式细胞实验法检测HUVECs的KDR表达将由南方医科大学病理实验室提供的HUVECs复苏、培养,取生长对数期的HUVECs,用0.25%胰酶消化成单细胞悬液加入离心管中,离心弃上清液并洗涤1次；加入稀释的KDR单克隆抗体200μl吹打混匀,置4℃孵育30min,离心洗涤弃上清液3次；再加入FITC标记的二抗200μl,吹打混匀,4℃避光孵育30min,离心洗涤弃上清液3次；将细胞重新悬浮于500ul蒸馏水中,置流式管中应用流式细胞仪检测HUVECs的KDR表达情况,以同等量的HUVECs悬浮为对照组。2.1.2免疫组化法检测HUVECs的KDR表达取生长对数期HUVECs,用0.25%胰酶消化后,接种于6孔板中玻片上,加含10%胎牛血清DMEM全培液,5%C02培养箱孵育,直至细胞80%饱和,PBS洗涤3次,4%多聚甲醛固定,行常规KDR免疫荧光检测。2.2MB-BAB-KDR与HUVECs的体外特异性结合实验用荧光染料DiI给生长良好的传代]SUVECs着色,着色细胞继续传代培养至下一代细胞,在六孔板中培养制作细胞爬片,分别用MB-BAB-KDR、 MB-B-KDR、MB-B与爬片上的HUVECs孵育30min,漂洗六次,光镜及荧光显微镜观察微泡与细胞结合情况。取10个随机视野的细胞进行观察,每个细胞结合5个或以上的微泡视为花环形成阳性,荧光显微镜下观察花环形成情况,计算花环形成率,计数资料以百分率表示。同时用MB-BAB-KDR、MB-B-KDR、MB-B分别与无DiI染色的HUVECs孵育作对照,光镜下计数成环率。2.3平行板流动腔法检测MB-BAB-KDR的体外黏附稳定性35mm培养皿甲醇漂洗后风干、备用。用PBS溶液分别配备1000ng/ml、600ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、10ng/ml的小鼠KDR Fc溶液,用微量加样枪按200μl滴加在培养皿中央,置4℃冰箱过夜备用；次晨使用前用0.05%的吐温20冲洗6遍,3%的TBS-小牛血清白蛋白液封闭1h。将包被好的培养皿与平行板流动腔装置连接,在1.2dyn/cm2剪切应力下,浓度为5×106个/ml的MB-BAB-KDR经微量注射泵通过平行板流动腔,自显微镜下观察有微泡出现后开始连续录像6min。以10OOng/ml KDR Fc包被+大量抗小鼠KDR单抗封闭(封闭组)和Ong/ml KDR Fc包被(空白组)为对照。所有分组均检测3个样本。25帧/s的视频采集后,利用IPP (Image-Pro-Plus)图像分析软件的图像均化及自动跟踪功能,在细胞计数板的协助下测量不同浓度视野内于整分钟点结合的MB-BAB-KDR个数。3MB-BAB-KDR与小鼠子宫血管内皮细胞的KDR体内靶向结合初步实验3.1小鼠模型的制备KM雌性小鼠(由南方医科大学实验动物中心提供)2只(8-10周龄,重约30g),1只异氟烷麻醉后解剖,将小鼠子宫暴露,对小鼠子宫位置及形态了解,另1只利用VEVO2100高频超声生物仪,40MHz高频探头对小鼠子宫行常规二维超声成像,为后期小鼠子宫分子成像提供解剖基础。另取KM小鼠18只(雌性15只,雄性3只,8-10周龄,重约30g),将健康成年雌雄小鼠按2：1于前一晚20：00合笼,自由饮食和饮水,室温25℃左右,次日晨检查阴栓形成情况。根据雌性小鼠被检查到阴栓的时间进行分组,检查到有阴栓为受孕第一天定义为day-1(D1),其余妊娠天数类推,分别制备day-2(D2)组、day-4(D4)组小鼠,将没有合笼的雌性小鼠定义为day-0(DO)组。叁个组的小鼠子宫为研究对象,每组各5只。3.2MB-BAB-KDR与小鼠子宫血管内皮细胞的靶向结合实验用异氟烷将不同子宫容受性的小鼠麻醉,经尾静脉随机注射MB-BAB-KDR或对照微泡(MB-B)后,用VEVO2100小、动物超声成像仪,40MHz高频探头,进行小鼠子宫成像。每只小鼠经尾静脉注射靶向微泡(MB-BAB-KDR)和普通微泡(MB-B)各5×107个,两种微泡注射顺序随机,两次造影之间间隔30min。于每次注射微泡4min后,先采集200帧图像,然后触发burst序列(transmit power,100%; mechanical index,0.63) ls,再采集200帧。用触发burst前后的图像进行减影,得到的信号即为粘附的靶向微泡的信号,将其用绿色伪彩标示。整个实验过程中保持动物及探头的位置固定不变。依据伪彩颜色的明显程度对靶向吸附微泡数进行半定量分析。以下目测标准对造影伪彩绿色强弱进行分级：0级：未见明显绿色,即减影前后,图像无明显差别,靶向微泡没有或较少吸附,无法显示；Ⅰ级：可见到绿色,但绿色较少,为星点状分布；Ⅱ级：绿色较为明显,且绿色范围较多,呈小片状分布,即减影前后差别较大,靶向吸附微泡数目较多。3.3免疫荧光法检测小鼠子宫血管内皮细胞KDR的表达分别取D0,D2,D4时期的小鼠子宫制作冰冻切片,用免疫荧光法分别对其KDR的表达情况进行检测。同时为了形象观察小鼠子宫血管内皮细胞上的KDR的表达,应用带有绿色荧光的CD31对小鼠子宫血管内皮细胞进行标示。荧光显微镜下观察小鼠子宫血管内皮细胞及其上的KDR的着色情况,依据以下目测标准对红色荧光标记的KDR进行分级：阴性：未见明显红色荧光,弱阳性：可见到红色荧光,但荧光微弱或暗淡,阳性：可见较明亮红色的荧光。带绿色荧光CD31标记的血管内皮细胞的分级为：阴性：未见明显绿色荧光；弱阳性：可见到绿色荧光,但荧光微弱或暗淡,规律性一般,未见明显管条状分布；阳性：可见较明亮绿色的荧光,且排列规律,呈管条状分布,即血管形成,血管内皮细胞排列规律。4统计学方法采用SPSS13.0软件包进行统计学分析,计量资料数据以均数±标准差(Mean±SD)表示。MB-B、MB-BAB-KDR及NMB-B-KDR叁种微泡粒径之间的比较采用单向方差分析,计数资料成环率采用百分率表示,数据比较采用多个独立样本比较的非参数秩和检验；平行板流动腔实验稳定结合的靶泡数目之间采用一个重复测量两因素方差分析。免疫荧光法测得的MB-BAB-KDR上单抗的生物活性、MB-BAB-KDR在小鼠子宫的靶向超声分子显影采用半定量分析方法。检验水准以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1MB-BAB-KDR的制备及性能测定1.1叁种微泡基本物理性能MB-B、MB-BAB-KDR及NMB-B-KDR的悬浮液外观呈乳白色,在200倍光学显微镜下观察,微泡粒径分布均匀无聚集现象,单个微泡外观圆整,为透亮气泡。库尔特粒径分析仪测得MB-B的平均直径约(2.19±1.35)μm,浓度约9.8×108个/ml；MB-BAB-KDR平均直径为(2.42±1.71)μm,浓度约为9.6×108个/ml；MB-B-KDR平均直径为(2.38±1.60)u m,浓度约为9.6×108个/ml。叁种微泡的外观、形态均未见明显差别,粒径大小差异无统计学意义。1.2MB-BAB-KDR生物活性的测定与荧光二抗孵育后,MB-BAB-KDR的荧光强度为Ⅱ级,MB-B-KDR荧光强度为Ⅰ级,MB-B荧光强度为0级。2MB-BAB-KDR的体外特异性结合及黏附稳定性实验2.1HUVECs KDR表达的测定流式细胞仪测得HUVECs的FITC携带率达99%,即所使用的HUVECs的KDR为高表达状态。免疫荧光实验显示HUVECs的KDR呈强阳性表达,阳性物质定位于细胞膜及胞浆内。2.2MB-BAB-KDR与HUVECs体外靶向特异结合情况光镜下可见MB-BAB-KDR围绕在有或无DiI染色的HUVECs周围或黏附于其之上,形成花环样结构,有DiI染色的HUVECs花环形成率平均为89.97%,无DiI染色的HUVECs花环形成率平均为88.22%。荧光镜下被DiI染色的细胞发出明亮的红色荧光,黏附于细胞周围的被FITC标记的MB-BAB-KDR外壳发出明亮的绿色荧光,用Nikon成像系统里面的重迭软件重合图片,可清晰看到细胞周围靶向微泡吸附。MB-B-KDR组成环率为7.25%,MB-B组的成环率为3.33%,均显着低于MB-BAB-KDR组,P<0.005。2.3平行板流动腔实验检测MB-BAB-KDR的黏附稳定性实验平行板流动腔实验显示在血流剪切应力为1.2dyn/cm2下,MB-BAB-KDR可与浓度为1000ng/ml、600ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、10ng/ml的KDR Fc包被结合,所录视频经IPP软件处理,稳定黏附的MB-BAB-KDR与移动的MB-BAB-KDR将被区别。MB-BAB-KDR经过不同浓度KDR Fc包被的平行板流动腔,重复测量方差分析显示,观察6min内,MB-BAB-KDR结合数目随着平行板流动腔上KDR Fc包被浓度的提高而增加(F=571.926,P<0.01)；在同一浓度下,随着时间的推移,MB-BAB-KDR结合数目也在增加。MB-BAB-KDR几乎不能与空白培养皿及被抗小鼠KDR单抗封闭掉位点的KDR Fc结合,在整个6min时间段内,结合总数仅为3-5个,且不同时间点结合在视野不同地方,即为随机结合且不能抵抗剪切力。3MB-BAB-KDR与小鼠子宫血管内皮细胞的KDR体内靶向结合实验雌雄小鼠合笼后,分别就不同时间(DO,D2,D4)进行AMB-BAB-KDR靶向超声造影。观察小鼠子宫超声靶向显影绿色伪彩区,DO期为0级,D2、D4期分别为Ⅰ级、Ⅱ级；病理实验证实,小鼠子宫血管内皮细胞的KDR的表达在D0、D2、D4期是阴性、弱阳性、阳性,而应用MB-B进行造影,小鼠子宫超声靶向显影绿色伪彩区在叁组中均为0级。结论1本研究采用生物素-亲和素桥法成功构建了携KDR单抗的靶向脂质超声微泡MB-BAB-KDR。2体外结合实验证实,制备的MB-BAB-KDR可与KDR高表达的HUVECs特异性结合形成花环样结构,并可与流动腔上的KDR Fc包被稳定结合,结合数目随着KDR Fc包被浓度及时间增加呈现增多趋势,表明制备的MB-BAB-KDR保留了与KDR特异性结合的生物活性及抵抗一定血流剪切力的能力,为体内靶向分子检测KDR奠定了实验基础。3小鼠体内实验证实,制备的MB-BAB-KDR可与小鼠子宫血管内皮细胞的KDR结合,并且超声分子显影级别与KDR的表达水平一致,初步实现了子宫血管内皮细胞KDR表达的靶向超声分子检测,使基于KDR的子宫内膜容受性无创性评价成为可能。4本课题的实施使临床上应用靶向超声造影技术无创评价子宫内膜容受性成为可能。另外该课题的实施对于与子宫内膜容受性相关的其他细胞因子的靶向分子显像有推广作用,为进一步超声介导载药或载基因微泡对改善子宫内膜容受性的靶向治疗及疗效评价提供了技术支持。(本文来源于《南方医科大学》期刊2014-04-20）
声学造影剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:肝癌是一种恶性程度较高的消化系统肿瘤,其治疗方式以手术为核心,但因其发病隐匿,只有少数患者就诊时可以获得手术机会。化疗为晚期肝癌治疗方式之一,但大部分患者无法承受化疗药物全身毒副作用,故限制了其临床应用。近年来研究发现超声造影剂可作为载体实现药物靶向递送,从而减少药物毒副作用。因此,本文研究制备RGD靶向载阿霉素纳米泡减少化疗副作用,增敏晚期肝癌的化疗效果。方法:(1)采用薄膜水合法制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD载DOX磷脂纳米泡(RDPD),通过透射电子显微镜及光学显微镜观察其形态,粒径检测仪检测其粒径大小、粒径分布情况及表面电位情况,利用酶标仪测量RDPD载药量及包封率,评价其载药能力。(2)检测DP纳米泡、RDP纳米泡及RDPD纳米泡体外显影效果。应用细胞计数原理检测以上纳米泡体外稳定性,并绘制体外稳定性曲线。(3)利用超声诊断仪检测其体内稳定性及测定TIC曲线,评估叁种造影剂达峰强度、达峰时间及曲线下面积(AUC),并比较叁种纳米泡以上指标差异。(4)利用细胞培养技术,检测DP、RDP、RDPD纳米泡体内急性毒性及细胞毒性,评价以上叁种纳米泡生物安全性。(5)建立裸鼠肝癌皮下瘤模型,利用超声诊断仪评价DP、RDP及RDPD纳米泡肿瘤靶向性。采用免疫组织化学染色的方法检测正常裸鼠肝脏及皮下瘤αvβ3整合素阳性表达情况。(6)将成功建模荷瘤鼠分为5组,分别给予同等剂量生理盐水、空白纳米泡、RGD纳米泡、RGD携DOX纳米泡、DOX溶液,比较各组间给药前后肿瘤大小、超声弹性成像及组织病理差异。结果:(1)采用薄膜水合法成功制备空白磷脂纳米泡(DP)、RGD磷脂纳米泡(RDP)及RGD携DOX磷脂纳米泡(RDPD),其粒径分别为292 nm、303 nm、322 nm,其电位分别为-3.69 mv、-2.69 mv、-2.68 mv。RDPD载药量为3.02%,包封率为71%,载药能力良好。(2)DP、RDP、RDPD纳米泡均可实现体外显影,且显影效果良好。初始纳米泡浓度叁组间无明显差异(P>0.05)。(3)评估DP、RDP、RDPD叁种造影剂达峰强度、达峰时间及AUC曲线下面积均无明显差异(P=0.176、0.100、0.733>0.05)。体内稳定性DP与RDP、RDPD差异有统计学意义(P=0.046、0.038<0.05)。(4)DP与RDP不具有细胞毒性,而DOX溶液与RDPD具有细胞毒性。DOX溶液组与RDPD组细胞毒性差异有统计学意义(P<0.001)。DP与RDP无明显体内毒性,DOX溶液与RDPD均有体内毒性。RDPD组体内毒性与DOX差异有统计学意义(P=0.0493<0.05)。病理表现可见DOX组具有心脏毒性,其余各组病理表现均正常。(5)RDP及RDPD组空化前后db值差异有统计学意义(P=0.007、0.004<0.05),RDP、RDPD组空化前后db值差值与DP组差异有统计学意义(P=0.032、0.008<0.05)。免疫组化结果表明肿瘤组织αvβ3表达阳性,而肝脏组织表达极低。(6)RDPD组与DOX组肿瘤体积变化较空白组差异有统计学意义(P<0.001),RDPD组较DOX组肿瘤体积变化差异有统计学意义(P=0.008<0.05)。RDPD组与DOX组瘤体硬度较空白组差异有统计学意义(P=0.001、0.002<0.05),RDPD组较DOX组瘤体硬度差异有统计学意义(P=0.011<0.05)。各组瘤体病理结果显示:RDPD组肿瘤坏死最为明显,DOX组可见部分坏死,RDP组可见极少坏死,DP组与空白对照组未见明显坏死区域。结论:1、采用薄膜水合法可制备空白磷脂纳米泡、RGD靶向纳米泡及RGD携载DOX纳米泡,其粒径分布均匀,体内外稳定性、成像效果均较好,载药量与包封率尚佳。空白纳米泡及RGD纳米泡不具有体内毒性及细胞毒性,但RGD载DOX纳米泡具有细胞毒性。相比于DOX溶液,RDPD体内毒性较低,可实现化疗药物体内减毒。2、肝癌新生血管avβ3受体表达程度较高,而正常肝脏组织avβ3受体表达极低。携RGD肽纳米泡载体具有肝癌靶向性,可靶向肝癌新生血管,结合UTMD技术,可实现化疗药物靶向释放,从而提高肿瘤局部血药浓度。起到增敏晚期肝癌化疗效果的作用。但本实验未对其机制进行研究,故后期仍需进一步探索。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
声学造影剂论文参考文献
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