碳代谢基因gabT调控生防菌Snea253的γ-氨基丁酸代谢途径影响杀线虫活性

论文摘要

【背景】委内瑞拉链霉菌Snea253是本实验室前期获得的具有杀植物线虫活性的生防放线菌,通过生物信息学分析,γ-氨基丁酸转氨酶基因（gabT）是参与Snea253碳代谢的重要基因之一。【目的】明确gabT基因通过调控Snea253的γ-氨基丁酸（γ-Aminobutyric acid,GABA）代谢通路,从而影响菌株的活性。【方法】以紫外诱变所得弱毒株（Snea253-R）为材料,以南方根结线虫为靶标,在弱毒株中过表达gabT基因,通过酶联免疫法（ELISA）和高效液相色谱法（HPLC）分别检测菌株中GABA和下游代谢产物琥珀酸的含量及杀线虫活性,同时检测在不同碳源培养条件下野生型菌株gabT基因表达水平、产物含量和杀线虫活性。【结果】过表达菌株R-p IB139的gabT基因上调表达,GABA含量降低,琥珀酸含量升高,杀线虫活性提高了39%;在8种不同碳源培养条件下,gabT基因在野生株中相对表达量较高的培养基碳源是可溶性淀粉和玉米淀粉,其发酵液中GABA含量较低,发酵液中下游代谢产物增多,杀线虫活性较高。【结论】通过改变gabT基因的表达,明确GABA支路在调控Snea253代谢以提高杀线虫的过程中发挥重要作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、载体和根结线虫
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•     1.1.3 试验所用培养基和缓冲液
•   1.2 方法
•     1.2.1 杀线虫活性的检测
•     1.2.2 发酵液中GABA和琥珀酸含量的检测
•     1.2.3 表达载体pIB139-gabT的构建
•     1.2.4 生防菌Snea253原生质体的制备与转化
•     1.2.5 gabT基因表达量的检测
•     1.2.6 碳源的改变对Snea253的影响
• 2 结果与分析
•   2.1 gabT基因过表达结果
•     2.1.1 p IB139-gabT过表达载体的构建
•     2.1.2 过表达菌株R-p IB139中gabT基因的表达量检测
•     2.1.3 Snea253-R和R-p IB139中GABA、琥珀酸含量检测
•     2.1.4 过表达菌株R-p IB139杀线虫活性检测
•   2.2 不同碳源对生防菌Snea253的影响
•     2.2.1 不同碳源对gabT基因表达量的影响
•     2.2.2 发酵液中GABA和琥珀酸的含量检测
•     2.2.3 不同碳源培养的Snea253杀线虫活性检测
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 于冬梅,朱峰,邢志富,范海燕,朱晓峰,段玉玺,王媛媛,刘晓宇,陈立杰

关键词: 氨基丁酸转氨酶基因,委内瑞拉链霉菌,氨基丁酸,琥珀酸,杀线虫活性

来源: 微生物学通报 2019年12期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 农业基础科学,植物保护

单位: 沈阳农业大学植物保护学院,吉林省农业科学院植物保护研究所,沈阳农业大学生物科学技术学院,沈阳农业大学理学院

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0201104),国家自然科学基金(31471748)~~

分类号: S476.1

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190037

页码: 3257-3266

总页数: 10

文件大小: 807K

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