导读:本文包含了体细胞克隆山羊论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:体细胞,陕北,延边,胚胎,山羊,绒山羊,榆林。
体细胞克隆山羊论文文献综述
郭文[1]（2018）在《2000年世界首批成年体细胞克隆山羊降生》一文中研究指出2000年6月16日，世界首例成年体细胞克隆山羊“元元”在西北农林科技大学种羊场顺利降生，标志着我国动物体细胞克隆技术已跻身世界先进行列。这是由西北农林科技大学生物工程研究所所长、教授、博士生导师张涌主持的国家自然科学基金重点项目和原农业部重点项目“体细(本文来源于《陕西日报》期刊2018-11-24）
王丙萍[2]（2014）在《靶除FGF5基因体细胞克隆绒山羊的研究》一文中研究指出FGF5基因是FGF基因家族中的一员,在毛发生长周期中具有重要的调控作用。FGF5基因突变可以导致毛发生长周期中生长期的延长,从而使毛发的长度增加。本研究拟靶除内蒙古白绒山羊的FGF5基因,利用核移植方法创造高产绒量山羊。以我区的白绒山羊为对象,建立胎儿皮肤成纤维细胞系；设计pLOX-EGFP-FGF5、 RNAi-FGF5、TALEN-FGF5,叁种FGF5基因靶除载体；分别将叁种敲除载体用脂质体介导法、电转法、转染仪介导法转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,筛选阳性细胞并扩繁；以其为核供体构建转基因山羊重构胚并移植到同步发情的受体羊输卵管内,制造转基因克隆山羊并鉴定。1.根据已经公布的牛和山羊的FGF5基因序列设计引物克隆内蒙古白绒山羊的FGF5基因,发现FGF5基因具有叁个外显子和两个内含子,cDNA长度为924bp。根据基因序列设计并构建合成3种靶除绒山羊FGF5基因的载体,分别为基因打靶载体pLOX-EGFP-FGF5,RNA干扰载体RNAi-FGF5-1#和RNAi-FGF5-2#,以及TALEN载体TN000201、TN000202、TN000204。测序及酶切鉴定结果表明载体构建正确并可用。2.采用组织块种植法分离培养了9个绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞系；通过G418敏感度实验,确定了各个细胞系的最佳G418筛选浓度,并选择对G418抗性较好的两个细胞系goat6#和goat9#作为筛选转基因阳性细胞的细胞系；分别应用脂质体介导法、电转法、转染仪介导法将3种载体转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,最终筛选出3种转基因阳性细胞系。3.以筛选鉴定得到3种转基因阳性细胞系为核供体,分别构建转基因克隆胚胎。应用基因打靶技术敲除FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植46只受体山羊,妊娠4只,妊娠率为8.7%。1只羔羊存活4天后死亡,2只羔羊出生后几分钟死亡,目前健康存活羔羊1只。应用RNA干扰技术沉默FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植143只受体山羊,妊娠24只,妊娠率为16.78%,但胎儿均发生流产。应用TALEN技术敲除FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植62只受体山羊,经B超检测发现有5只受体羊怀孕,妊娠率为8.06%。4.应用基因打靶技术敲除FGF5基因的转基因克隆羔羊经PCR鉴定,检测出编号为083的羔羊发生了FGF5基因的双敲除,目前健康状况良好。其余叁只羔羊为非转基因的克隆羊。在应用RNA干扰技术沉默FGF5基因中,通过实时荧光定量PCR对流产胎儿进行鉴定,结果表明这些胎儿FGF5基因的表达量均发生了明显的降低。应用TALEN技术靶除FGF5基因的转基因克隆羔羊,经PCR产物测序鉴定,结果表明4只新生羔羊FGF5基因的靶标区域均缺失了两个碱基,造成了FGF5基因的移码突变。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
孙婧陶,尹多,柳海星,李钟淑,方南洙[3]（2013）在《亚硒酸钠对延边奶山羊卵母细胞体外成熟及体细胞克隆重构胚发育的影响》一文中研究指出在体外培养液中添加亚硒酸钠,研究其对延边奶山羊卵母细胞体外成熟及对核移植重构胚胎后期发育的影响。在卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的抗氧化剂亚硒酸钠(SS)(0.0、2.5、5.0、10.0ng·mL-1),以卵母细胞成熟率、细胞内活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)水平为指标鉴定试验组卵母细胞成熟质量;以延边奶山羊乳腺上皮细胞为供核细胞,进行体细胞核移植(SCNT),比较重构胚发育能力,染色观察重构胚质量。结果表明,5.0ng·mL-1 SS可以明显提高卵母细胞成熟率,提高重构胚的发育能力。同时,5.0ng·mL-1 SS能显着降低卵母细胞内ROS含量以及显着提高卵母细胞内GSH含量,增加重构胚细胞数量。研究表明,5.0ng·mL-1SS能显着促进延边奶山羊卵母细胞的体外成熟及提高重构胚发育率。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2013年11期）
柳海星[4]（2013）在《转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化》一文中研究指出人血清白蛋白(Human serum albumin, HSA)是迄今为止产量最大、用量最大的蛋白质药物。可是现在的生产方式主要是人的血液通过分级过滤获得,产量有限,而且因为血浆来源复杂,容易导致污染。因此,通过转基因技术构建乳腺表达载体,利用体细胞克隆技术得到分泌含人血清白蛋白乳汁的转基因克隆动物,并从动物乳汁中提取人血清白蛋白,是解决人血清白蛋白供应短缺的有效方法。乳腺生物反应器生产人血清白蛋白具有生产成本低、产品产量高、活性高、易于纯化等优点。制约转基因乳腺生物反应制药的主要因素是体细胞核移植技术效率低下。因此,本研究以延边奶山羊和本地绵羊为研究对象,对卵母细胞体外成熟、延边奶山羊-绵羊重构胚胎的构建及体外发育进行了研究,以期提高核移植效率,为以后得到表达人血清白蛋白的转基因延边奶山羊奠定坚实的基础。本研究共分为叁个部分,第一部分进行了不同核成熟抑制剂及抗氧化剂对绵羊卵母细胞体外成熟的影响的研究；第二部分进行了转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚的构建研究；第叁部分是表没食子儿茶素没食子酸酯(Epi-gallocatechin-3-gallate, EGCG)对转人血清白蛋白延边奶山羊-绵羊重构胚体外发育质量的影响。主要研究结果如下：1.在绵羊卵母细胞体外成熟培养过程中,核成熟抑制剂HX、IBMX最适宜的添加浓度分别为2mM和0.2mM,抗氧化剂最佳添加量,除了半胱氨酸为0.6mM、 EGCG为5μM之外,其余叁种β-ME、VC、VE最佳添加量均为100μM；2.盲吸去核法或化学辅助去核法去核,重构胚的卵裂率及囊胚率没有显着差异,但化学辅助去核法(0.2μg/mL的Deme处理0.5h)去核率为100%,可以高效快速地去核,且不影响重构胚的早期发育；3.延边奶山羊-绵羊重构胚的适宜电融合参数为2个120V,40μs次的电脉冲,适宜激活方法为Ion预激活5分钟,6-DMAP激活2h；4.重构胚体外培养时EGCG的适宜添加浓度为15μM,适宜添加时间为IVM和重构胚体外培养1-2天。(本文来源于《延边大学》期刊2013-03-15）
屈雷,雷安民,闫海龙,于鸿浩,袁超[5]（2012）在《陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆》一文中研究指出【目的】利用体细胞核移植技术克隆陕北白绒山羊优秀种公羊个体。【方法】以特别优秀成年陕北白绒山羊种公羊耳部皮肤成纤维细胞为供体细胞,体外培养成熟的陕北白绒山羊卵母细胞作为受体,利用显微操作方法对成熟卵母细胞进行去核操作,然后将供体细胞注射到其卵周隙内,经电融合将其导入去核卵母细胞内形成核移植重组胚。利用钙离子载体Ionomycine联合蛋白酶抑制剂6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)对核移植重组胚进行激活处理,挑选激活后完整的胚胎继续进行体外培养,然后在2～16细胞期时将克隆胚胎移植到相应的同期发情受体母羊体内,利用PCR-RFLP技术鉴定克隆羊。【结果】构建了体细胞核移植胚胎253枚,重组胚胎的融合率为71.54%(181/253),体外培养后的卵裂率为68.33%(123/180),囊胚发育率为25.20%(31/123);在此基础上,构建了537枚克隆胚,将其中卵裂的359枚分别移植到32只代孕母羊体内,移植60d后,有2只受体母羊确认妊娠,最终1只受体母羊妊娠第4月流产出2只死羔;另1只受体母羊维持到期并顺产体细胞克隆羊1只。经遗传学鉴定,2只流产羊羔与1只存活个体均为体细胞核移植后代。【结论】获得陕北白绒山羊克隆个体,建立了相对完善的陕北白绒山羊克隆技术体系。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2012年09期）
王贺[6]（2011）在《延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚融合、激活条件的研究》一文中研究指出异种间的体细胞克隆技术为保护和拯救珍稀濒危动物、人类器官移植开辟了一条崭新的途径,目前,虽然有种间体细胞核移植动物出生,但是较低的成功率限制了这项技术在实践中的应用。种间核移植仍面临着很大的困难,需要寻求适宜的供受体细胞组合及早期胚胎发育的环境。为了给动物种间核移植研究积累知识和经验,本实验对延边奶山羊-绵羊重构胚的融合、激活做了预先一步的研究。本实验采用延边奶山羊耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,以绵羊MⅡ期去核的卵母细胞为核移植受体,构建了山羊-绵羊异质重构胚。我们设计了一系列的试验以优化延边奶山羊-绵羊重构胚的融合激活效果,探讨了不同融合电场强度、脉冲次数、脉冲时程、融合后平衡时间、融合液浓度及激活方法对重构胚融合率及重构胚体外发育率的影响。实验结果如下：1、甘露醇浓度为0.25mol/L、0.28mol/L时重构胚的融合率(50.12%vs52.74%)和卵裂率(53.50%vs55.52%)差异不显着(P>0.05),但与0.30mol/L组相比差异显着(P＜0.05),0.28 mol/L组的桑椹胚发育率(17.36%)明显高于其他两组,相比差异显着(P<0.05);2、电场强度为1000v/cm时重构胚的融合率与其它各组之间相比差异显着(P<0.05),电场强度为1200v/cm,1400v/cm以及1600v/cm时重构胚的融合率之间差异不显着(P>0.05)；1400v/cm的卵裂率(60.84%)和囊胚率(8.14%)最高,与1200 v/cm相比差异不显着(P>0.05),但与其他各组相比差异显着(P＜0.05)：3、2次脉冲的融合率与1次脉冲相比差异显着(P＜0.05),但与3次电脉冲相比差异不显着(P>0.05)；2次脉冲的卵裂率(69.84%)和囊胚率(6.14%)显着的高于1次和3次脉冲,差异显着(P＜0.05)；,但1次和3次脉冲之间差异不显着(P>0.05)。4、脉冲时程为40 u s时重组胚的融合率(65.56%)高于其他各组,但差异不显着(P>0.05),但是卵裂率(58.90%)与其他叁组(10μs、20μs、80μs)相比差异显着(P<0.05)。脉冲时程为40μs的桑椹胚发育率为18.16%,与10μs组、80μs组相比差异显着(P<0.05),但与20μs组相比差异不显着(P>0.05)5、30min、60min、90min、120min不同的平衡时间的融合率差异不显着(p>0.05),但90min组的卵裂率(70.62%)显着高于其他叁组,相比差异显着(p<0.05)。90min组的囊胚率为8.10%,显着高于30min和120min组,但与60min组相比差异不显着(p>0.05)。6、EH+CHX、EH+DMAP、Ion+CHX、Ion+DMAP四种激活方式卵裂率方面差异不显着,但是在桑椹胚发育率方面,Ion+6-DMAP组(21.30%)显着高于其他叁组(18.90%、14.12%、15.34%), EH+CHX组与EH+6-DMAP组和Ion+6-DMAP组相比差异显着。EH+6-DMAP组和Ion+6-DMAP组之间差异不显着。(本文来源于《延边大学》期刊2011-05-26）
白春玲,张立,吴侠,焦泽华,雪莲[7]（2011）在《内蒙古白绒山羊的体细胞克隆》一文中研究指出内蒙古白绒山羊是具有悠久历史的绒肉兼用的品种,对荒漠和半荒漠环境有较强的适应性.山羊绒是来自绒山羊的细绒毛,具有极高的商业价值.为了扩大优秀绒山羊数量,本试验尝试利用体细胞克隆技术进行绒山羊克隆研究.从一只成年优秀公绒山羊中,取其耳缘组织,培养获得成纤维细胞.从当地屠宰场获得山羊卵巢,抽取卵母细胞并体外培养成熟.然后以绒山羊成纤维细胞为核供体,通过体细胞克隆技术生产克隆胚胎.核移植重构胚的融合率、卵裂率和囊胚发育率分别为75.8%,72.6%和11.6%.将处于1-至2-细胞期的胚胎移植入同期发情受体母山羊输卵管中,于2009年4月30日诞生了一只克隆绒山羊.该克隆羊的生长状态及产绒量与细胞核供体山羊相一致,呈现良好的发育态势,说明体细胞克隆技术可以成为良种绒山羊的扩繁途径.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2011年02期）
[8]（2011）在《陕北白绒山羊体细胞克隆技术研究》一文中研究指出该项目为"61211"科技创新工程项目,由神木县与榆林学院、内蒙古大学、西北农林科技大学合作完成,旨在利用现代生物技术培育高产绒量绒山羊新品种,在短期内提高陕北白绒山羊的绒毛品质和产量。该项研究(本文来源于《榆林科技》期刊2011年01期）
[9]（2010）在《全国首只体细胞克隆陕北白绒山羊在榆林学院教学示范区诞生》一文中研究指出7月6日晚8时58分,全国第一只体细胞克隆陕北白绒山羊顺利在榆林学院陕北白绒山羊教学示范区降生,该小公羊被取名为"亮亮",英文名"Niche"。该项目负责人、生命科学研究中心主任屈雷博士介绍,虽然"亮亮"身体进入最佳和正常生长期还要有一周左右的观察时间,(本文来源于《榆林学院学报》期刊2010年05期）
敬晓棋,雷安民,屈雷,窦忠英[10]（2010）在《牛-山羊异种体细胞克隆胚胎线粒体形态超微结构观察》一文中研究指出【目的】通过对正常受精胚胎、山羊同克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)以及牛-山羊异种克隆胚胎(山羊去核卵与布尔山羊耳皮肤成纤维细胞重组)中线粒体超微结构的观察与比对,从亚细胞水平揭示异种克隆胚胎出现异常的原因,为异种克隆技术的进一步研究提供新思路。【方法】利用透射电镜分别对山羊正常受精胚胎、山羊同种克隆胚胎及牛-山羊异种克隆胚胎的原核、2-细胞、4-细胞、8-细胞及桑椹胚阶段的早期胚胎进行线粒体超微结构观察。【结果】山羊自然受精胚胎、山羊同种克隆胚胎的线粒体均为帽状,随着胚胎的发育,线粒体由电子密度高、嵴少的未成熟状态发育为电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体,而牛-山羊异种克隆胚胎从2-细胞胚胎至桑椹胚都存在一种具有多个分叶的线粒体,但这种形态异常的线粒体同样也能够形成电子密度低、嵴丰富的成熟线粒体。【结论】牛卵母细胞与山羊体细胞之间不能有效的进行核-质互作,本研究中具体表现为出现多分叶形线粒体,从而影响牛-山羊异种克隆胚胎的发育。(本文来源于《中国农业科学》期刊2010年12期）
体细胞克隆山羊论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
FGF5基因是FGF基因家族中的一员,在毛发生长周期中具有重要的调控作用。FGF5基因突变可以导致毛发生长周期中生长期的延长,从而使毛发的长度增加。本研究拟靶除内蒙古白绒山羊的FGF5基因,利用核移植方法创造高产绒量山羊。以我区的白绒山羊为对象,建立胎儿皮肤成纤维细胞系；设计pLOX-EGFP-FGF5、 RNAi-FGF5、TALEN-FGF5,叁种FGF5基因靶除载体；分别将叁种敲除载体用脂质体介导法、电转法、转染仪介导法转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,筛选阳性细胞并扩繁；以其为核供体构建转基因山羊重构胚并移植到同步发情的受体羊输卵管内,制造转基因克隆山羊并鉴定。1.根据已经公布的牛和山羊的FGF5基因序列设计引物克隆内蒙古白绒山羊的FGF5基因,发现FGF5基因具有叁个外显子和两个内含子,cDNA长度为924bp。根据基因序列设计并构建合成3种靶除绒山羊FGF5基因的载体,分别为基因打靶载体pLOX-EGFP-FGF5,RNA干扰载体RNAi-FGF5-1#和RNAi-FGF5-2#,以及TALEN载体TN000201、TN000202、TN000204。测序及酶切鉴定结果表明载体构建正确并可用。2.采用组织块种植法分离培养了9个绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞系；通过G418敏感度实验,确定了各个细胞系的最佳G418筛选浓度,并选择对G418抗性较好的两个细胞系goat6#和goat9#作为筛选转基因阳性细胞的细胞系；分别应用脂质体介导法、电转法、转染仪介导法将3种载体转染到绒山羊胎儿成纤维细胞中,最终筛选出3种转基因阳性细胞系。3.以筛选鉴定得到3种转基因阳性细胞系为核供体,分别构建转基因克隆胚胎。应用基因打靶技术敲除FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植46只受体山羊,妊娠4只,妊娠率为8.7%。1只羔羊存活4天后死亡,2只羔羊出生后几分钟死亡,目前健康存活羔羊1只。应用RNA干扰技术沉默FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植143只受体山羊,妊娠24只,妊娠率为16.78%,但胎儿均发生流产。应用TALEN技术敲除FGF5基因的转基因克隆胚共同步移植62只受体山羊,经B超检测发现有5只受体羊怀孕,妊娠率为8.06%。4.应用基因打靶技术敲除FGF5基因的转基因克隆羔羊经PCR鉴定,检测出编号为083的羔羊发生了FGF5基因的双敲除,目前健康状况良好。其余叁只羔羊为非转基因的克隆羊。在应用RNA干扰技术沉默FGF5基因中,通过实时荧光定量PCR对流产胎儿进行鉴定,结果表明这些胎儿FGF5基因的表达量均发生了明显的降低。应用TALEN技术靶除FGF5基因的转基因克隆羔羊,经PCR产物测序鉴定,结果表明4只新生羔羊FGF5基因的靶标区域均缺失了两个碱基,造成了FGF5基因的移码突变。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体细胞克隆山羊论文参考文献
[1].郭文.2000年世界首批成年体细胞克隆山羊降生[N].陕西日报.2018
[2].王丙萍.靶除FGF5基因体细胞克隆绒山羊的研究[D].内蒙古农业大学.2014
[3].孙婧陶,尹多,柳海星,李钟淑,方南洙.亚硒酸钠对延边奶山羊卵母细胞体外成熟及体细胞克隆重构胚发育的影响[J].畜牧兽医学报.2013
[4].柳海星.转人血清白蛋白延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚胎生产体系的优化[D].延边大学.2013
[5].屈雷,雷安民,闫海龙,于鸿浩,袁超.陕北白绒山羊种公羊的体细胞克隆[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2012
[6].王贺.延边奶山羊—绵羊体细胞克隆胚融合、激活条件的研究[D].延边大学.2011
[7].白春玲,张立,吴侠,焦泽华,雪莲.内蒙古白绒山羊的体细胞克隆[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2011
[8]..陕北白绒山羊体细胞克隆技术研究[J].榆林科技.2011
[9]..全国首只体细胞克隆陕北白绒山羊在榆林学院教学示范区诞生[J].榆林学院学报.2010
[10].敬晓棋,雷安民,屈雷,窦忠英.牛-山羊异种体细胞克隆胚胎线粒体形态超微结构观察[J].中国农业科学.2010
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