鲤鱼C5-I基因的克隆序列分析及原核表达

论文摘要

为进一步了解鲤鱼C5-I蛋白的生物学功能及其作为分子佐剂的可能,本研究扩增C5-I基因并通过同源性比对构建C5-I基因的系统进化树,利用相关软件对C5-I基因编码蛋白进行生物信息学分析,同时对其进行原核表达及其条件优化。结果显示,鲤鱼C5-I活性核心区基因全长468 bp,共156个氨基酸,经蛋白质理化特性分析表明,该蛋白以β折叠、无规则卷曲为主;诱导条件优化检测发现,在6 h,37℃下,采用0.4 mmol/L IPTG诱导效率最高;Western Blot分析显示,目的蛋白可与鼠抗C5-I蛋白血清特异性结合,表明表达的目的蛋白具有免疫原性,为研究鱼类补体的生物学功能及鱼类DNA疫苗中分子佐剂的开发奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒及试验动物
•   1.2 主要试剂
•   1.3 鲤鱼C5-I基因的克隆
•   1.4 系统进化树构建
•   1.5 目的基因编码产物的生物信息学分析
•   1.6 pET32a（+）-C5-I表达载体的构建及鉴定
•   1.7 pET-32a（+）-C5- I诱导表达条件的优化
•   1.8 目的蛋白的纯化和鉴定
•   1.9 多克隆抗体的制备
•   1.10 Western Blot分析纯化的C5-I基因蛋白
• 2 结果
•   2.1 C5-I基因的克隆
•   2.2 C5-I基因的系统进化树构建
•   2.3 C5-I蛋白生物信息学分析
•     2.3.1 理化性质
•     2.3.2 疏水性分析
•     2.3.3 编码蛋白的信号肽与跨膜区分析
•     2.3.4 二级结构预测
•     2.3.5 C5-I蛋白的三级结构预测
•   2.4 原核表达载体pET32a（+）-C5-I的构建与鉴定
•   2.5 C5-I基因在BL21中的原核表达
•   2.6 pET-32a（+）-C5-I诱导表达条件的优化
•   2.7 C5-I蛋白的表达鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭淞宁,张冬星,田佳鑫,张海月,康元环,单晓枫,钱爱东

关键词: 克隆,序列分析,原核表达,免疫原性

来源: 中国兽医杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 水产和渔业

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,吉林省敦化市畜牧业管理局

基金: 吉林农业大学科研启动基金项目(201801),吉林科技厅重点攻关项目(20150204065NY)

分类号: S917.4

页码: 99-103+107

总页数: 6

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