导读:本文包含了人源载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,基因,细胞,抗体,核蛋白,转染,噬菌体。
人源载体论文文献综述
张春利,蔡徐山,宦宇,齐结华,王晓青[1]（2019）在《人源ADAM17基因干扰表达载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建靶向人去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)基因短发夹RNA(shRNA)的表达载体,并在人胰腺癌细胞株(PANC1)中鉴定其干扰效率。方法设计并合成ADAM17基因的shRNA片段,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ消化过的pLKO.1-puro载体中,构建干扰表达载体pLKO.1-puro ADAM17shRNA,测序鉴定;用干扰载体pLKO.1-puro ADAM17shRNA转染PANC1细胞,荧光定量聚合酶链式反应(q-PCR)和Western blot法检测干扰质粒的干扰效率;CCK-8法检测其对PANC1细胞增殖的影响。结果测序结果显示,成功构建了靶向人ADAM17基因shRNA的表达载体,且该干扰载体可将PANC1细胞中ADAM17的相对表达量下调65%以上,并能显着抑制PANC1细胞增殖。结论成功构建了ADAM17基因干扰质粒。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年09期）
黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君[2]（2018）在《人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测》一文中研究指出目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测。方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段,将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,然后进行转化、菌落PCR及测序验证等。将构建成功的pGL3-proDNMT1-luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性。结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段,并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体,启动子具有活性。结论:DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础。(本文来源于《皖南医学院学报》期刊2018年01期）
李宏文,张艳红,邓云华,张彩娥[3]（2016）在《人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体p EGFP-Rab32,并观察Rab32在人黑素细胞瘤细胞系A375中细胞定位情况。方法收集并提取A375细胞中的总RNA,反转录成c DNA,以特异性引物扩增Rab32片段,经Xho I和Kpn I双酶切聚合酶链反应(PCR)产物和p EGFP-C3表达载体,酶切产物经胶回收、连接后转化至感受态大肠杆菌DH5a中,挑取单克隆菌落进行菌液PCR鉴定、酶切鉴定和测序分析,以确定表达载体构建正确。将构建的重组质粒转染A375细胞,Western blot检测细胞中Rab32表达水平,激光共聚焦显微镜观察其细胞定位。结果p EGFP-Rab32重组质粒经菌落PCR、双酶切和测序鉴定构建正确,转染A375细胞后,Western blot可检测出细胞中p EGFP-Rab32融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察到Rab32定位于细胞质中,且大量聚集于细胞核周围。结论p EGFP-Rab32融合蛋白表达载体成功构建,并观察了Rab32在细胞中的定位,为进一步研究Rab32在黑素代谢中的作用奠定了良好的基础。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2016年09期）
安颖[4]（2016）在《hTERT哺乳动物表达载体的构建及其在人源细胞中的表达》一文中研究指出端粒(Telomeres)是线状染色体末端的特殊的重复DNA序列,在高分化的正常人体细胞中,它的长度随着细胞的分裂而逐渐缩短。端粒的长度可以反映细胞的复制史及其复制潜能。端粒酶(Telomerase)是细胞中负责延长端粒的一种酶,除了干细胞、生殖细胞和其他具有高度增殖能力的细胞外,在正常细胞中很少表达。细胞中端粒酶的高表达可以维持端粒的长度从而使细胞获得永生化。端粒酶由人端粒酶RNA成分(hTR),人端粒酶相关蛋白(hTP)和人端粒酶逆转录酶(hTERT),且hTERT mRNA的表达水平与端粒酶的活性呈正相关。相关研究已经表明,hTERT在肿瘤的免疫治疗领域有着很好的应用前景。目的:本课题拟构建hTERT基因哺乳动物表达载体pCI-neo-hTERT,并观察其在人类白血病细胞系K562中的表达,为进一步探讨hTERT在骨肿瘤方面的应用提供实验基础。方法:一、重组质粒的构建及鉴定从人骨肉瘤细胞系HOS中提取总RNA,并逆转录成cDNA;对逆转录获得cDNA行PCR以获得目的片段,电泳位置合适后切胶回收以纯化基因。将目的基因片段及pCI-neo载体质粒通过Not I、EcoR I双重酶切后,连接到一起,并转化到大肠埃希氏菌DH5α中。挑选出单克隆菌株,并进行菌液、重组质粒的PCR鉴定。选取经鉴定含有目的基因的质粒,行DNA测序分析,并将结果与目的基因序列进行BLAST比对,以验证质粒中是否已正确插入hTERT基因。二、重组质粒的表达鉴定将重组并鉴定后无误的质粒通过电转的方式转染到K562细胞中,并用G418筛选,获得稳定表达的单克隆细胞株。通过实时荧光定量PCR技术,比较转染后细胞与转染前细胞hTERT的表达水平。叁、hTERT对于细胞增殖的影响选取高表达hTERT的转染后细胞株,利用流式细胞术,检测转染前后细胞增殖能力的改变。结果:1、成功构建了pCI-neo-hTERT哺乳动物表达质粒。2、成功获得过表达hTERT基因的K562细胞株,实时荧光定量PCR结果显示,转染后的细胞hTERT表达水平较转染前明显升高。3、转染前后,细胞的增殖能力未发生明显的改变。结论:pCI-neo-hTERT哺乳动物表达质粒已成功构建且其在K562细胞内可正常表达为后续研究hTERT基因在骨肿瘤方面的应用提供了实验工具。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
丁立,熊丽娟,王欲晓,吴成林,付凯飞[5]（2015）在《抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建》一文中研究指出目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2015年06期）
刘根霞,王子露,景双林,闫明,张光东[6]（2015）在《人源性雌激素受体alpha高表达慢病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建人源性雌激素受体alpha(ERα)高表达慢病毒载体,以用于后续雌激素受体对牙源性干细胞分化能力的研究。方法以p EGFP-ERα为模板,RT-PCR方法体外扩增ERα基因,经测序后重组入慢病毒载体PMSCV-GFP,将正确构建的PMSCV-ERα质粒导入293T细胞进行PMSCV-ERα慢病毒制备,Western Blot检测ERα的表达水平。结果体外成功扩增ERα并重组入PMSCV-GFP慢病毒载体,Western Blot结果显示PMSCV-ERα组的ERα水平较对照组(PMSCV-GFP组)表达明显增高。结论成功构建人源性雌激素受体alpha高表达慢病毒载体。(本文来源于《口腔医学》期刊2015年05期）
王倩,杨眉,冯瑞丽,王娇,文铁桥[7]（2014）在《人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化》一文中研究指出为了深入研究DCF1(Dendritic Cell Factor 1)基因的作用,以质粒pc DNA3.1-DCF1-TAT为模板体外扩增得到片段DCF1-TAT,将测序正确的目的片段克隆入原核表达载体p ET32a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化表达条件。以尿素溶解包涵体蛋白,并优化溶解条件,通过Ni离子亲和层析柱进行纯化,再透析复性目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果,并用Western blot进行验证。结果表明,重组表达载体p ET32a-DCF1-TAT构建成功,并在大肠杆菌Rosetta中成功表达。融合蛋白主要以包涵体形式存在,经过尿素溶解,Ni离子亲和层析柱纯化获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符。(本文来源于《生物技术通报》期刊2014年12期）
霍丽蓉,王兰英,邹俊华,钟南[8]（2014）在《人源核不均一核糖核蛋白E1真核表达载体在神经细胞中的表达》一文中研究指出背景:人源核不均一核糖核蛋白E1功能广泛,可参与神经系统骨架蛋白的表达。目的:为深入研究其在神经细胞中的作用,构建其真核表达载体,观察其在神经细胞中的表达。方法:利用真核表达载体pcDNATM4/His C,通过亚克隆构建核不均一核糖核蛋白E1-pcDNATM4/His C重组质粒,经酶切、测序鉴定,通过转染神经细胞SH-SY5Y,采用western-blot,RT-PCR鉴定核不均一核糖核蛋白E1重组质粒的表达,并观察转染细胞的生长现象。结果与结论:成功构建了核不均一核糖核蛋白E1的真核表达载体,mRNA和蛋白水平上均证实了该质粒可在神经细胞SH-SY5Y中正确表达。SH-SY5Y细胞在转染核不均一核糖核蛋白E1后表现为加速生长。提示该蛋白对神经细胞的生长发育具有重要的作用。该载体为进一步研究核不均一核糖核蛋白E1在神经系统中的功能提供了前提条件。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2014年42期）
徐凯,邱军强,Willemijn,Passtoors,张庆华,吴方[9]（2014）在《人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶载体构建及表达分析》一文中研究指出目的:为深入研究作为疾病靶点的人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶(hSPL)的功能及机制,构建原核表达载体以表达得到具有活性的hSPL用于后续的研究。方法:首先将hSPL基因的全长(SPL-C)和跨膜区外的截短片段(SPL-T)构建到pET28b表达载体。用Western Blot和酶活检测比较大肠杆菌JM109、DH5α、Rosetta(DE3)、BL21(DE3)4种感受态细胞的表达情况。结果:成功构建hSPL原核表达载体,SPL-T在大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)高表达,并且具有很强的活力。结论:得到在大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)表达具有活力的hSPL-T裂解液上清,为下一步深入研究hSPL的酶学性质提供了很好的研究基础。(本文来源于《生物技术》期刊2014年03期）
叶迎春[10]（2014）在《全人源抗IL-33 scFv-Fc真核表达载体的构建与高表达细胞株的筛选》一文中研究指出白细胞介素33(Interleukin-33,IL-33)是IL-1家族新成员,是孤儿分子ST2配体,广泛表达于多种组织与细胞,主要参与调节Th2型免疫与炎症反应,与多种过敏性及自身免疫性疾病相关。研究表明采用鼠源抗IL-33抗体封阻IL-33信号通路可以减轻过敏性鼻炎与类风湿关节炎的症状,说明IL-33可作为过敏性与自身免疫性疾病新的潜在治疗靶点。抗体药物经历了鼠源抗体、人-鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体4个阶断。由于人抗鼠抗体及人抗人抗体等不良反应的发生,治疗性抗体逐步朝着全人源抗体方向发展。从全人源抗体文库中筛选全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv),然后通过基因重组技术连接scFv与人IgG的Fc段,构建全人源scFv-Fc融合抗体。scFv-Fc结构稳定,不仅具有与特异性抗原结合的能力,同时具有Fc介导补体依赖的细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)等多种细胞效应功能,并延长了血清半衰期。至今为止,无全人源抗IL-33 scFv-Fc融合蛋白的相关报道。目的:本项目旨构建在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO)中能分泌表达活性全人源scFv-Fc的真核表达载体并进行高表达稳定细胞株筛选。方法:1.构建重组载体pcDNA3.1/SP-scFv-Fc。①RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体并测序鉴定插入序列是否正确。②合成的信号肽(signalpeptide,SP)序列并插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc载体,测序鉴定插入序列是否正确。③以前期筛选的抗IL-33全人源scFv为模板进行扩增,以酶切连接的方式插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组载体pcDNA3.1/SP-scFv-Fc,测序鉴定插入序列是否正确。2.构建重组载体 PMH3 EN/SP-scFv-Fc。酶切重组载体 pcDNA3.1/SP-scFv-Fc,回收SP-scFv-Fc片段并插入真核表达载体PMH3 EN中,测序鉴定插入序列是否正确。3.转染CHO细胞建立稳定表达细胞系并筛选高表达细胞株。①培养CHO细胞,筛选G418的至死细胞浓度。②将测序正确的重组载体以脂质体转染法转入CHO细胞,以G418加压筛选稳定表达细胞系,RT-PCR、western blot检测稳定表达细胞系中目的基因的转录及表达情况。③在软琼脂上培养稳定表达细胞系,挑取单个细胞株进行表达,Dot blot筛选稳定高表达scFv-Fc细胞株。结果:1.重组质粒测序结果表明成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc、PMH3 EN/SP-scFv-Fc 重组载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1560 bp左右。2.将构建的两组重组质粒转染CHO细胞,并进行稳定表达细胞系筛选后,提取转染与未转染细胞总RNA,进行RT-PCR检测目的基因的转录水平。结果显示SP-scFv-Fc目的基因在CHO细胞中成功转录。3.裂解转染细胞进行Western blot结果显示:两组转染细胞分别在67 kDa附近有单一条带产生,而在PMH3 EN/SP-scFv-Fc重组质粒中scFv-Fc蛋白表达总水平明显高于pcDNA3.1/SP-scFv-Fc。4.将稳定表达细胞系进行无血清细胞培养液培养后,以IL-33为抗原,western blot检测细胞培养上清中scFv-Fc的分泌表达水平,结果显示转染PMH3 EN/SP-scFv-Fc的CHO细胞稳定分泌表达scFv-Fc可溶性融合抗体,并且具有与IL-33结合的生物学活性。而pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体可能由于表达量低,未检测到分泌蛋白。5.将稳定表达细胞系在软琼脂平板上进行培养,分别挑取不同细胞克隆株进行表达,Dot blot筛选高表达细胞细胞株,结果显示不同的细胞克隆株表达水平有明显差异,SP-scFv-Fc在PMH3 EN载体中的表达水平明显高于pcDNA3.1载体。结论:1.成功构建了重组真核表达载体pcDNA3.1/SP-scFv-Fc、PMH3 EN/SP-scFv-Fc;2.成功建立稳定表达scFv-Fc的CHO细胞系及高表达细胞株,scFv-Fc可分泌表达于细胞培养上清中,并具有结合抗原IL-33的生物学活性。3.scFv-Fc在PMH3 EN/SP-scFv-Fc重组载体中的表达水平明显高于pcDNA3.1/SP-scFv-Fc。(本文来源于《泸州医学院》期刊2014-05-01）
人源载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测。方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段,将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,然后进行转化、菌落PCR及测序验证等。将构建成功的pGL3-proDNMT1-luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性。结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段,并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体,启动子具有活性。结论:DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人源载体论文参考文献
[1].张春利,蔡徐山,宦宇,齐结华,王晓青.人源ADAM17基因干扰表达载体的构建与鉴定[J].国际检验医学杂志.2019
[2].黄滔,曹玉祥,张志坚,周兴路,魏慧君.人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测[J].皖南医学院学报.2018
[3].李宏文,张艳红,邓云华,张彩娥.人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体的构建及鉴定[J].新乡医学院学报.2016
[4].安颖.hTERT哺乳动物表达载体的构建及其在人源细胞中的表达[D].华中科技大学.2016
[5].丁立,熊丽娟,王欲晓,吴成林,付凯飞.抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建[J].生物技术通讯.2015
[6].刘根霞,王子露,景双林,闫明,张光东.人源性雌激素受体alpha高表达慢病毒载体的构建与鉴定[J].口腔医学.2015
[7].王倩,杨眉,冯瑞丽,王娇,文铁桥.人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化[J].生物技术通报.2014
[8].霍丽蓉,王兰英,邹俊华,钟南.人源核不均一核糖核蛋白E1真核表达载体在神经细胞中的表达[J].中国组织工程研究.2014
[9].徐凯,邱军强,Willemijn,Passtoors,张庆华,吴方.人源鞘氨醇-1-磷酸裂解酶载体构建及表达分析[J].生物技术.2014
[10].叶迎春.全人源抗IL-33scFv-Fc真核表达载体的构建与高表达细胞株的筛选[D].泸州医学院.2014
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