马抗猫杯状病毒精制免疫球蛋白F（ab’）2的制备及防治效果研究

论文摘要

猫杯状病毒（Feline calicivirus,FCV）属于杯状病毒科、水疱疹病毒属的成员,能够引起猫科动物上呼吸道疾病。感染后主要临床症状表现为慢性口腔炎和口腔溃疡,也会引起结膜炎、跛行综合征和全身性疾病的严重临床形式。目前该病的主要预防手段仍是接种疫苗,然而疫苗不能阻止同源或异源FCV变异株的再感染。该病无特异性治疗药物,特异性抗体是治疗的首选生物制品。单克隆抗体由于其高成本也不适于批量化生产。马抗血清制品以其低成本和纯熟的生产工艺备受青睐,在针对某些疾病的治疗中有着不可替代的作用。因此,开展FCV马血清抗体的研究有着重要的意义。本实验将具有较强致病性与良好免疫原性的FCV CH-JL2株毒作为免疫原对马匹进行免疫,从而制备高免血清及精制免疫球蛋白F（ab’）2,并对其防治效果进行研究。本研究首先进行了马抗FCV高免血清及F（ab’）2的制备与检测,通过超速离心及蔗糖密度梯度离心将FCV浓缩纯化,与弗氏佐剂制备免疫原并对马进行免疫,经病毒中和试验监测马血清中和抗体效价变化,而后将制备的马抗FCV高免血清通过饱和硫酸铵沉淀提取免疫球蛋白IgG,并经胃蛋白酶酶切,Protein-G柱纯化获得高纯度马抗FCV精制免疫球蛋白F（ab’）2,对其浓度、纯度、反应活性、中和抗体效价进行检测。结果显示,六免后马抗FCV血清中和抗体效价最高,为1:1 230;提纯IgG的最佳酶切条件是37℃酶切2 h。Protein-G柱纯化的F（ab’）2经SDS-PAGE分析显示,在110KDa左右具有完整的蛋白条带,应用薄层扫描测得其纯度为95.236%。F（ab’）2经超滤浓缩后浓度可达13.5mg/mL,通过IFA检测制备的抗体具有较好的反应活性,其抗体中和效价为1:1 219,表明所制备的精制免疫球蛋白F（ab’）2在体外具有较强的中和FCV感染的能力。同时,对所制备的F（ab’）2进行无菌检验及安全性检测均为合格,注射小鼠和猫无不良反应,证明制得的免疫球蛋白F（ab’）2安全性良好。将制备的F（ab’）2接种于实验猫,研究其在体内对FCV感染的防治效果。根据本实验室建立的动物感染模型,分别在24 h前后给实验猫皮下注射不同剂量的免疫球蛋白F（ab’）2,并以滴鼻方式进行攻毒,剂量为0.5mL/只。通过对临床症状、体温体重、综合临床评分、排毒量与病毒载量、存活率及组织病理变化的观察与监测,评价免疫球蛋白F（ab’）2对FCV感染的防治效果。结果显示,攻毒前后24 h分别给予2mg/kg和10mg/kg剂量的F（ab’）2能够有效地减轻临床症状;与对照组比,综合临床评分差异显著,存活率升高,排毒量与肺脏及气管中病毒载量有所减少;病理组织学观察其病理变化有所缓解。由此说明,本研究制备的免疫球蛋白F（ab’）2对猫体内FCV的感染具有一定的紧急预防和治疗效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一篇 文献综述
•   1.1 病原学
•   1.2 流行病学
•   1.3 临床症状及病理变化
•   1.4 诊断与防治
•   1.5 疫苗研究现状
•   1.6 免疫球蛋白提纯方法研究
•   1.7 研究目的及意义
• 第二篇 研究内容
•   第一章 马抗猫杯状病毒精制免疫球蛋白F（ab'）2 的制备及检测
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•     1.3 结果
•     1.4 讨论
•     1.5 小结
•   第二章 马抗猫杯状病毒精制免疫球蛋白F（ab'）2 的防治效果研究
•     2.1 材料
•     2.2 方法
•     2.3 结果
•     2.4 讨论
•     2.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李登亮

导师: 胡桂学

关键词: 猫杯状病毒,髙免血清,免疫球蛋白,效果评价

来源: 吉林农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学

分类号: S852.4

DOI: 10.27163/d.cnki.gjlnu.2019.000167

总页数: 72

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