烟曲霉脂肪酶B在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

论文摘要

从烟曲霉Aspergillus fumigatus GIM3.20中克隆获得了一种脂肪酶B基因（AFLB）。通过序列比对,发现AFLB与南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）的氨基酸序列有31%的一致性,两者同属CALB家族脂肪酶;AFLB含有与家族其他成员类似的保守五肽序列（SWSQG）,预测AFLB的催化三联体分别为S233、D318和H361,其中Ser233位于保守五肽序列中;此外AFLB含有一段N-端延长序列（由第1～128位氨基酸组成）,是曲霉属脂肪B的特有序列。在毕赤酵母中成功地异源表达了脂肪酶AFLB,并通过亲和层析进行了纯化。SDS电泳结果显示,该酶存在部分高度N-糖基化和部分无糖基化的两种形态,对应分子量分别为45～66 kDa和42 kDa。酶学性质表征结果显示,重组脂肪酶AFLB最适反应pH值为7.0,最适反应温度为40℃,并在50℃以下具有较好稳定性,其最适底物为肉豆蔻酸对硝基苯酯。脂肪酶AFLB与CALB有高度亲缘性,具有潜在的工业应用前景。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料和试剂
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 脂肪酶AFLB基因分析
•     1.2.2 脂肪酶AFLB基因的克隆与载体构建
•     1.2.3 脂肪酶 AFLB表达和纯化
•     1.2.4 脂肪酶 AFLB的活性测定与酶学性质表征
•       1) 脂肪酶活性的测定。
•       2) 脂肪酶AFLB最适反应pH值的测定。
•       3) 脂肪酶 AFLB
•       4) 脂肪酶 AFLB
•       5) 脂肪酶AFLB底物特异性的测定。
• 2 结果与讨论
•   2.1 脂肪酶AFLB的序列分析
•   2.2 脂肪酶AFLB表达与纯化结果
•   2.3 脂肪酶AFLB的酶学性质分析
• 3 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 唐薇,黄伟谦,杨博,王永华,蓝东明

关键词: 烟曲霉,脂肪酶,重组表达,毕赤酵母,酶学性质

来源: 食品科学技术学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 华南理工大学食品科学与工程学院,华南理工大学生物科学与工程学院

基金: 广东省省级科技计划项目(017A050503001)

分类号: Q78;Q936

页码: 36-41

总页数: 6

文件大小: 5658K

下载量: 280