鱼类多能性相关基因的筛选和鉴定

论文摘要

干细胞（Stem cell）一般是指生物体中具有自我复制能力的多发育潜能细胞,在一定条件下可以分化成一到多种细胞类型。多能性因子通常在分子水平上表征干细胞的特征,不仅参与维持干细胞的多能性,也可以在已分化的细胞中过表达而达到细胞重编程目的。然而,低等脊椎动物鱼类中能够准确表征干细胞多能性的因子尚不明晰。本文以斑马鱼和红鲫为研究对象,通过文献查阅收集了16个在哺乳动物中已报道的多能性标记因子,利用RT-PCR技术分析了这16个候选基因在鱼类胚胎和成体组织中的表达特征;筛选到在鱼类早期胚胎高表达、在原肠胚晚期后低表达的三个基因Oct4、Nanog和Gdf3;利用Q-PCR进一步验证了Oct4、Nanog和Gdf3在胚胎发育过程中的表达,证实这三个基因具有母源性表达特征,且在囊胚期胚胎中mRNA水平较高,而在体节开始分化后显著下降。RT-PCR检测表明Oct4和Nanog基因在成体中均只在精卵巢组织中特异性表达,Gdf3基因则在精卵巢和脑组织中特异表达;RNA探针原位杂交定位分析进一步显示,Oct4、Nanog和Gdf3均特异定位表达于精卵巢的性原细胞和早期发育的性母细胞中。综上所述,本文通过对候选多能性相关基因在鱼类胚胎和成体中的表达分析与鉴定,初步筛选出Oct4、Nanog和Gdf3三个较稳定的鱼类多能性标记因子,为进一步开展鱼类干细胞研究奠定了重要基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
•   1.1 干细胞
•     1.1.1 胚胎干细胞
•     1.1.2 成体干细胞
•     1.1.3 诱导性多能干细胞
•   1.2 多能性相关基因
•     1.2.1 哺乳动物多能性相关基因
•     1.2.2 鱼类多能性相关基因
•   1.3 本研究的目的与意义
• 第二章 斑马鱼多能性相关基因的筛选和鉴定
•   2.1 材料与方法
•     2.1.1 实验鱼的人工繁殖与胚胎培育
•     2.1.2 斑马鱼胚胎及组织的RNA提取
•     2.1.3 RNA反转录
•     2.1.4 RT-PCR
•     2.1.5 实时荧光定量技术
•     2.1.6 组织学切片制备
•     2.1.7 RNA探针原位杂交
•     2.1.8 组织学切片染色
•   2.2 结果与分析
•     2.2.1 16个候选基因在不同发育时期斑马鱼胚胎的RT-PCR检测
•     2.2.2 Oct4、Nanog和Gdf3基因在不同发育时期斑马鱼胚胎表达的qRT-PCR验证
•     2.2.3 多能性相关候选基因在斑马鱼成体不同组织的表达分析
•     2.2.4 斑马鱼精巢卵巢和脑组织结构分析
•     2.2.5 Oct4和Nanog基因在斑马鱼性腺组织的定位表达分析
•     2.2.6 Gdf3基因在斑马鱼性腺及脑组织的定位表达分析
•   2.3 小结与讨论
• 第三章 红鲫多能性相关基因的筛选与鉴定
•   3.1 材料与方法
•     3.1.1 实验鱼的人工繁殖与胚胎培育
•     3.1.2 红鲫胚胎及组织的RNA提取
•     3.1.3 RNA反转录
•     3.1.4 RT-PCR
•     3.1.5 实时荧光定量验证
•     3.1.6 红鲫成体组织石蜡切片的制备
•     3.1.7 RNA探针原位杂交验证基因的定位表达
•     3.1.8 组织学染色
•   3.2 结果与分析
•     3.2.1 8个候选基因在不同发育时期红鲫胚胎的RT-PCR检测
•     3.2.2 Oct4、Nanog和Gdf3基因在不同发育时期红鲫胚胎表达的qRT-PCR验证
•     3.2.3 多能性相关候选基因在红鲫成体不同组织的表达分析
•     3.2.4 红鲫精巢卵巢和脑组织结构分析
•     3.2.5 Oct4和Nanog基因在红鲫性腺组织的定位表达分析
•     3.2.6 Gdf3基因在红鲫性腺及脑组织的定位表达分析
•   3.3 小结
• 第四章 总结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 硕士学习期间撰写、发表的主要论文

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李华金

导师: 肖亚梅,彭亮跃

关键词: 鱼类,多能性相关基因

来源: 湖南师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 湖南师范大学

分类号: Q953

总页数: 55

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