羊种布鲁氏菌Rev.1株VjbR基因的克隆、原核表达及生物信息学分析

论文摘要

本研究旨在构建表达载体pET-30a-VjbR,进而表达布鲁氏菌VjbR蛋白;利用生物软件分析该蛋白生物信息学信息,为进一步研究该蛋白奠定基础。以布鲁氏菌Rev.1株基因组为模板,扩增VjbR基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-30a（+）中,获得重组质粒pET-30a-VjbR,并进行原核表达、Western-blot检测及该基因的生物信息学分析。结果显示:本试验成功克隆并表达了VjbR基因;经对表达产物进行SDS-PAGE分析纯化,发现本试验得到较纯蛋白;经Western-blot检测,发现该基因表达蛋白可与布鲁氏菌羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性;通过生物信息学系列软件统计分析,发现VjbR蛋白无跨膜区,无信号肽,且该蛋白共有15个抗原决定簇,在二级结构中,α-螺旋的氨基酸有131个,占比为49.81%。布鲁氏菌VjbR基因的成功表达与纯化,为进一步制备该蛋白的单克隆抗体及iELISA诊断试剂盒的研制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株与阳性血清
•   1.2 试剂
•   1.3 引物
•   1.4 主要仪器
•   1.5 目的基因扩增
•   1.6 原核表达载体构建
•   1.7 重组蛋白原核表达及SDS-PAGE电泳检测
•   1.8 重组蛋白纯化
•   1.9 重组蛋白Western-blot检测
•   1.1 0 生物信息学分析
• 2 结果
•   2.1 目的片段扩增及原核质粒构建
•   2.2 重组蛋白SDS-PAGE电泳检测
•   2.3 蛋白质纯化
•   2.4 Western-blot检测
•   2.5 目的蛋白生物信息学分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杭天宇,宋前进,金铭,关平原,温永俊

关键词: 布鲁氏菌,基因,原核表达,免疫原性

来源: 中国动物检疫 2019年12期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

基金: 内蒙古自治区科技计划项目（201702165）

分类号: S852.61

页码: 68-75

总页数: 8

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