大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

论文摘要

目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×10~2 copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 病毒、细胞株
•     1.1.3 引物
•     1.1.4 试剂和仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 病毒培养
•     1.2.2 标准毒株和肺组织样品RNA的抽提
•     1.2.3 RNA逆转录为cDNA
•     1.2.4 双重PCR反应体系和反应条件
•     1.2.5 PCR扩增产物测序
•     1.2.6 特异性试验
•     1.2.7 敏感性试验
•     1.2.8 动物样本的检测
• 2 结果
•   2.1 双重PCR方法的建立及优化
•   2.2 特异性试验
•   2.3 敏感性试验
•   2.4 双重PCR检测方法在动物样本检测中的初步应用
•     2.4.1 双重PCR方法在仙台病毒人工感染样本检测中的初步应用
•     2.4.2 双重PCR方法在实验动物临床样本检测中的初步应用
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孟钰榕,郑龙,祝岩波,王璇,尤红煜,刘健敏,栗彦宁,连伟光,张东明,王俊霞

关键词: 大鼠冠状病毒,仙台病毒,双重

来源: 中国实验动物学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部,河北医科大学第二医院

基金: 国家科技支持计划(2015BAI07B02)~~

分类号: Q95-33

页码: 181-186

总页数: 6

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