导读:本文包含了致病杆菌论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:嗜线虫致病杆菌,克隆,遗传体系,突变株筛选
致病杆菌论文文献综述
吴蓉,汪桂,邓子新,陈文青,苏二正[1]（2019）在《嗜线虫致病杆菌抗生素基因簇克隆及遗传体系建立》一文中研究指出【目的】嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus)是昆虫病原线虫的共生菌,研究此共生菌分泌的抗菌活性的次级代谢产物基因蔟信息。【方法】通过直接PCR将目的基因簇分为数段扩增,利用天然酵母重组系统实现体外重组;同时采用果聚糖蔗糖转移酶基因sacB负筛选系统,通过两次同源臂重组构建基因敲除突变株,建立嗜线虫致病杆菌DSM 16338的遗传操作系统。【结果】成功获得推测目的基因簇;缺失所推测基因簇的3个相连基因,筛选到大片段缺失突变株GW2及调控基因敲除突变株GW4。【结论】利用高效的直接克隆方法获得了基因簇,成功对DSM 16338推测基因簇完成了基因中断,建立了该菌的遗传操作系统,为阐述此类细菌天然产物的生物化学多样性奠定了基础。(本文来源于《南京林业大学学报(自然科学版)》期刊2019年05期）
郭笑笑,杨晴,刘淑琴,王勤英,南宫自艳[2]（2019）在《嗜线虫致病杆菌PirAB毒素对棉铃虫相关酶活性的影响》一文中研究指出昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode)共生菌及杀虫毒素一直是农业害虫生物防治领域的研究热点。PirAB (photorhabdus insect related toxin AB)蛋白是来自昆虫病原线虫共生菌的一种特殊二元毒素,本研究针对该毒素的杀虫特性及对寄主昆虫酶活的影响开展相关研究。首先对嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila) HB310菌株的pirAB基因进行原核表达,采用血腔注射的方法测定PirAB毒素对四龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)的生物活性,并进一步测定对寄主体内乙酰胆碱酯酶、解毒酶(羧酸酯酶和多酚氧化酶)、保护酶(过氧化物酶和酪氨酸酶)活力的影响。结果表明,重组PirAB蛋白对四龄棉铃虫表现出很高的血腔注射活性(LD50=2.003μg/头)。在注射LD50剂量的PirAB毒素后,寄主体内乙酰胆碱酯酶活性与对照组差异不显着;羧酸酯酶活性呈现激活、抑制、再次激活的剧烈变化,处理36 h后趋于稳定;多酚氧化酶活性同样出现先激活、后抑制的变化趋势,24 h后活性变化趋于平稳,并且显着低于对照组(P<0.05);酪氨酸酶活性在毒素处理后基本处于抑制状态,12～36 h之间出现1次显着变化,急剧降低并再次升高,与对照组活性持平;过氧化物酶活性整体变化趋势不明显,持续低于对照组。本研究为揭示寄主昆虫对PirAB毒素的免疫机制提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年07期）
李忝珍,张淑静,刘启,王茜,王永宏[3]（2018）在《渗透压对嗜线虫致病杆菌YL001生长及抑菌活性的影响》一文中研究指出【目的】研究渗透压对嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)YL001菌体生长、抑菌活性的影响,为进一步提高YL001抑菌活性及开发利用奠定基础。【方法】以NaCl为渗透压调节剂,分别测定其质量浓度为0,5,10,20,30和40g/L条件下,嗜线虫致病杆菌YL001不同时间段细胞生长量、pH、还原糖变化;采用琼脂扩散法、生长速率法及活体组织法测定了YL001发酵液的抑菌活性;同时采用HPLC及LC-MS分析了甲醇提取物中酰胺类化合物(Nematophin)与水溶性苯并芘类化合物(Xenocoumacins,包括XCN1和XCN2)含量差异。【结果】在NaCl质量浓度为0,5g/L时,YL001细胞生长最适且无显着差异,吸光值分别达0.63,0.62,随着NaCl质量浓度的进一步增大细胞生长量显着下降;在NaCl质量浓度为0,5,10g/L时,YL001发酵液对苏云金芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、猕猴桃溃疡病菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用较好且无显着差异,随着NaCl质量浓度的进一步增大抑菌作用显着降低;在NaCl质量浓度为0,5g/L时,YL001发酵液对水稻稻瘟病菌、番茄灰霉病菌、苹果树腐烂病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、水稻纹枯病菌、油菜菌核病菌的抑制率均高于80%且均无显着差异,明显优于其他较高NaCl质量浓度的处理;在NaCl质量浓度为0,5,10g/L时,YL001发酵液对番茄灰霉病的治疗作用较好且无显着差异,在NaCl质量浓度为0,5g/L时,对番茄灰霉病的保护作用较好且无显着差异,治疗作用和保护作用均随着NaCl质量浓度的进一步增大而显着下降;甲醇提取物中抑菌活性物质Nematophin含量、XCN1的相对含量随NaCl质量浓度的增大显着下降,如NaCl质量浓度为0g/L时,甲醇提取物中抑菌活性物质Nematophin含量、XCN1的相对含量较NaCl质量浓度为40g/L时分别提高7.82和27.55倍;XCN2的相对含量在NaCl质量浓度为5g/L时最高,显着高于其他处理。【结论】低渗透压有利于X.nematophila YL001菌体生长、抑菌活性提高及抑菌活性代谢产物Nematophin、Xenocoumacins的产生。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2018年11期）
李凤麟[4]（2018）在《嗜线虫致病杆菌SN313次生代谢产物及其抑制植物病原真菌活性研究》一文中研究指出在自然条件下,许多生物体都可以与微生物共同协作产生一系列具有杀虫、抗菌、抗病毒等活性的代谢物质去抵抗来自环境中寄生物、拟寄生物、病原体等天敌的侵害。在医学、农业等各个领域常常利用这些生物协作体产生的活性代谢产物去研制和开发抗生素药物、生长调节素、微生物源农药等产品。本文所研究的生物协作体来自于寄主昆虫虫体、侵入虫体的线虫和寄生于线虫肠道中的微生物叁者形成的共生关系体,此时的协作体便是昆虫病原线虫共生菌。在前期的文献调研及预实验中,发现很多昆虫病原线虫共生菌的发酵产物对一些常见的植物病原真菌、细菌均有一定的抑制作用,为了探究这种共生菌所产生的发酵产物在农业植物病害防治方面是否具有有效的增益作用,笔者通过化学与生物活性筛选得到一株优势菌株,从这株共生菌的发酵代谢产物出发,利用柱层析技术、高效液相半制备、核磁共振波谱技术、菌丝生长速率法和96孔板酶标微量稀释法对其发酵产物进行分离、纯化、结构鉴定以及抑菌活性测定。主要研究内容如下:1.昆虫病原线虫共生菌的培养以及优势菌株的筛选:主要从辽宁兴城和通辽地区进行土样采集,之后通过大蜡螟生物诱导以及溴百里酚蓝鉴别型培养基(NBTA)固体平板培养,最终分离纯化得到52株蓝绿色初生型菌株。通过微生物发酵技术以及有机溶剂萃取,获得到这52株菌株的粗提产物,利用薄层层析(TLC)技术对这52个粗提物进行化学筛选,选取在薄层板上有明显特点的11株菌株。通过微量稀释法测试了这11株菌株的发酵粗提产物抑制番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)的有效中浓度,选出抑菌活性最好的作为目标菌株。2.目标菌株的菌种鉴定:分别采用生理生化特征试验与分子生物学鉴定确定了目标菌株的菌种。先选取了有代表性的细菌常见生理生化鉴定试验,结果表明:该菌株为革兰氏阴性杆状细菌,具有运动性,对于大多数的细菌生理生化反应结果呈阴性。后采用16S rDNA方法提取了目标菌株的DNA,并对其基因序列进行分析,结果表明其序列长度1442 bp,将该序列上传至NCBI GenBank获得登记号MG385844.1。构建系统发育树,发现其与Xenorhabdus nematophila ATCC 19061T/FN667742的亲缘关系最为接近。结合生理生化特征,结果表明该目的菌株为嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila),将此菌株命名为SN313。3.目标菌株的大规模发酵以及粗提物的活性筛选:通过微生物发酵法,利用M培养基以及XAD-16大孔树脂的吸附,用甲醇浸提以及二氯甲烷萃取,最终得到粗提浸膏7.5 g。利用菌丝生长速率法测定了粗提物对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、向日葵菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)、瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)和禾谷镰刀病菌(Fusarium graminearum)的抑制率。结果表明:当粗提物浓度为100μg/mL时,其对辣椒疫霉病菌的抑制率为88.70%,对水稻纹枯病菌的抑制率为75.00%,对番茄灰霉病菌的抑制率为67.36%,对小麦根腐病菌的抑制率为55.49%,对其它4个病原真菌抑制效果一般。利用微量肉汤稀释法测定了粗提物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠埃希杆菌(Escherichia coli)和柞蚕链球菌(Streptococcus pernyi)4种病原细菌的抑制活性,结果表明:粗提物仅对大肠埃希杆菌的抑制效果较好(MIC=132.5μg/mL),对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和柞蚕链球菌抑制效果一般(MIC>250μg/mL)。4.SN313发酵产物中活性组分的确定以及活性物质的分离与纯化:利用硅胶柱层析,将粗提物分为5个组分(Fr.1-Fr.5)。采用活性追踪溯源法,比较不同组分对植物病原真菌代表番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制效果,发现组份Fr.2对该病原真菌的抑制效果最好(抑制率=65.35%),因此确定Fr.2为活性组分。利用柱层析、薄层层析制备、高效液相半制备等化学分离技术对活性物质进行分离及纯化。最终得到3个单体化合物。5.SN313发酵产物中活性物质的结构鉴定:利用(MS)质谱、(NMR)核磁共振波谱技术以及相关文献调研确定了化合物1、2、3的结构,分别是N-(2-羟基苯基乙酰)色胺(1)、吩嗪-1-羧酸(2)、环(脯氨酸-色氨酸)(3),其中化合物1是一个新的β-吲哚基乙胺类衍生物,化合物2是一已知注册生物农药申嗪霉素的主要有效成分。6.化合物的抑菌活性测定:选定测试粗提物活性时筛选出的番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)和小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)为化合物抑菌活性试验对象。利用96孔板酶标微量稀释法测定了化合物1、2、3对这四种植物病原真菌的抑制情况。结果表明:化合物1对番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病菌具有一定的抑制作用(EC_(50)分别为11.20μg/mL和28.94μg/mL);化合物2对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉病菌、水稻纹枯病菌和小麦根腐病菌均有一定的抑制作用(EC_(50)<40μg/mL);化合物3对番茄灰霉病菌具有一般的抑制效果(EC_(50)=41.58μg/mL)。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-01）
李凤麟,刘焕赠,席雪冬,于志国[5]（2018）在《嗜线虫致病杆菌SN313的次生代谢产物及其抑制植物病原真菌活性研究》一文中研究指出通过化学与生物活性筛选从土壤中分离得到一株菌株,利用16S r DNA方法将其鉴定为嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila并命名为SN313。采用微生物发酵、液相萃取、柱层析及半制备高效液相色谱等技术,对SN313的发酵液进行分离纯化,得到3个化合物。利用质谱和核磁共振等波谱技术并依据文献数据确定了这3个化合物分别是N-(2-羟基苯基乙酰)色胺(1)、吩嗪-1-羧酸(2)和环(脯氨酸-色氨酸)(3),其中化合物1是一个新的β-吲哚基乙胺类衍生物。通过微量稀释法测定了3个化合物对4种植物病原真菌的抑制活性。结果表明:化合物1对辣椒疫霉Phytophthoa capsici和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea具有明显的抑制作用(IC50值分别为11.20μg/m L和28.94μg/m L);化合物2对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉、水稻纹枯病菌Thanatephorus cucumeris和小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana有明显的抑制作用(IC50<40μg/m L);化合物3对番茄灰霉病菌具有较好的抑制效果(IC50=41.58μg/m L)。从土壤微生物中获取化合物2,为生物农药申嗪霉素有效成分的天然获取提供了一种新的途径。(本文来源于《农药学学报》期刊2018年02期）
杨晴,张杰,李天慧,南宫自艳,王勤英[6]（2017）在《嗜线虫致病杆菌属Pir毒素基因克隆和生物信息学分析》一文中研究指出采用基因组DNA提取法和目的基因PCR扩增对嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)HB310(Xn HB310)菌株中的pirA和pirB基因进行克隆及生物信息学分析。结果表明,pirA全长408 bp,pirB全长1 290 bp;其蛋白PirA分子量为14.9 kDa,含135个氨基酸,PirB分子量为48.2 kDa,含429个氨基酸;二级结构分析表明PirA无α-螺旋,含12个β折叠,PirB含8个α螺旋和12个β折叠;亚细胞定位表明PirA和PirB主要分布在细胞核;PirA不含跨膜结构域和信号肽,PirB含有跨膜结构域和凝集素结构域,不含信号肽。(本文来源于《中国植保导刊》期刊2017年09期）
彭刘亮[7]（2017）在《嗜线虫致病杆菌两种型态的某些生理特性和差异蛋白研究》一文中研究指出嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophilus)(致病杆菌)是一种在病原线虫肠道内能与小卷蛾斯氏线虫互利共生的革兰氏阴性菌,因其能产生杀虫毒素、抑菌、抗癌等多种活性物质而倍受瞩目。其具有初生型和次生型两种型态。初生型致病杆菌(初生菌)极不稳定,在传代培养过程中容易转变成次生型致病杆菌(次生菌)。它们不仅形态不同,多种生理特性也存在很大差异,因而限制了次生菌在农业上的应用。本论文基于致病杆菌型态变异的特性对初生菌和次生菌的某些生理特性和差异蛋白做了研究。主要研究内容如下:1、致病杆菌的筛选和鉴定。从线虫幼虫、线虫成虫和侵染后的大蜡螟中筛选初生菌,发现从侵染后的大蜡螟中筛选初生菌是种最优的筛选分离方法,操作简便、菌落纯,效率高。而次生菌不仅可以从线虫成虫和侵染后的大蜡螟中筛选得到,而且还能在初生菌的多次传代培养过程中获得。形态学鉴定结果显示初生菌平均长度4-5μm,呈杆状,表面凹凸不平。16S rDNA鉴定结果表明目的菌株与X.nematophilusATCC19061的同源性达99%,表明成功筛选到目的菌株。2、致病杆菌的某些生理特性研究。研究制定了致病杆菌的生长曲线,研究了温度和pH对致病杆菌生长速度的影响,同时还对菌株生长过程中培养液pH值的变化、菌株形态变化以及糖利用情况进行了研究。结果发现温度和p H对初生菌的生长影响较大。当温度低于25℃或pH呈弱酸性时,其生长速度极慢。当温度高于25℃和pH呈中性或弱碱性时,初生菌生长比次生菌均晚8-16小时进入对数生长期,在培养24 h时后初生菌逐渐向次生菌转化,72 h时则已全部转化为次生菌。它们在生长过程中只能分解葡萄糖产生有机酸,而不能利用乳糖和蔗糖。3、初生菌和次生菌的差异蛋白研究。利用iTRAQ技术共检测到367种差异蛋白,其中除了其他学者研究过的Xcn蛋白和Xnph1蛋白外,初生菌蛋白质组中还发现了以下几种特异性蛋白:与抗菌性相一致的Xcn蛋白和Xnph1蛋白、与致病杆菌附着点相关的鞭毛蛋白、菌毛适配器蛋白、菌毛粘附素和荚膜合成调节元件B蛋白;多个代谢通路中起重要作用的谷氨酸合成酶;具有肿瘤药物耐药性、且对正常细胞和恶性细胞产生的细胞毒化合物具有防护作用的多药耐药蛋白。(本文来源于《湖南工业大学》期刊2017-06-06）
张春珍[8]（2017）在《伯氏致病杆菌SN269菌株的筛选及次生代谢产物研究》一文中研究指出在昆虫病原线虫中寄生的共生菌属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的革兰氏阴性细菌;其中与异小杆线虫科(Heterothabditidae)共生的发光杆菌(Phothrabdus),与斯氏线虫科(Steinernematidae)共生的致病杆菌(Xenohrabdus),是共生菌中仅有的的两类菌,他们寄生于3期侵染线虫的肠道内,随着寄主线虫一同进入到昆虫体内,并被释放到昆虫的血腔中,通过释放一系列的对昆虫有抑制分解作用的代谢产物,来杀死昆虫,为共生菌本身和线虫的生长发育和繁殖提供了充足的养分和养料。由于具有广泛的杀虫和抑菌效果,携带共生菌的线虫和线虫-共生菌复合体已经成为具有高效生物活性的新型的生物制剂,在农业上病虫害的生物防治中发挥着重要作用。特别是其中起到关键致病作用的共生菌,能够在发酵过程中合成和分泌多种具有高效抑菌活性和调节作用的代谢产物,对其进行分离纯化及结构鉴定在农业领域具有巨大的挖掘潜力,也将为新生物农药的研发奠定基础。本实验针对共生菌的主要研究方法和结果如下:1.共生菌菌株的分离纯化:本文通过对辽宁省内(抚顺市,丹东市凤城,铁岭市龙首山,铁岭市西丰等)以及省外周边(内蒙古牙克石市博克图,呼伦贝尔市扎兰屯;吉林省白山市长白山等)部分地区的土样进行采集,共得到102个土样;采用white-trap法分离获得了 38株初生型和4株次生型菌株,共计42株。2.目标菌株的筛选:对分离纯化得到的42株共生菌进行小发酵,用大孔树脂吸附法获取共生菌的粗提物。采用TLC检测技术对菌株发酵粗提物进行分析检测,结果表明SN231具有不同于其他所有粗提物的组分。分别采用菌丝生长速率法和菌块移置法测定候选菌株及其粗提物对植物病原真菌的抑制作用。结果表明,SN231菌株及其发酵粗提物均对辣椒疫霉病菌有一定的抑制作用。所以选定其为目标菌株,列入实验室的菌种库给予新的命名SN269,进行下一步实验。3.SN269菌株的鉴定:对SN269菌株进行16SrRNA序列分析。PCR扩增SN269菌株的16S rRNA序列,选择同源序列进行Clustal比对,采用Mega 6.0软件构建系统发育树,结果显示SN269菌株与Xenorhabdus bovienii聚在一起,同源性为100%,所以SN269 菌株属于 Xenorhabdus bovienii,命名为Xenorhabdus bovieniiSN269。4.SN269菌株次生代谢产物分离纯化:对SN269菌株进行液体发酵得到粗提物。然后利用柱层析技术与半制备高效液色谱技术相结合的方法对SN269菌株的次生代谢产物进行分离纯化,获得目标化合物D3。5.D3化合物的结构鉴定及活性研究:经核磁共振波谱及高分辨质谱分析,并结合相关文献,将D3鉴定为madumycin Ⅱ,是Streptogramin中具有高效抑菌活性的抗生素。通过菌丝生长速率法和微量肉汤稀释法测定化合物D3的抑真菌及细菌活性,结果表明化合物D3对辣椒疫霉和番茄灰霉的抑制效果尤为突出(EC50值分别为35.32和35.40μg/mL),并且对金黄色葡萄球菌具有很好的抑制效果IC50值为分别为0.13±0.02μg/mL。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-06-06）
俞晗[9]（2017）在《致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84次生代谢产物对叁种植物病原真菌抑菌作用的研究》一文中研究指出随着人类社会的不断发展,人们对生活质量、生存环境的要求也不断提高,虽然人类的种种要求推动了科学技术的发展,但也随之带来很多环境问题。在农业生产中,化学农药是最主要也是最为有效防治病虫害的方式,由于环境的不断恶化以及人们环保意识的不断提高,寻找代替化学农药的替代品已成为热点。生物农药因其低残留、低毒、不易产生抗药性、选择性强等优点已成为世界各国的研究重点。农用抗生素主要指生物农药中的微生物源农药,目前在杀虫和杀菌方面已取得显着的防治效果,成为当今研究的热点。本试验从土壤中分离得到一株昆虫病原线虫共生菌Xenorhabdus bovienii SN84,研究发现该菌株的次生代谢产物可有效抑制番茄灰霉菌、辣椒疫霉菌和大豆疫霉菌的生长。通过试验测定了致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84发酵液、粗提物以及分离得到的7种纯化合物对番茄灰霉菌、辣椒疫霉菌和大豆疫霉菌叁种植物病原真菌的抑制效果,并利用致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84的发酵液对番茄幼苗进行生物测定,以期得到一株能够抑制植物病原真菌的新型农用抗生素或其前导活性产物的菌株,为解决生产中缺少对叁种靶标菌株具有安全高效的农用抗生素品种提供可能。主要研究结果如下:测定致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84菌株发酵液对叁种植物病原真菌的抑菌效果,结果显示,Xenorhabdusbovienii SN84菌株无菌发酵液对叁种靶标病原真菌均有显着的抑制效果。当Xenorhabdusbovienii SN84无菌发酵液的浓度达到2%时,对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制可达到近50%;当Xenorhabdus bovienii SN84无菌发酵液的浓度达到0.6%时,对辣椒疫霉病菌和大豆疫霉病病原菌菌丝生长的抑制可达到近50%。测定致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84菌株发酵粗提物对叁种植物病原真菌的抑菌效果,结果显示,得到A、B、C和D四个组分中仅B组分有抑菌效果,且对番茄灰霉菌的抑制效果最佳,对另外两种植物病原真菌的抑制效果不佳,固将番茄灰霉菌作为下一步试验研究重点,并探究抑菌效果较发酵液有所降低的原因。测定从致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84菌株发酵产物中分离得到的7种纯化合物对番茄灰霉菌孢子萌发的抑制作用,结果显示仅C2-2对番茄灰霉病病菌孢子萌发的抑制作用最强,且持续作用时间最为持久,若其进行更加深入研究,有望得到一株对番茄灰霉病病菌抑制活性较强的生物农药或其先导化合物。测定致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84菌株发酵液对番茄灰霉病的抑制作用,进而检测该菌株发酵液对番茄幼苗的保护作用。结果显示,随着加入无菌发酵液的量的增多,灰霉病的发病率逐渐降低。当Xenorhabdus bovienii SN84无菌发酵液的浓度为8%时,对番茄幼苗起到有效的预防番茄灰霉病的效果。表明了进一步研究致病杆菌Xenorhabdus bovienii SN84菌株作为生物农药或其先导化合物的重要意义。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-06-01）
陈东升[10]（2017）在《埃勒斯致病杆菌SN22次生代谢产物分离和抑菌活性研究》一文中研究指出昆虫病原线虫共生菌(Entomopathogenic bacteria)以其独特的作用方式和能够产生大量的抗菌、杀虫活性物质,越来越得到国内外专家学者的重视。目前,我国对昆虫病原线虫共生菌的研究主要集中在发酵液的活性和杀虫蛋白的活性研究,而对于发酵液中含有的小分子化合物的抑菌活性的研究较少,因此本文的研究重点放在以下几个方面:昆虫病原线虫共生菌SN22分子生物学鉴定、分离纯化次生代谢产物中的小分子单体化合物、鉴定小分子化合物的化学结构并测定小分子化合物的抑菌活性,结果如下:1.SN22菌株的鉴定:对SN22菌株进行生理生化特性测定和16S rRNA序列分析。PCR扩增SN22菌株的16S rRNA序列,选择同源序列进行Clustal比对,采用Mega6.0软件构建系统发育树,结果显示SN22菌株与Xenorhabdus ehlersii DSM 16337T/AJ810294同源相似性为100%,将其编号为Xenorhabdus ehlersii SN22.2.SN22菌株次生代谢产物的分离纯化:对埃勒斯致病杆菌SN22进行大批量发酵,采用活性追踪法对其活性成分进行追踪,发现BC组分抑菌活性较好。利用硅胶柱层析结合凝胶柱层析技术从埃勒斯致病杆菌SN22(Xenorhabdus ehlersii SN22)发酵液中分离得到5个单体化合物,并分别命名为化合物1,化合物2,化合物3,化合物4和化合物5。通过核磁共振波谱、质谱及X-Ray单晶衍射技术分析,鉴定化合物1为3-(环己-2-烯)丙烯酸,文献调研发现该化合物为新的天然产物,命名为Xenorhabic acid。化合物2、化合物3、化合物4和化合物5均为已知化合物,分别鉴定为:Xenorhabdins4、Xenorhabdins5、Xenorhabdins2 和 Xenorhabdins1。3.SN22菌株次生代谢产物生物活性测定:采用菌丝生长速率法测定了该化合物对植物病原真菌的抑菌活性;采用微量稀释法测定了其对病原细菌的最小抑制浓度。结果表明:其对向日葵菌核病原菌Sclerotinia sclerotiorum和瓜果腐霉病原菌Pythium aphanidermatum菌丝生长具有明显的抑制作用,其EC50值分别为27.99和29.55 μg/mL;对大肠埃希杆菌Escherichia coli 的最小抑制浓度(MIC)为62.5 μg/mL。采用微量稀释法测定二硫吡咯酮类化合物(化合物2、化合物3、化合物4和化合物5)对病原细菌的活性。其结果表明:Xenorhabdins 4对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度(MIC)活性仅为4 μg/mL和2 μg/mL。Xenorhabdins 5对枯草芽孢杆菌的活性最好为32μg/mL。Xenorhabdins 2对枯草芽孢杆菌的活性表现最好,其最小抑制浓度为2 μg/mL,其次为金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度为32 μg/mL;Xenorhabdins 1对金黄色葡萄球菌的活性最好,其最小抑制浓度为16 μg/mL。本文发现的二硫吡咯酮类化合物对柞蚕链球菌没有表现为良好的生物活性。Xenorhabdins 4和Xenorhabdins 2浓度为256 μg/mL对柞蚕链球菌表现有微弱的活性。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-06-01）
致病杆菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode)共生菌及杀虫毒素一直是农业害虫生物防治领域的研究热点。PirAB (photorhabdus insect related toxin AB)蛋白是来自昆虫病原线虫共生菌的一种特殊二元毒素,本研究针对该毒素的杀虫特性及对寄主昆虫酶活的影响开展相关研究。首先对嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila) HB310菌株的pirAB基因进行原核表达,采用血腔注射的方法测定PirAB毒素对四龄棉铃虫(Helicoverpa armigera)的生物活性,并进一步测定对寄主体内乙酰胆碱酯酶、解毒酶(羧酸酯酶和多酚氧化酶)、保护酶(过氧化物酶和酪氨酸酶)活力的影响。结果表明,重组PirAB蛋白对四龄棉铃虫表现出很高的血腔注射活性(LD50=2.003μg/头)。在注射LD50剂量的PirAB毒素后,寄主体内乙酰胆碱酯酶活性与对照组差异不显着;羧酸酯酶活性呈现激活、抑制、再次激活的剧烈变化,处理36 h后趋于稳定;多酚氧化酶活性同样出现先激活、后抑制的变化趋势,24 h后活性变化趋于平稳,并且显着低于对照组(P<0.05);酪氨酸酶活性在毒素处理后基本处于抑制状态,12～36 h之间出现1次显着变化,急剧降低并再次升高,与对照组活性持平;过氧化物酶活性整体变化趋势不明显,持续低于对照组。本研究为揭示寄主昆虫对PirAB毒素的免疫机制提供了基础资料。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
致病杆菌论文参考文献
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