食源性致病菌生物芯片-RCA检测新方法

论文摘要

将生物芯片技术和滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)技术结合,建立一种在片RCA检测食源致病性菌新方法.依据待检测致病菌的基因组序列设计捕获探针(capture probe,CP)、检测探针(detect probe,DP)和滚环探针(rolling circle probe,RCP),其中捕获探针、检测探针与待检测致病菌基因组序互补,RCP不含任何待检菌基因组DNA序列,CP的5′末端修饰氨基,将其点样制备成CP微阵列,DP、RCP与待检菌gDNA混合后变性,将其与CP微阵列杂交并连接,RCA扩增反应体系中加入链亲和素进行在片扩增反应,分析检测结果.研究表明,该方法能灵敏、特异性地检测单一和混合靶标分子,以金黄色葡萄球菌为检测对象,其最低检测限可到达50fg/μL,其线性范围是400～50fg/μL,R2达到0.97,证实了该方法的可行性和可靠性,为食源性致病菌检测提供了新的技术方法.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 仪器与设备
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 菌种活化与gDNA提取
•     1.3.2 探针设计
•     1.3.3 液相滚环扩增
•     1.3.4 微阵列制备
•     1.3.5 在片杂交反应
•     1.3.6 连接反应
•     1.3.7 RCA扩增反应与结果检测
• 2 结果与分析
•   2.1 技术原理
•   2.2 核酸探针序列与特征
•   2.3 液相RCA biotin-dUTP适宜浓度确定
•   2.4 检测可行性
•   2.5 检测特异性
•   2.6 检测灵敏性
•   2.7 样品检测验证
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李同祥,黄天姿,孙会刚,汤薇,田林,李文,张传丽,王春燕

关键词: 生物芯片,滚环扩增,致病菌,检测探针

来源: 徐州工程学院学报(自然科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 徐州工程学院食品(生物)工程学院,徐州工程学院化学化工学院

基金: 江苏省重点研发计划项目(BE2016648),江苏省高校自然科学研究重大项目(16KJA210001)

分类号: TS207.4

DOI: 10.15873/j.cnki.jxit.000285

页码: 26-34

总页数: 9

文件大小: 358K

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