拟南芥转录因子基因WRKY72的特性分析及其抗逆功能鉴定

论文摘要

拟南芥（Arabidopsis thaliana）WRKY72转录因子属于Ⅱb亚组成员。为探明WRKY72基因的特性及其在非生物胁迫中的作用,本研究采用多种细胞分子生物学方法进行研究。亚细胞定位发现WRKY72转录因子定位在细胞核中。qRT-PCR检测WRKY72对多种逆境与激素处理的响应,结果表明在热害、盐害、脱落酸、低氮、葡萄糖等非生物胁迫处理3 h后,WRKY72的转录水平显著受到抑制。酵母体内转录活性分析以及双荧光素酶报告系统分析显示WRKY72是一个转录抑制子。酵母双杂交（yeast two-hybrid, Y2H）和双分子荧光互补（bimolecular fluorescence complementation, BiFC）发现,WRKY72不仅能与近源的WRKY9、WRKY36、WRKY47、WRKY61、WRKY72转录因子发生互作,还能与自身发生互作。利用该基因T-DNA插入突变体进行表型分析,结果显示,wrky72突变体在百草枯（methyl viologen,MV）和低氮（low nitrogen, LN）处理下主根延伸长度显著变短,说明WRKY72对MV和LN敏感,提示WRKY72参与调控活性氧耐受和氮营养吸收或利用过程。综上所述,WRKY72可能与自身及一些近源WRKY转录因子互作,以多聚体的形式发挥其转录抑制子的功能,并参与特定的非生物胁迫相关的信号转导过程。本研究为深入解析WRKY72转录因子的抗逆功能与分子调控机制提供了资料基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 植物材料
•   1.2 c DNA克隆与酵母体内转录活性分析
•   1.3 AtWRKY72的亚细胞定位
•   1.4 实时荧光定量PCR （qRT-PCR） 和半定量qRT-PCR （Semi-qRT-PCR）
•   1.5 拟南芥原生质体的分离与双荧光素酶报告分析
•   1.6 酵母双杂交鉴定互作蛋白
•   1.7 双分子荧光互补试验验证互作蛋白
•   1.8 拟南芥基因组DNA的提取、突变体鉴定和T-载体克隆
•   1.9 AtWRKY72突变体在各非生物逆境处理下的表型分析
• 2 结果与分析
•   2.1 AtWRKY72基因的cDNA克隆与亚细胞定位分析
•   2.2 AtWRKY72对不同非生物逆境的响应分析
•   2.3 AtWRKY72转录活性分析
•   2.4 酵母双杂交筛选WRKY72的互作蛋白
•   2.5 双分子荧光互补验证蛋白互作的真实性
•   2.6 AtWRKY72基因的突变体鉴定及表型分析
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李琪,李烨,牛芳芳,郭小华,赵新杰,吴相民,杨博,江元清

关键词: 拟南芥,互作蛋白,抗逆

来源: 农业生物技术学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西北农林科技大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金(No.31270293)

分类号: Q943.2

页码: 191-203

总页数: 13

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