导读:本文包含了重组杆状病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:杆状,病毒,蛋白,系统,免疫,夜蛾,核型。
重组杆状病毒论文文献综述
孙一,李如梦,李军,马春喜,赵以恒[1](2019)在《表达高致病性H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组杆状病毒疫苗候选株的构建与免疫效果评估》一文中研究指出为了有效防控H7N9亚型禽流感疫情,研制能够预防高致病性H7N9亚型禽流感的疫苗非常必要。研究基于昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS),构建并拯救了一株表达高致病性H7N9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素蛋白(HA)的重组杆状病毒rBac-GD15HA。间接免疫荧光试验及免疫印迹试验鉴定结果表明rBac-GD15HA的HA蛋白在Sf9细胞中成功表达;重组病毒细胞传代试验结果表明rBac-GD15HA在传代过程中能保持较高的病毒滴度,且遗传稳定;鸡的免疫试验结果显示,重组疫苗在一次免疫后即能诱导较高水平的针对H7N9 AIV的抗体应答,并能提供针对高致病性H7N9 AIV 100%的临床保护。因此,研究结果可作为H7N9亚型禽流感疫苗研发策略的参考,为其防控提供一种安全有效的方法,也为今后广谱流感疫苗的研发奠定一定的基础。(本文来源于《中国家禽》期刊2019年18期)
李天增,潘晓梅,张伟,师小潇,徐龙飞[2](2019)在《重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的优化及蛋白免疫原性研究》一文中研究指出为获得高蛋白含量和良好免疫原性的抗原,利用杆状病毒表达体系进行猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白表达,采取正交试验设计确定叁因素(High five细胞浓度、病毒感染量、蛋白表达时间)的最佳组合,对重组病毒株v Bac-SP-PCV2的表达条件进行优化,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,纯化蛋白作为标准蛋白用于Western blotting中蛋白质定量分析和蛋白免疫原性检测。结果显示:2.0×10~6/mLHigh five细胞浓度、1.5 MOI病毒感染量、蛋白表达时间168 h为重组PCV2-rCap蛋白表达的最佳条件,表达产物纯化良好,并能被PCV2多克隆抗体识别,免疫豚鼠可诱导产生高水平PCV2抗体。研究表明纯化PCV2-rCap蛋白可作为标准蛋白用于后续表达蛋白的定量分析和PCV2亚单位疫苗研发候选抗原。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2019年08期)
陈鑫,胡玥玥,徐鸿毅,王晓燕,邓锴[3](2019)在《重组人PLCζ蛋白在昆虫细胞/杆状病毒表达系统内的表达、纯化及活性测定》一文中研究指出PLCζ是PLC家族的一种新型同工酶,在哺乳动物卵母细胞激活中起着极其重要的作用。近年来,体外大量表达和纯化有活性的PLCζ蛋白用于结构生物学研究一直未能获得成功。本研究首次在杆状病毒表达系统中表达和纯化重组人PLCζ蛋白,首先将人PLCζ基因克隆至pFastBac-HTA质粒构建重组载体,转化DH10Bac发生位点特异性转座,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid-PLCζ;在脂质体介导下将穿梭质粒转染Sf9昆虫细胞产生重组病毒,扩增病毒感染Sf9昆虫细胞进行蛋白表达;利用Ni~(2+)亲和柱及分子筛来纯化蛋白,并通过考马斯亮蓝染色、Western blotting及飞行时间质谱对蛋白进行鉴定,并进行酶活性测定。结果显示重组蛋白在Sf9昆虫细胞感染杆状病毒后72 h达到峰值并以分泌形式表达在细胞培养基中,Ni~(2+)亲和柱及分子筛纯化后的重组蛋白经Western blotting及电离飞行时间质谱鉴定为PLCζ蛋白,酶活性可达326.8 U/mL。该实验结果为重组人PLCζ蛋白大规模生产和生物医学应用研究提供了可参考利用的技术。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年06期)
卫丽丽,付月君[4](2019)在《重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP诱导Sf9细胞凋亡的机制分析》一文中研究指出苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒是一种模式杆状病毒,在农业虫害防治中广泛应用。其表达的PK2蛋白可以通过竞争性的与宿主细胞e IF2α激酶结合形成异源二聚体,抑制其磷酸化e IF2α,从而加速病毒增殖、诱导细胞凋亡。为了探讨PK2诱导宿主Sf9细胞凋亡的机制,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP。Western blot分析结果表明,重组病毒AcMNPV-PK2-RFP处理组在病毒侵染后48,60,72 h,宿主细胞内凋亡因子SfP53蛋白的表达量显着高于AcMNPV处理组,分别是AcMNPV处理组的1.16倍、1.39倍和1.79倍;在病毒侵染后48,72 h,AcMNPV-PK2-RFP处理组反映线粒体膜电位的绿色荧光分别是野生处理组的1.54倍和1.89倍,表明AcMNPV-PK2-RFP处理组的线粒体膜电位显着低于野生病毒处理组;同时,观察到AcMNPV-PK2-RFP处理组线粒体中的细胞色素c从病毒侵染后12 h开始释放。结果说明,过表达PK2的重组病毒AcMNPV-PK2-RFP可在感染后期加速SfP53蛋白的表达,通过影响线粒体凋亡信号通路加速宿主Sf9细胞的凋亡,同时表明重组病毒AcMNPV-PK2-RFP是一种相比野生型病毒抗虫活性更高的杀虫剂。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年05期)
曹志伟[5](2019)在《展示鲤疱疹病毒Ⅱ型膜蛋白的重组杆状病毒的构建及其对异育银鲫免疫保护效果的研究》一文中研究指出鲤疱疹病毒II型(CyHV-2)是疱疹病毒造血器官坏死病的病原体,主要感染金鱼、鲫鱼及其变种。它是一种高致病性的病毒,当水温在15℃~30℃时可造成近100%的死亡率。自2009年以来,在我国江苏北部的鲫鱼养殖区春秋季节连年发生大量的异育银鲫患出血病死亡,给我国水产养殖业带来了巨大的经济损失。目前关于CyHV-2的致病机制尚未完全清楚,疫苗接种仍然是防控CyHV-2最重要的手段。已报道的针对CyHV-2的灭活疫苗和亚单位疫苗都可以起到一定的保护效果,但是这两种疫苗都需要人工注射接种免疫,不仅耗费人力物力,而且在实际操作中也面临很多困难。因此,迫切需要研究出一种操作方便、保护效果突出的疫苗来防控CyHV-2感染。在本研究中,使用杆状病毒表面展示系统表达了九个截短的CyHV-2膜蛋白(ORF25,ORF25C,ORF25D,ORF30,ORF124,ORF131,ORF136,ORF142A,ORF146)和GFP报告蛋白。通过Western blot分析,结果显示GFP和9种膜蛋白成功地展示在重组病毒表面。为了检测重组杆状病毒能否进入异育银鲫细胞,同时重组杆状病毒携带的外源基因能否成功表达,使用重组杆状病毒rAcMNPV-GFP转导异育银鲫肾细胞(GiCK)。结果表明杆状病毒可以转导进入鱼细胞,同时外源基因在鸡β-肌动蛋白启动子调控下可以有效表达。健康的异育银鲫使用重组杆状病毒(rAcMNPV-ORF25,rAcMNPV-ORF25C,rAcMNPV-ORF25D,rAcMNPV-ORF30,rAcMNPV-ORF124,rAcMNPV-ORF131,rAcMNPV-ORF136,rAcMNPV-ORF142A,rAcMNPV-ORF146,rAcMNPV-GFP)浸泡免疫,模拟免疫组用相同体积的PBS处理。在免疫后1,2,4,7和15天随机取样检测免疫相关基因白细胞介素-11(IL-11)和补体成分C3的表达水平。结果实验组中白细胞介素-11(IL-11)和补体成分C3基因的表达水平显着上调。在免疫后2,3,4周尾部穿刺采血检测血清中免疫球蛋白M(IgM)的水平。结果显示,在免疫后3周,大多数疫苗免疫组的平均IgM水平增加1-2倍。随后,免疫过的异育银鲫通过腹腔内注射CyHV-2感染,所有免疫组均具有一定抵抗CyHV-2感染的能力。在展示和表达ORF25,ORF25C和ORF146的杆状病毒免疫组中,异育银鲫的相对存活率分别达到83.3%,87.5%和70.8%。本论文的研究结果表明,杆状病毒展示的ORF25,ORF25C和ORF146可能成为预防异育银鲫感染CyHV-2的潜在候选疫苗。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01)
韩永刚,刘浩[6](2019)在《猪瘟E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗在非典型猪瘟病例中的控制效果》一文中研究指出猪瘟是由猪瘟病毒引起的高度接触性传染病最早发现于美国俄亥俄州。世界动物卫生组织(OIE)将其列入OIE疫病名录,为必须申报的(Notifiable)动物传染病,我国也将其列为一类动物传染病[1]。该病在世界范围内流行,以流行范围广、发病率和致死率高为主要特征,给世界养猪业造成严重危害。近年来,猪瘟在亚洲、欧洲、南美洲等地区呈现复发的趋势,一些已宣布消灭了猪瘟的国家(如法国、荷兰、德国等)又见猪瘟复发的报道[2]。王(本文来源于《养猪》期刊2019年02期)
崔潇婷,顾玲玲,吴萌,张继玲,王安平[7](2019)在《杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒的鉴定》一文中研究指出为对杆状病毒表达系统制备的重组禽腺联病毒进行生物学特性的鉴定,将含GFP报告基因及AAAV两侧末端重复序列的重组杆状病毒rBac-GFP、表达AAAV结构蛋白的重组杆状病毒rBac-VP、表达AAAV功能蛋白的重组杆状病毒rBac-Rep以感染复数为5,同时感染摇瓶培养中的昆虫细胞Sf9,72 h后收集细胞沉淀,反复冻融3~5次后,离心取上清。经滤膜过滤、氯仿抽提和PEG沉淀后,进行电镜观察和Western blot分析,并体外感染鸡成纤维细胞和鸡肝细胞系。SDS-PAGE结果显示,rAAAV得到了较好的纯化,电镜下可观察到大小约20 nm的典型细小病毒样粒子,Western blot分析数据显示rAAAV由3个结构蛋白组成,与野生病毒相似。体外表达试验结果显示,rAAAV能介导GFP报告基因在鸡细胞中稳定持久地表达。表明杆状病毒表达系统制备的rAAAV具有与野生病毒相似的性质,可应用于后继研究和开发应用。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年05期)
何海健,吴瑗,王鲁彦,李群景,巴少波[8](2019)在《PEDV分离株S1基因的重组杆状病毒真核表达》一文中研究指出为了研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)分离株(PEDV/LA/2014/02)纤突蛋白(S1)的真核表达及其反应原性,本研究利用杆状病毒真核表达系统表达出重组His-PEDV-S1蛋白。利用在线软件分析PEDV S1基因在sf9细胞内的稀有密码子,经优化密码子后的基因进行人工合成,合成后的PEDV S1基因被克隆至杆状病毒的穿梭载体(pFastBac HT A)中,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行重组,PCR方法验证后将重组成功的杆状病毒基因组转染sf9细胞,获得包装成功的杆状病毒,该病毒进一步接种sf9细胞,显微镜观察重组病毒引起的细胞病变,RT-PCR方法验证PEDV S1基因的mRNA表达水平,SDS-PAGE、Western blotting方法验证重组PEDV S1蛋白的表达及其反应原性。结果显示,试验成功构建了重组穿梭质粒pFastBac HT A-PEDV-S1(pSL598),成功包装表达了PEDV S1的重组杆状病毒,重组杆状病毒能使sf9细胞出现细胞变大、胞内有空泡等典型病变,PEDV S1基因的mRNA获得表达,重组蛋白His-PEDV-S1在sf9细胞中得到表达,蛋白质大小为83 ku左右,主要存在于细胞沉淀中,表达的重组蛋白能与小鼠抗His抗体和猪抗PEDV阳性血清反应,说明该蛋白具有较好的反应原性。本研究为研制PEDV新流行毒株新型亚单位疫苗和防控该毒株的流行提供了材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年03期)
金宏凯[9](2019)在《LN-PCV3分子特性及其与PCV2的二联重组杆状病毒疫苗的构建和免疫原性分析》一文中研究指出目的对猪圆环病毒3型辽宁分离株(LN-PCV3)的分子特征进行分析,并依据广泛流行的猪圆环病毒2型(PCV2)给养猪业带来的重大经济损失,特别是二者混合感染,带来更大经济损失的现状,本研究利用杆状病毒表达系统分别构建了表达PCV3 Cap基因的单联疫苗和融合表达PCV2和PCV3 Cap蛋白基因的二联疫苗,并对其免疫原性进行评估,为PCV2和PCV3的综合防治储备了物质基础。方法参照湖北分离株HB-PCV3-2016(GenBank登录号:KY954038.1)设计特异性引物,以PCR检测PCV3阳性的样品为模板,对全基因进行PCR扩增,将PCR产物使用琼脂糖凝胶回收试剂盒回收后,与pMD-18-T载体进行连接,转化到DH5a感受态细胞中,筛选得到的阳性克隆菌落进行质粒提取,进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的质粒送生工生物公司进行测序。将测序得到的基因序列用Mega7.0和DNAStar软件进行分析,与GenBank公布的PCV3其他分离株基因序列进行比对和分子特性分析。在此基础上,分别选取PCV2疫苗株PCV2-SH(登陆号:HM038027.1)的Cap蛋白基因和LN-PCV3的Cap蛋白基因,用刚性连接肽Linker将PCV2 Cap蛋白基因与PCV3 Cap蛋白基因进行连接融合,作为免疫原基因。根据昆虫细胞密码子偏爱性、对免疫原基因进行人工修饰、优化和合成,获得免疫原基因PCV2-3-Cap,并克隆至pMD-18-T载体,构建重组质粒T-PCV2-3-Cap。分别以优化后的PCV3-Cap蛋白基因和PCV2-3-Cap融合蛋白基因为靶基因,设计特异性引物,以T-PCV2-3-Cap为模板,扩增PCV3-Cap和PCV2-3-Cap蛋白基因,转化到DH5a感受态细胞中,筛选得到的阳性克隆菌落进行质粒提取,进行酶切鉴定。将鉴定正确的PCV3-Cap基因和PCV2-3-Cap融合基因克隆至pFastBac 1载体上,分别构建杆状病毒转移载体pFastBac-PCV3-Cap和pFastBac-PCV2-3-Cap。将pFastBac-PCV3-Cap和pFastBac-PCV2-3-Cap分别转化到DH10Bac感受态细胞中进行转座,经过蓝白斑筛选后,提取重组杆粒,并转染SF9昆虫细胞,通过筛选获得表达PCV3 Cap基因与共表达PCV2和PCV3 Cap融合基因的重组杆状病毒,经PCR,SDS-PAGE,Western blot,免疫荧光,电镜等实验方法鉴定正确后,用蔗糖密度离心法对病毒进行纯化。所得的纯化病毒作为免疫原,以1x10~8pfu的重组杆状病毒rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap免疫BALB/c小鼠,并设免疫对照组,每隔2周进行一次免疫,连续免疫叁次,分别在首免后0d,14d,28d,42d对小鼠尾部进行采血并分离血清。用ELISA方法检测PCV2和PCV3的抗体水平。首免后42d,处死小鼠摘取脾脏,通过CCK-8法计算各免疫组之间小鼠的淋巴细胞增值指数SI。按照细胞因子检测试剂盒的使用方法,对免疫小鼠的IL-2,IL-4,IFN-γ等细胞因子进行检测,从而验证PCV3-Cap蛋白基因、PCV2-3-Cap融合蛋白基因在杆状病毒系统中的表达效果及其免疫原性。结果通过PCR方法从PCV3阳性样品中,克隆到PCV3全基因序列,长度为2000bp,命名为LN-PCV3(GenBank登录号:MH177453.1)。遗传进化树分析显示,我国目前流行的PCV3分离株可形成3个分支(3a簇、3b簇与3c簇),LN-PCV3株处于3a簇分支中,与湖北株HB-PCV3-2016(GenBank登录号:KY354039.1)同源性最高,达到99.7%。在此基础上,将构建的重组杆状病毒转移载体pFastBac-PCV3-Cap和pFastBac-PCV2-3-Cap,分别转化到DH10Bac感受态细胞中进行转座后,PCR交叉检验证明获得重组杆粒rAcBacmid-PCV3-Cap和rAcBacmid-PCV2-3-Cap。然后将重组杆粒转染SF9昆虫细胞,制备重组杆状病毒,重组杆状病毒连续传代3次,传代3次(P3代)重组杆状病毒rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap经透射电镜观察,可见假病毒粒子和杆状病毒粒子。用M13通用引物、PCV3-Cap基因特异引物、PCV2-3-Cap基因特异性引物分别进行PCR扩增,可见674bp与2974bp,1514bp与3814bp处出现目的片段,大小均与理论值一致。分别通过SDS-PAGE和Western blot检测,在30kD与55kD处出现目的条带。通过免疫荧光实验,两组重组蛋白在荧光显微镜下均出现绿色荧光,正常细胞未出现荧光效果,证明PCV3-Cap基因、PCV2-3-Cap融合基因在SF9细胞中获得表达,并且成功筛选到重组杆状病毒rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap。抗体水平检测结果表明,rvAc-PCV3-Cap和rvAc-PCV2-3-Cap免疫组PCV3抗体水平均明显高于PBS阴性对照组与PCV2灭活苗阳性对照组,差异显着(P<0.05),但rvAc-PCV3-CAP和rvAc-PCV2-3-Cap免疫组间PCV3抗体水平差异不显着(P>0.05)。rvAc-PCV2-3-Cap免疫组PCV2抗体水平均明显高于PBS阴性对照组和rvAc-PCV3-Cap组,差异显着(P<0.05),但与PCV2灭活苗阳性对照组相比,抗体水平差异不显着(P>0.05)。CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增值指数(SI)的结果显示,rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap免疫组、PCV2灭活苗阳性对照组均与PBS组相比,SI值差异显着(P<0.05),但其他叁个免疫组间相比,差异并不显着(P>0.05)。细胞因子水平检测表明,证明注射重组杆状病毒组能够刺激机体提高IL-2,IL-4,IFN-γ的分泌水平,与PCV2灭活苗组差异不显着(P>0.05),但明显高于PBS阴性对照组(P<0.05)。结论1.成功对LN-PCV3进行了全基因克隆,并对其分子生物学特性进行了分析。2.利用杆状病毒表达系统实现了PCV3 Cap蛋白基因和PCV2、PCV3 Cap蛋白融合基因的表达,并成功筛选到了重组杆状病毒rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap。3.小鼠免疫实验表明重组杆状病毒rvAc-PCV3-Cap与rvAc-PCV2-3-Cap能够刺激机体产生特异性体液免疫和细胞免疫应答,为猪圆环病毒新型疫苗研制提供了技术支持和物质储备。(本文来源于《锦州医科大学》期刊2019-03-01)
刘喜凤,黄丹丹,张学贤[10](2019)在《PCV2b Cap蛋白重组杆状病毒的构建及鉴定》一文中研究指出猪圆环病毒(PCV)能够引起多种综合征和疾病,给养猪业造成了较大的经济损失。PCV2毒株在2003年后以PCV2b取代PCV2a成为临床感染的猪群中最为流行的基因型。PCV基因组为单股负链环状DNA,其中ORF2编码病毒核衣壳蛋白Cap蛋白,Cap蛋白是主要的免疫原性蛋白。本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将PCV2b的Cap蛋白基因克隆到杆状病毒载体中,通过制备杆粒、转染sf9细胞,获得表达PCV2b Cap蛋白的重组杆状病毒毒株,从IFA、SDS-PAGE及Western-blotting分析结果可以看出,该重组杆状病毒毒株成功表达了PCV2b Cap蛋白,为制备PCV2b Cap蛋白亚单位疫苗打下基础。(本文来源于《福建畜牧兽医》期刊2019年01期)
重组杆状病毒论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
为获得高蛋白含量和良好免疫原性的抗原,利用杆状病毒表达体系进行猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白表达,采取正交试验设计确定叁因素(High five细胞浓度、病毒感染量、蛋白表达时间)的最佳组合,对重组病毒株v Bac-SP-PCV2的表达条件进行优化,利用His Bind蛋白质纯化试剂盒对表达产物进行纯化,纯化蛋白作为标准蛋白用于Western blotting中蛋白质定量分析和蛋白免疫原性检测。结果显示:2.0×10~6/mLHigh five细胞浓度、1.5 MOI病毒感染量、蛋白表达时间168 h为重组PCV2-rCap蛋白表达的最佳条件,表达产物纯化良好,并能被PCV2多克隆抗体识别,免疫豚鼠可诱导产生高水平PCV2抗体。研究表明纯化PCV2-rCap蛋白可作为标准蛋白用于后续表达蛋白的定量分析和PCV2亚单位疫苗研发候选抗原。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组杆状病毒论文参考文献
[1].孙一,李如梦,李军,马春喜,赵以恒.表达高致病性H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的重组杆状病毒疫苗候选株的构建与免疫效果评估[J].中国家禽.2019
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[4].卫丽丽,付月君.重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP诱导Sf9细胞凋亡的机制分析[J].山西农业科学.2019
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