基于喜树碱生物合成的喜树内生菌及其关键酶基因克隆

论文摘要

以喜树内生菌为研究对象,经发酵培养后提取喜树碱及其衍生物,采用HPLC法对发酵液中喜树碱及其衍生物进行定性检测,获得能够产生喜树碱（CPT）及10-羟基喜树碱（HCPT）的喜树内生菌。通过对喜树碱生物合成途径的研究,选取10-羟基香叶醇羟化酶（G10H）、10-羟基香叶醇脱氢酶（HGO）、色氨酸脱羧酶（TDC）和异胡豆苷合酶（STR）4个关键酶基因作为研究对象,设计特异性引物,克隆目的基因。提取喜树RNA,经反转录合成cDNA,同时提取喜树内生菌DNA。分别以植物cDNA和内生菌DNA作为模板,筛选鉴定喜树碱合成途径的关键酶基因G10 H、HGO、TDC和STR并与喜树关键酶基因进行比较,初步解析喜树碱代谢途径,为喜树内生菌发酵合成喜树碱及其衍生物提供理论依据。

论文目录

• 0 引言
• 1 试验
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 内生菌发酵液中喜树碱及其衍生物的提取
•     1.2.2 喜树碱与10-羟基喜树碱的HPLC检测
•     1.2.3 标准曲线方程的确定
•     1.2.4 喜树碱内生细菌的分子鉴定
•     1.2.5 喜树内生菌DNA的提取
•     1.2.6 喜树RNA的提取
•     1.2.7 喜树碱合成途径中关键酶基因克隆
• 2 结果与讨论
•   2.1 喜树内生菌发酵液中喜树碱与10-羟基喜树碱的HPLC检测
•   2.2 喜树碱内生菌的分子鉴定
•   2.3 喜树碱合成途径中关键酶基因克隆
•     2.3.1 以喜树cDNA为模版扩增目的片段
•     2.3.2 以喜树内生菌DNA为模版扩增目的片段
•   2.4 喜树与喜树内生菌中喜树碱合成的比较
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 万如意,高琳,苏莹莹,丛云寒,姜逸,金朝霞

关键词: 喜树,内生菌,喜树碱,关键酶基因

来源: 大连工业大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,一般化学工业

单位: 大连工业大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31670604),辽宁省自然科学基金项目(2015020659)

分类号: TQ464.4;TQ920.1

DOI: 10.19670/j.cnki.dlgydxxb.2019.0105

页码: 19-23

总页数: 5

文件大小: 562K

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