生殖系克隆论文_吕博彦

导读:本文包含了生殖系克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,生殖细胞,图式,标记,论文,vasa,nanos。

生殖系克隆论文文献综述

吕博彦^[1]（2011）在《黑脊倒刺鲃几种生殖系标记基因的克隆、鉴定及其在生殖细胞发育中的表达》一文中研究指出生殖细胞标记基因是一类指示、追踪生殖细胞相关生理活动的基因,被广泛用于性腺发生、配子发生和原生殖细胞的起源、迁移、分化等方面的研究。而且对于分离生殖细胞进行体外培养及移植,为濒临灭绝的物种借助近缘物种进行生殖繁衍保护也提供了有用的工具。本实验通过同源克隆的策略,成功克隆出黑脊倒刺鲃中关于生殖细胞早期发育阶段的标记基因Sc-vasa, Sc-nanos以及与生殖细胞减数分裂Ⅰ相关的基因Sc-scp3: Sc-vasa基因开放阅读框的全长1962 bp,其编码654个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Vasa蛋白与银鲫、金鱼、草鱼、虹鳟鱼、金枪鱼、斑马鱼、罗非鱼和黄鳝的Vasa蛋白相似度分别为90%、89%、86%、79%、79%、77%、77%、74%;Sc-nanos基因开放阅读框的全长456 bp,其编码125个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Nanos蛋白与鲤鱼、斑马鱼、紫色球海胆、家蚕和大熊猫的Nanos蛋白的相似度分别为81%、63%、52%、50%、44%;Sc-scp3基因部分开放阅读框的全长序列477 bp,其编码159个氨基酸。经比对发现,黑脊倒刺鲃Scp3蛋白与斑马鱼、虹鳟鱼、非洲爪蟾、牛、人和小鼠的Scp3蛋白相似度分别为93%、84%、72%、69%、66%、65%。半定量RT-PCR分析显示,Sc-vasa、Sc-nanos和Sc-scp3叁种基因仅在黑脊倒刺鳃成鱼的性腺组织中特异的表达。RNA原位杂交结果表明：在精子发生中,Sc-vasa mRNA、Sc-nanos mRNA和Sc-scp3 mRNA表达结果较为相似,均是在精原细胞和初级精母细胞中表达,而在后期中未发现表达。在卵子发生中,Sc-vasa mRNA、Sc-nanos mRNA和Sc-scp3 mRNA在卵原细胞和卵母细胞的各个时相中均有表达。并且在卵原细胞和前期的卵母细胞中表达强烈,而在后期时相的卵母细胞中阳性信号逐渐减弱,且向细胞边缘聚集。(本文来源于《福建师范大学》期刊2011-04-06）

隋娟^[2]（2008）在《Aj-vasa全长cDNA的克隆及其在仿刺参（Apostichopus japonicus）生殖系中的发育表达图式》一文中研究指出生殖细胞的发生是发育生物学研究的重要领域。vasa基因在许多动物生殖系细胞中具有表达特异性,被广泛用作生殖细胞的分子标记物,在动物生殖细胞发生和生殖调控等研究中起到了重要的作用。仿刺参(Apostichopus japonicus)俗称刺参,是我国主要的棘皮动物经济种类,然而迄今尚未见对其生殖系起源和性腺发生的研究报道。本文采用同源克隆策略和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了刺参Aj-vasa全长cDNA序列,对其进行了序列特征和时空表达分析,并以Aj-vasa mRNA为标记,研究了刺参原生殖细胞的起源;进一步采用组织学技术,观察了刺参性腺的早期发生。克隆得到的Aj-vasa基因cDNA序列全长2167 bp,含有开放阅读框1593 bp,编码530个氨基酸。5′非翻译区(UTR)为449 bp,3′UTR为125 bp。推导的氨基酸序列具有DEAD-box家族蛋白的全部9个保守结构域以及GG重复序列。同时在该基因的蛋白序列中还发现了ARKF框,该框只在DEAD-box家族VASA和PL10蛋白中保守存在,而在其他亚家族中并未发现。同源性比对和进化分析显示该基因编码蛋白与其他物种的VASA相关蛋白具有较高的相似性,证明VASA蛋白在进化上高度保守。蛋白叁维结构预测蛋白功能显示该蛋白Aj-VASA具备了DEAD-box家族蛋白RNA连接,ATP酶和解旋酶的功能。半定量RT-PCR分析显示,Aj-vasa基因在成体性腺组织中特异表达;原位杂交结果表明Aj-vasa mRNA主要在精原、精母细胞和卵母细胞的胞质中表达显着,推测该基因可能参与刺参两性配子的发生。胚胎和幼虫半定量RT-PCR分析检测到从未受精卵到耳状幼虫都含有Aj-vasa mRNA。表达量自未受精卵至囊胚期逐渐升高,原肠胚至耳状幼虫表达量逐渐降低。整体原位杂交结果显示:从未受精卵到囊胚期,Aj-vasa mRNA在各细胞胞质中均有分布,原肠胚阶段Aj-vasa阳性细胞集中在内、中胚层处,小耳状幼虫阶段阳性细胞分布在消化道及水体腔囊处,随后出现在水体腔及左右体腔处,并在樽形幼虫及五触手幼虫期分布在身体左右两侧的球状体处,到稚参期,强阳性信号前移至身体前端,到1mm幼参期,表达Aj-vasa的细胞已集中于背系膜处,这些细胞即为原始生殖细胞。对1mm至3cm的幼参进行石蜡切片,结果显示:1～3mm幼参中,原始生殖细胞数个集群被包在背系膜处,形成性腺原基;5mm幼参性腺原基中开始出现空腔,具有了性腺雏形;至3cm幼参,性腺开始出现分支,其形态接近成体性腺形态。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2008-06-04）

生殖系克隆论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

生殖细胞的发生是发育生物学研究的重要领域。vasa基因在许多动物生殖系细胞中具有表达特异性,被广泛用作生殖细胞的分子标记物,在动物生殖细胞发生和生殖调控等研究中起到了重要的作用。仿刺参(Apostichopus japonicus)俗称刺参,是我国主要的棘皮动物经济种类,然而迄今尚未见对其生殖系起源和性腺发生的研究报道。本文采用同源克隆策略和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了刺参Aj-vasa全长cDNA序列,对其进行了序列特征和时空表达分析,并以Aj-vasa mRNA为标记,研究了刺参原生殖细胞的起源;进一步采用组织学技术,观察了刺参性腺的早期发生。克隆得到的Aj-vasa基因cDNA序列全长2167 bp,含有开放阅读框1593 bp,编码530个氨基酸。5′非翻译区(UTR)为449 bp,3′UTR为125 bp。推导的氨基酸序列具有DEAD-box家族蛋白的全部9个保守结构域以及GG重复序列。同时在该基因的蛋白序列中还发现了ARKF框,该框只在DEAD-box家族VASA和PL10蛋白中保守存在,而在其他亚家族中并未发现。同源性比对和进化分析显示该基因编码蛋白与其他物种的VASA相关蛋白具有较高的相似性,证明VASA蛋白在进化上高度保守。蛋白叁维结构预测蛋白功能显示该蛋白Aj-VASA具备了DEAD-box家族蛋白RNA连接,ATP酶和解旋酶的功能。半定量RT-PCR分析显示,Aj-vasa基因在成体性腺组织中特异表达;原位杂交结果表明Aj-vasa mRNA主要在精原、精母细胞和卵母细胞的胞质中表达显着,推测该基因可能参与刺参两性配子的发生。胚胎和幼虫半定量RT-PCR分析检测到从未受精卵到耳状幼虫都含有Aj-vasa mRNA。表达量自未受精卵至囊胚期逐渐升高,原肠胚至耳状幼虫表达量逐渐降低。整体原位杂交结果显示:从未受精卵到囊胚期,Aj-vasa mRNA在各细胞胞质中均有分布,原肠胚阶段Aj-vasa阳性细胞集中在内、中胚层处,小耳状幼虫阶段阳性细胞分布在消化道及水体腔囊处,随后出现在水体腔及左右体腔处,并在樽形幼虫及五触手幼虫期分布在身体左右两侧的球状体处,到稚参期,强阳性信号前移至身体前端,到1mm幼参期,表达Aj-vasa的细胞已集中于背系膜处,这些细胞即为原始生殖细胞。对1mm至3cm的幼参进行石蜡切片,结果显示:1～3mm幼参中,原始生殖细胞数个集群被包在背系膜处,形成性腺原基;5mm幼参性腺原基中开始出现空腔,具有了性腺雏形;至3cm幼参,性腺开始出现分支,其形态接近成体性腺形态。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。