导读:本文包含了辅助病毒依赖型腺病毒载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:辅助病毒依赖型腺病毒载体,甲型H1N1流感病毒,血凝素
辅助病毒依赖型腺病毒载体论文文献综述
张梅,江彦泽,陈念华,付远辉,乔伟[1]（2014）在《可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建》一文中研究指出根据甲型H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株基因序列(A/California/07/2009(H1N1)),全基因合成甲型流感病毒血凝素(HA)编码基因,利用辅助病毒依赖型腺病毒载体(HDAd)骨架质粒pSC15B,构建可表达HA基因的HDAd/HA DNA分子载体,以磷酸钙法转染293Cre4细胞,与辅助病毒H14连续共感染,获得HDAd/HA载体,并大量制备和纯化,进行形态观察和体外感染的初步鉴定。透射电镜下观察HDAd/HA载体具有典型腺病毒形态;与辅助病毒H14共感染293细胞,RT-PCR检测HA基因有转录,显示成功构建HDAd/HA重组腺病毒载体,为甲型流感病毒体内免疫效果和免疫保护作用的研究奠定实验基础。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2014年01期）
江彦泽[2]（2012）在《可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定》一文中研究指出目的：新型甲型H1N1流感病毒是威胁人类健康的重要新发传染病,虽然已有可用于该病毒预防和治疗的疫苗及药物,但现有的神经氨酸酶抑制剂类抗病毒药物和以传统方法制备的流感病毒裂解疫苗均存在一定的局限性。近期研究表明,以重组腺病毒制备流感疫苗具有明显的优越性。本研究以全基因合成的方法获得甲型H1N1流感病毒血凝素(Hemagglutinin, HA)基因,并以辅助病毒依赖型腺病毒(Helper-dependent adenoviral vector, HDAd)载体系统为基础,构建可表达HA的重组HDAd,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法：根据GenBank上登录的甲流H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株(A/California/07/2009(H1N1))基因序列,采用全基因合成的方法合成由1701个碱基组成的HA编码基因。经核酸序列分析证实后,将HA基因克隆至HDAd穿梭载体pSC11-CMV,经限制性内切酶分析后,进一步将含有HA基因的表达盒克隆至HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/HA重组质粒,并以多组限制性内切酶进行分析鉴定。Pme I消化pSC15B/HA去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/HA DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/HA载体粗提液,随后以HDAd/HA粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/HA达到复制极限。随后,以HDAd/HA和辅助病毒感染293Cre4细胞大量制备HDAd/HA, CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化,利用透射电子显微镜观察病毒形态,分子生物学技术体外鉴定HDAd/HA表达情况。结果：成功构建了可表达甲流H1N1流感病毒HA蛋白的HDAd/HA载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/HA载体,透射电子显微镜观察到腺病毒,体外感染293细胞,RT-PCR检测到HA基因有转录结论：应用HDAd系统,成功构建了HDAd/HA重组腺病毒,并完成了该病毒的大量制备和纯化,为体内免疫学效力试验奠定了初步基础。(本文来源于《北京交通大学》期刊2012-06-01）
郑娴娴,何金生,付远辉,徐少华,谢灿[3]（2010）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率》一文中研究指出构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。(本文来源于《生物工程学报》期刊2010年08期）
郑娴娴[4]（2010）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率》一文中研究指出目的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector, HDAd)主要用于基因治疗的研究,目前仅有两篇关于HDAd作为系统疫苗载体的研究报道,与第一代腺病毒载体或复制缺陷型腺病毒载体(First generation adenoviral vector, FGAd)相比,发现HDAd可引起机体产生针对转基因的更强的细胞免疫和体液免疫反应。一般认为这种增强的免疫应答主要与HDAd能在体内高表达转基因及减弱的载体反应有关,关于这两种载体体外转基因表达情况的研究较少。绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)因其可在异源组织中稳定发出荧光、所产生的荧光不需要任何物质的辅助、不影响宿主等特性得到了广泛应用,增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)是经过密码子优化及氨基酸突变等一些列基因改造后获得的GFP突变体,发出的荧光比GFP更强、更易观察,成为比GFP应用更广泛的报告基因。为比较这两种载体的体外表达效率,我们构建了可表达EGFP的HDAd(HDAd/EGFP)并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定;同时与可表达EGFP的FGAd(FGAd/EGFP)进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法通过PCR获得带有CMV启动子、EGFP开放读码框(Open reading frame, ORF)和SV40多聚腺甘酸序列的EGFP表达盒,先后克隆至HDAd穿梭质粒pSC11及HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/EGFP重组质粒。PmeⅠ消化pSC15B/EGFP获得线性化片段,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16 h后感染辅助病毒H14,收获HDAd/EGFP粗提液,随后以HDAd/EGFP粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/EGFP达到复制极限。大量制备HDAd/EGFP , CsCl超速离心纯化,荧光显微镜和电镜下观察纯化后的HDAd/EGFP。使用分光光度计法测定纯化的病毒颗粒数(virus particle, vp),分别用约2000 vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况。结果成功构建可表达EGFP的HDAd/EGFP载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/EGFP。纯化后体外感染293Cre4细胞,荧光显微镜下观察到EGFP的表达;电镜观察可见典型的腺病毒颗粒。以相同量的FGAd/EGFP和HDAd/EGFP分别体外感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况,结果显示HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度。结论成功构建、纯化了可表达EGFP的HDAd/EGFP载体,体外实验显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,与FGAd相比,我们认为HDAd是一种更有价值的疫苗载体。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2010-04-01）
付远辉,何金生,石长信,洪涛[5]（2009）在《辅助病毒依赖型腺病毒载体研究进展》一文中研究指出辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd)缺乏所有腺病毒的编码序列,与非复制型的第一代腺病毒载体(first-generation adenoviral vector,FGAd)相比,具有载体免疫原性低、安全、转移容量大和持续表达等特点,现广泛用于遗传性疾病、神经退行性疾病和肿瘤等的基因治疗和特异性靶向治疗研究。本文综述了HDAd构建和应用等方面的研究进展及未来的发展方向。(本文来源于《微生物学报》期刊2009年02期）
杨兵,何金生,石长信,张梅,虞结梅[6]（2007）在《可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备》一文中研究指出构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,PmeⅠ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法。(本文来源于《微生物学报》期刊2007年04期）
杨兵[7]（2007）在《可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备》一文中研究指出目的人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，RSV)广泛流行于世界各地，是婴幼儿下呼吸道感染的最重要病原。目前尚无安全、有效的疫苗用于预防RSV感染。RSV两个重要的糖蛋白膜表面表达的融合蛋白F(fusion protein，F)和粘附蛋白G，是激发机体产生中和抗体的主要蛋白，也是疫苗研究发展的重要内容。与G蛋白相比，F蛋白有更多的抗原识别位点，不同亚型间F蛋白高度保守、同源性高达86％，能刺激机体产生体液免疫及细胞免疫应答，针对F的中和抗体具有交叉保护作用，是RSV疫苗研究的最重要的靶抗原。辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector，HDAd)主要用于基因治疗研究，作为疫苗载体的研究起步较晚，尚没有作为黏膜基因释放系统用于疫苗研究的报道。HDAd与腺病毒具有相同的细胞嗜性，对呼吸道上皮细胞具有高效感染的能力，且能长期、持续表达转基因，具有重要的研究与使用价值。本研究拟构建可表达A亚型RSV F蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体(HDAd／F)，并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定，为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11，鉴定正确后，克隆至HDAd质粒pSC15B，构建pSC15B／F HDAd重组质粒，PmeⅠ消化pSC15B／F去除原核复制元件及抗性基因，获得HDAd／F DNA分子，经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞，16 h后感染辅助病毒，收获HDAd／F载体粗提液，随后以HDAd／F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd／F达到复制极限，同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。大量制备HDAd／F，CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化，利用分子生物学技术体外鉴定HDAd／F表达情况。结果成功构建了可表达RSV F蛋白的HDAd／F载体，通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd／F载体，透射电镜观察显示HDAd的直径约为70 nm，具有典型的腺病毒形态，运用分光光度测定法分析表明纯化后HDAd载体颗粒浓度为：7.4×10~(12)(vp／ml)，体外感染293细胞，RT-PCR检测到F基因有转录，Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。结论成功构建HDAd／F载体并在真核细胞中实现表达，为体内免疫学效力试验奠定基础，为研制RSV疫苗提供了一种新方法。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2007-05-01）
姜志龙,卢健,陈诗书[8]（1998）在《一种辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及其在小鼠体内的应用》一文中研究指出腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点，但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白，并诱导机体的细胞和体液免疫反应，影响了目的基因在体内的稳定表达。为了克服这一缺点，构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体ＨＡｄＩ－ｈＦＶＩＩ。该载体去除了病毒基因组的ｌ３、Ｌ１、Ｌ２、ＶＡＩ－ＶＡＩ、ｐＴＰ等基因序列。在第一代重组病毒ＡｄＩ－ｈＦＶＩＩ辅助下，能在２９３细胞包装和扩增。经氯化铯梯度超速离心后，能与辅助病毒有效分离。小鼠体内研究表明，该载体能在体内高效转移和表达ｈＦＶＩＩ基因。与笫一代腺病毒载体比较，外源基因表达稳定性明显提高，提示该载体在体内具有较低的免疫原性。(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊1998年06期）
辅助病毒依赖型腺病毒载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：新型甲型H1N1流感病毒是威胁人类健康的重要新发传染病,虽然已有可用于该病毒预防和治疗的疫苗及药物,但现有的神经氨酸酶抑制剂类抗病毒药物和以传统方法制备的流感病毒裂解疫苗均存在一定的局限性。近期研究表明,以重组腺病毒制备流感疫苗具有明显的优越性。本研究以全基因合成的方法获得甲型H1N1流感病毒血凝素(Hemagglutinin, HA)基因,并以辅助病毒依赖型腺病毒(Helper-dependent adenoviral vector, HDAd)载体系统为基础,构建可表达HA的重组HDAd,为进一步的体内免疫效果和免疫保护作用研究奠定基础。方法：根据GenBank上登录的甲流H1N1流感病毒美国加利福尼亚毒株(A/California/07/2009(H1N1))基因序列,采用全基因合成的方法合成由1701个碱基组成的HA编码基因。经核酸序列分析证实后,将HA基因克隆至HDAd穿梭载体pSC11-CMV,经限制性内切酶分析后,进一步将含有HA基因的表达盒克隆至HDAd骨架质粒pSC15B,构建pSC15B/HA重组质粒,并以多组限制性内切酶进行分析鉴定。Pme I消化pSC15B/HA去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/HA DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/HA载体粗提液,随后以HDAd/HA粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/HA达到复制极限。随后,以HDAd/HA和辅助病毒感染293Cre4细胞大量制备HDAd/HA, CsCl密度梯度及等密度梯度两次超速离心纯化,利用透射电子显微镜观察病毒形态,分子生物学技术体外鉴定HDAd/HA表达情况。结果：成功构建了可表达甲流H1N1流感病毒HA蛋白的HDAd/HA载体,通过与辅助病毒共感染293Cre4细胞及CsCl梯度法超速离心制备了大量纯化的HDAd/HA载体,透射电子显微镜观察到腺病毒,体外感染293细胞,RT-PCR检测到HA基因有转录结论：应用HDAd系统,成功构建了HDAd/HA重组腺病毒,并完成了该病毒的大量制备和纯化,为体内免疫学效力试验奠定了初步基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
辅助病毒依赖型腺病毒载体论文参考文献
[1].张梅,江彦泽,陈念华,付远辉,乔伟.可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建[J].生物医学工程学杂志.2014
[2].江彦泽.可表达新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及初步鉴定[D].北京交通大学.2012
[3].郑娴娴,何金生,付远辉,徐少华,谢灿.辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率[J].生物工程学报.2010
[4].郑娴娴.辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率[D].安徽医科大学.2010
[5].付远辉,何金生,石长信,洪涛.辅助病毒依赖型腺病毒载体研究进展[J].微生物学报.2009
[6].杨兵,何金生,石长信,张梅,虞结梅.可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备[J].微生物学报.2007
[7].杨兵.可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白的辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备[D].安徽医科大学.2007
[8].姜志龙,卢健,陈诗书.一种辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及其在小鼠体内的应用[J].生物化学与生物物理学报.1998
标签：辅助病毒依赖型腺病毒载体; 甲型H1N1流感病毒; 血凝素;