导读:本文包含了内质网扩张论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:抗纤益心方,扩张型心肌病,心室功能,内质网应激
内质网扩张论文文献综述
柴松波,王振涛,张淑娟,刘舜禹[1]（2019）在《抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠内质网应激CHOP通路的影响》一文中研究指出目的:探究抗纤益心方对扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy, DCM)大鼠内质网应激C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)通路的影响。方法:采用呋喃唑酮水溶液制备DCM模型大鼠,将大鼠分为模型组、抗纤益心方20、40、80mg生药/kg、卡维地洛10mg/kg组,另设正常对照组,超声检测心室功能变化;右颈总动脉插管检测血流动力学变化;对比全心脏以及左心室心重指数(HW/BW、LVM/BW);HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化;Tunel染色观察心肌细胞凋亡情况;免疫印迹法检测大鼠心肌组织中钙网蛋白(CRT)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组心肌组织病理半定量评分、LVEDD、LVESD升高,LVEF、SV、FS降低,LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmix降低,HW/BM、LVW/BM升高;心肌细胞大量坏死,间质水肿、纤维化,伴有炎性细胞浸润;心肌细胞凋亡率显着升高;CRT、GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低。与模型组相比,抗纤益心方各组、卡维地洛组心肌组织病理半定量评分、LVEDD、LVESD显着降低,LVEF、SV、FS显着升高,+dp/dtmax、-dp/dtmix显着升高,LVEDP显着降低,HW/BM显着降低;心肌细胞坏死、纤维化程度减少,间质水肿、炎性细胞浸润均得到改善,心肌细胞凋亡率显着降低,GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高,抗纤益心方40、80mg/kg组、卡维地洛组LVDP显着升高,LVW/BM、CRT蛋白表达显着降低。结论:抗纤益心方能够改善DCM大鼠心室功能,缓解内质网应激引发的心肌细胞凋亡,其机制可能与下调CHOP通路相关。(本文来源于《中药药理与临床》期刊2019年02期）
卢磊[2]（2017）在《黄芪保心汤改善扩张型心肌病大鼠心室重构及抑制内质网应激凋亡的研究》一文中研究指出背景扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)是最常见的原发性心肌病,具有预后差,病死率高的特点,且发病逐年增长,严重威胁人类的健康。心室重构(Ventricular remodeling,VR)是引起DCM心力衰竭的主要病理基础,而抑制或逆转心室重构是DCM治疗的关键。心室重构机制复杂,与神经-体液调节、细胞凋亡、炎症因子等因素密切相关。细胞凋亡是心脏重构最重要的机制之一。它与心力衰竭的发生发展密切相关,抑制心肌细胞凋亡可以减轻心脏重构,改善心功能。近年来,在经典的线粒体途径和死亡受体凋亡途径以外,内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)通路的发现,为细胞凋亡提供了新的信号途径。研究认为通过抑制过度的ERS反应,可以减轻心肌细胞凋亡,并因此达到改善和逆转心室重构的目的。中医药对DCM有丰富的理论研究和治疗经验,具有多途径、多环节、多靶点、安全有效的治疗特点,为DCM的现代治疗提供新的方向。黄芪保心汤是张培影教授根据中医基础理论,结合多年临床经验研发的经验方,临床应用多年疗效显着。前期临床研究表明其可改善DCM患者心功能及预后,抑制患者心肌纤维化,并通过初步基础实验验证其抗心肌纤维化的作用机制。鉴于前期的临床及基础工作,设想黄芪保心汤能抑制神经内分泌系统激活,逆转DCM心室重构的发生,且其分子作用机制可能与其抑制ERS介导心肌细胞凋亡相关。因此本研究采用阿霉素造模建立DCM大鼠模型,探索黄芪保心汤抑制神经内分泌因子、改善DCM大鼠心室重构的作用,并从ERS介导的细胞凋亡途径入手,探讨黄芪保心汤改善DCM大鼠心室重构的分子机制。同时采用血清药理学和血清药理化学的方法,以大鼠为含药血清的供体,以体外原代培养的乳鼠心肌细胞作为研究的对象,通过给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导,建立心肌细胞凋亡模型,研究黄芪保心汤含药血清对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡及ERS相关凋亡蛋白的影响,从细胞层面探讨黄芪保心汤通过抑制ERS介导细胞凋亡达到抑制心室重构的分子机制。本研究分为以下四个部分:实验一:黄芪保心汤改善DCM大鼠心室重构作用的研究目的:验证黄芪保心汤抑制RAAS系统激活,改善DCM大鼠心室重构的作用方法:通过对90只SD大鼠腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg,每周1次,共8次)建立DCM模型,彩超验证后成模共计55只,随机分组给药如下:模型组(等量无菌水)、黄芪保心汤低、中、高剂量组(分别予5.67g、11.34g、22.68g生药/kg),卡托普利组(6.75 mg/kg),每组11只,每天灌胃给药1次,连续4周。另设正常对照组大鼠10只(等量无菌水灌胃)。4周后,超声心动图检测左室结构及功能变化;颈动脉插管检测血流动力学指标;观察心脏大体形态并称重测心重指数;通过HE染色、Masoon染色观察心肌组织形态学改变;ELISA法检测血清N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、基质裂解素2(ST2)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肾素活性(Renin)水平;考马斯亮兰法测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,脂质过氧化物丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD增高,EF、FS及SV值降低(P<0.01);LVDP、±dp/dtmax减低,LVEDP升高(P<0.01);心脏形态变大,心重指数增大(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,大量纤维组织增生;血NT-proBNP、ST2、Renin、AngⅡ、ALD水平均升高(P<0.01);SOD水平降低,MDA、LDH升高(P<0.01)。与模型组比较,黄芪保心汤低、中、高剂量组可不同程度地降低大鼠LVEDD、LVESD,升高 EF、FS、SV 值(P<0.05,P<0.01);升高 LVDP、±dp/dtmax,降低 LVEDP(P<0.05,P<0.01);降低HWI和LVMI(P<0.05,P<0.01);心肌细胞排列整齐,纤维组织增生减轻;使血 NT-proBNP、ST2、Renin、AngⅡ、ALD 水平不同程度下降(P<0.05,P<0.01);降低MDA和LDH,并升高SOD水平(P<0.05,P<0.01)。低、中、高剂量组呈一定的剂量-效应关系,高剂量组最优,结果与阳性药物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:黄芪保心汤可改善扩张型心肌病大鼠心脏扩大、纤维化增生及心功能,通过调控氧化因子、抑制RAAS系统神经内分泌因子激活,改善心功能,抑制心室重构。实验二:黄芪保心汤抑制DCM大鼠内质网应激细胞凋亡机制的研究目的:验证黄芪保心汤抑制DCM大鼠内质网应激细胞凋亡的作用机制。方法:本研究采用实验一中保存的各组组织标本,通过TUNEL染色,检测组织心肌细胞的凋亡水平,予免疫组化法和Western blotting法,检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平,并予Western blotting检测ERS分子伴侣GRP78及下游CHOP、Caspase-12凋亡通道蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组心肌细胞凋亡水平明显增加(P<0.01);组织中促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达增加,而抗凋亡因子Bcl-2降低(P<0.05);而心肌组织中GRP78、Caspase-12和CHOP的蛋白表达水平增加(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组黄芪保心汤可不同程度地降低心肌细胞凋亡水平(P<0.05.,P<0.01);但低剂量组对凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3无明显改善(P>0.05),中、高剂量组可明显降低促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达水平,升高抗凋亡因子Bcl-2的表达水平(P<0.05);低剂量组对心肌组织中的GRP78、Caspase-12和CHOP的蛋白表达水平无明显改善(P>0.05),中、高剂量组可不同程度降低心肌组织中ERS分子伴侣GRP78和Caspase-12、CHOP凋亡通道蛋白的表达(P<0.05),各剂量组结果呈一定的剂量-效应关系,高剂量组最优,结果与阳性药物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:阿霉素诱导DCM模型大鼠中存在ERS介导细胞凋亡的发生,而黄芪保心汤可能通过抑制ERS,降低分子伴侣GRP78的蛋白表达,抑制下游的Caspase-12和CHOP凋亡通路蛋白表达,而上调Bcl-2表达,下调Bax表达,同时下调Caspase-3蛋白表达而起到抑制心肌细胞凋亡作用。实验叁:黄芪保心汤含药血清对AngⅡ诱导内质网应激心肌细胞凋亡的影响目的:验证黄芪保心汤含药血清抑制AngⅡ诱导内质网应激心肌细胞凋亡的作用。方法:1.原代培养乳鼠心肌细胞及鉴定。对新生乳鼠进行体外心肌细胞的原代培养,予台盼兰活力检测,并予形态学及α-actin染色鉴定。2.建立AngⅡ诱导凋亡心肌细胞模型。予不同浓度AngⅡ、不同时间培养,并对培养后的心肌细胞TUNEL染色,检测出TUNEL染色中阳性细胞比例最高的实验条件,并以该条件卜的AngⅡ浓度和培养时间作为本实验最适浓度和最佳时间,进行造模。3.黄芪保心汤含药血清的制备方法及体系中血清添加量的确定。正常SD大鼠黄芪保心汤浓缩液灌胃给药,每日2次,连续给药7天,于末次给药后采血。无菌条件下分离血清,滤过后冻存。通过MTT法细胞活性检测确定体系中最佳空白血清添加量。HPLC法确定给药后最佳采血时间。SD大鼠灌胃,据末次给药后间隔时间分组取血,检测不同采血时间点含药血清的HPLC色谱图,以"归一化法"记录各时间点色谱峰的总面积,通过对不同采血时间点色谱图总面积的计算比较,最后确定最佳采血时间。4.黄芪保心汤含药血清的制备及分组。32只雄性SD大鼠,随机分成4组,每组8只。分别为空白血清组、低剂量含药血清组(28.25 g/kg)、中剂量含药血清组(56.5 g/kg)及高剂量含药血清组(113 g/kg)。各给药组按照相应剂量分别灌胃给药,空白对照组给予相同体积的无菌水,连续7天,每天2次。在末次给药后60 min,对大鼠进行下腔静脉采血,无菌制备空白血清及黄芪保心汤低、中、高剂量组含药血清。5.体外原代培养并鉴定的心肌细胞,分7组分别为:正常对照组、空白血清组、AngⅡ组、低、中、高剂量含药血清组和卡托普利组,后5组予上条件下AngⅡ诱导的凋亡心肌细胞。上7组培养24 h后,采用Annexin V-FITC/PI凋亡流式检测各组细胞凋亡水平,并通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bc1-2、Bax及Caspase-3的表达水平,同时予Western blotting法检测ERS分子伴侣GRP78、相关凋亡通道蛋白Caspase-12和CHOP等的蛋白表达。结果:1.心肌细胞培养成功,台盼兰染色法检测细胞活力≥90%,α-actin染色鉴定显示心肌细胞阳性率≥95%。本实验AngⅡ造模最佳浓度为10-7 mol/L,最佳时间为24 h。TUNEL示凋亡比例最高。2.体系中加入血清的最佳比例为20%,该条件下血清对乳鼠心肌细胞正常活性基本无明显影响。HPLC法确定按人临床用药等效剂量的5倍,每日两次、连续7天灌胃给药,于末次给药60 min时采血所得的含药血清中成分的总峰面积最大。3.与正常对照组比较,空白血清组心肌细胞凋亡水平、Bcl-2、Bax、Caspase-3、GRP78、Caspase-12和CHOP变化均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ组心肌细胞凋亡水平明显增加(P<0.01);促凋亡因子Bax和Caspase-3蛋白表达增加,抗凋亡因子Bcl-2降低(P<0.05);ERS相关凋亡因子GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白表达增加(P<0.05)。与AngⅡ组相比,低、中、高剂量组含药血清可不同程度降低细胞凋亡水平(P<0.01);但低剂量组对 Bcl-2、Bax、Caspase-3、GRP78、Caspase-12 和 CHOP 的蛋白表达水平无明显改善(P>0.05),而中、高剂量组可明显降低促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达,上调抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达(P<0.05);降低GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白表达水平(P<0.05)。上述作用呈一定的剂量依赖性,高剂量组与阳性药物卡托普利组无统计学差异。(P>0.05)结论:AngⅡ可诱导ERS介导细胞凋亡的发生,而黄芪保心汤可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡。其机制可能是通过抑制ERS,降低分子伴侣GRP78表达水平,抑制下游的Caspase-12和CHOP凋亡通路,进而上调Bcl-2表达水平,降低Bax、Caspase-3的蛋白表达而起到抑制心肌细胞凋亡作用。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2017-03-20）
陈少青,王伊林,曹宪玉,张青山,柴花[3]（2016）在《蒙药新Ⅱ号对扩张型心肌病大鼠心功能、心肌细胞内质网应激及凋亡的作用》一文中研究指出目的:探讨蒙药新II号对阿霉素性扩张型心肌病大鼠心功能、心肌病理、心肌细胞内质网应激及凋亡作用。方法:30只SD雄性大鼠分为3组(n=10):正常对照组、模型组(腹腔注射阿霉素2 mg/kg体重,1次/周,用药4周后观察4周)和蒙药新II号组(腹腔注射阿霉素2 mg/kg体重,1次/周,用药4周后,给予蒙药新II号30 mg/kg·d灌胃,共4周)。观察大鼠的一般情况,8周后行高频超声心动图检查,测定各项心功能指标,检查结束后处死大鼠,取心脏,行HE染色、VG染色及电镜观察。用TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡,Western blot检测各组大鼠心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78、GRP94及促凋亡因子CHOP、caspase-3表达。结果:与模型组相比较,1蒙药新II号组大鼠心脏左室结构及血流动力学各项指标均有明显改善(P<0.05)。2蒙药新II号组大鼠心肌病理积分明显下降(P<0.01)。3蒙药新II号组大鼠心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94、CHOP、caspase-3表达及细胞凋亡明显减少(P<0.01)。结论:蒙药新II号可改善扩张型心肌病大鼠心脏功能,减轻心肌病理变化,缓解内质网应激,减少心肌细胞凋亡。这一实验结果可能是蒙药新II号治疗扩张型心肌病作用机制之一。(本文来源于《中国应用生理学杂志》期刊2016年05期）
[4]（2012）在《外国专家修饰的医学英语句型:“嵴减少或消失呈空泡状，粗面内质网池样扩张，高尔基体扁平囊扩张”》一文中研究指出(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年20期）
内质网扩张论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy,DCM)是最常见的原发性心肌病,具有预后差,病死率高的特点,且发病逐年增长,严重威胁人类的健康。心室重构(Ventricular remodeling,VR)是引起DCM心力衰竭的主要病理基础,而抑制或逆转心室重构是DCM治疗的关键。心室重构机制复杂,与神经-体液调节、细胞凋亡、炎症因子等因素密切相关。细胞凋亡是心脏重构最重要的机制之一。它与心力衰竭的发生发展密切相关,抑制心肌细胞凋亡可以减轻心脏重构,改善心功能。近年来,在经典的线粒体途径和死亡受体凋亡途径以外,内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)通路的发现,为细胞凋亡提供了新的信号途径。研究认为通过抑制过度的ERS反应,可以减轻心肌细胞凋亡,并因此达到改善和逆转心室重构的目的。中医药对DCM有丰富的理论研究和治疗经验,具有多途径、多环节、多靶点、安全有效的治疗特点,为DCM的现代治疗提供新的方向。黄芪保心汤是张培影教授根据中医基础理论,结合多年临床经验研发的经验方,临床应用多年疗效显着。前期临床研究表明其可改善DCM患者心功能及预后,抑制患者心肌纤维化,并通过初步基础实验验证其抗心肌纤维化的作用机制。鉴于前期的临床及基础工作,设想黄芪保心汤能抑制神经内分泌系统激活,逆转DCM心室重构的发生,且其分子作用机制可能与其抑制ERS介导心肌细胞凋亡相关。因此本研究采用阿霉素造模建立DCM大鼠模型,探索黄芪保心汤抑制神经内分泌因子、改善DCM大鼠心室重构的作用,并从ERS介导的细胞凋亡途径入手,探讨黄芪保心汤改善DCM大鼠心室重构的分子机制。同时采用血清药理学和血清药理化学的方法,以大鼠为含药血清的供体,以体外原代培养的乳鼠心肌细胞作为研究的对象,通过给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导,建立心肌细胞凋亡模型,研究黄芪保心汤含药血清对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡及ERS相关凋亡蛋白的影响,从细胞层面探讨黄芪保心汤通过抑制ERS介导细胞凋亡达到抑制心室重构的分子机制。本研究分为以下四个部分:实验一:黄芪保心汤改善DCM大鼠心室重构作用的研究目的:验证黄芪保心汤抑制RAAS系统激活,改善DCM大鼠心室重构的作用方法:通过对90只SD大鼠腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg,每周1次,共8次)建立DCM模型,彩超验证后成模共计55只,随机分组给药如下:模型组(等量无菌水)、黄芪保心汤低、中、高剂量组(分别予5.67g、11.34g、22.68g生药/kg),卡托普利组(6.75 mg/kg),每组11只,每天灌胃给药1次,连续4周。另设正常对照组大鼠10只(等量无菌水灌胃)。4周后,超声心动图检测左室结构及功能变化;颈动脉插管检测血流动力学指标;观察心脏大体形态并称重测心重指数;通过HE染色、Masoon染色观察心肌组织形态学改变;ELISA法检测血清N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、基质裂解素2(ST2)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肾素活性(Renin)水平;考马斯亮兰法测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,脂质过氧化物丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD增高,EF、FS及SV值降低(P<0.01);LVDP、±dp/dtmax减低,LVEDP升高(P<0.01);心脏形态变大,心重指数增大(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,大量纤维组织增生;血NT-proBNP、ST2、Renin、AngⅡ、ALD水平均升高(P<0.01);SOD水平降低,MDA、LDH升高(P<0.01)。与模型组比较,黄芪保心汤低、中、高剂量组可不同程度地降低大鼠LVEDD、LVESD,升高 EF、FS、SV 值(P<0.05,P<0.01);升高 LVDP、±dp/dtmax,降低 LVEDP(P<0.05,P<0.01);降低HWI和LVMI(P<0.05,P<0.01);心肌细胞排列整齐,纤维组织增生减轻;使血 NT-proBNP、ST2、Renin、AngⅡ、ALD 水平不同程度下降(P<0.05,P<0.01);降低MDA和LDH,并升高SOD水平(P<0.05,P<0.01)。低、中、高剂量组呈一定的剂量-效应关系,高剂量组最优,结果与阳性药物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:黄芪保心汤可改善扩张型心肌病大鼠心脏扩大、纤维化增生及心功能,通过调控氧化因子、抑制RAAS系统神经内分泌因子激活,改善心功能,抑制心室重构。实验二:黄芪保心汤抑制DCM大鼠内质网应激细胞凋亡机制的研究目的:验证黄芪保心汤抑制DCM大鼠内质网应激细胞凋亡的作用机制。方法:本研究采用实验一中保存的各组组织标本,通过TUNEL染色,检测组织心肌细胞的凋亡水平,予免疫组化法和Western blotting法,检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平,并予Western blotting检测ERS分子伴侣GRP78及下游CHOP、Caspase-12凋亡通道蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组心肌细胞凋亡水平明显增加(P<0.01);组织中促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达增加,而抗凋亡因子Bcl-2降低(P<0.05);而心肌组织中GRP78、Caspase-12和CHOP的蛋白表达水平增加(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组黄芪保心汤可不同程度地降低心肌细胞凋亡水平(P<0.05.,P<0.01);但低剂量组对凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Caspase-3无明显改善(P>0.05),中、高剂量组可明显降低促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达水平,升高抗凋亡因子Bcl-2的表达水平(P<0.05);低剂量组对心肌组织中的GRP78、Caspase-12和CHOP的蛋白表达水平无明显改善(P>0.05),中、高剂量组可不同程度降低心肌组织中ERS分子伴侣GRP78和Caspase-12、CHOP凋亡通道蛋白的表达(P<0.05),各剂量组结果呈一定的剂量-效应关系,高剂量组最优,结果与阳性药物组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:阿霉素诱导DCM模型大鼠中存在ERS介导细胞凋亡的发生,而黄芪保心汤可能通过抑制ERS,降低分子伴侣GRP78的蛋白表达,抑制下游的Caspase-12和CHOP凋亡通路蛋白表达,而上调Bcl-2表达,下调Bax表达,同时下调Caspase-3蛋白表达而起到抑制心肌细胞凋亡作用。实验叁:黄芪保心汤含药血清对AngⅡ诱导内质网应激心肌细胞凋亡的影响目的:验证黄芪保心汤含药血清抑制AngⅡ诱导内质网应激心肌细胞凋亡的作用。方法:1.原代培养乳鼠心肌细胞及鉴定。对新生乳鼠进行体外心肌细胞的原代培养,予台盼兰活力检测,并予形态学及α-actin染色鉴定。2.建立AngⅡ诱导凋亡心肌细胞模型。予不同浓度AngⅡ、不同时间培养,并对培养后的心肌细胞TUNEL染色,检测出TUNEL染色中阳性细胞比例最高的实验条件,并以该条件卜的AngⅡ浓度和培养时间作为本实验最适浓度和最佳时间,进行造模。3.黄芪保心汤含药血清的制备方法及体系中血清添加量的确定。正常SD大鼠黄芪保心汤浓缩液灌胃给药,每日2次,连续给药7天,于末次给药后采血。无菌条件下分离血清,滤过后冻存。通过MTT法细胞活性检测确定体系中最佳空白血清添加量。HPLC法确定给药后最佳采血时间。SD大鼠灌胃,据末次给药后间隔时间分组取血,检测不同采血时间点含药血清的HPLC色谱图,以"归一化法"记录各时间点色谱峰的总面积,通过对不同采血时间点色谱图总面积的计算比较,最后确定最佳采血时间。4.黄芪保心汤含药血清的制备及分组。32只雄性SD大鼠,随机分成4组,每组8只。分别为空白血清组、低剂量含药血清组(28.25 g/kg)、中剂量含药血清组(56.5 g/kg)及高剂量含药血清组(113 g/kg)。各给药组按照相应剂量分别灌胃给药,空白对照组给予相同体积的无菌水,连续7天,每天2次。在末次给药后60 min,对大鼠进行下腔静脉采血,无菌制备空白血清及黄芪保心汤低、中、高剂量组含药血清。5.体外原代培养并鉴定的心肌细胞,分7组分别为:正常对照组、空白血清组、AngⅡ组、低、中、高剂量含药血清组和卡托普利组,后5组予上条件下AngⅡ诱导的凋亡心肌细胞。上7组培养24 h后,采用Annexin V-FITC/PI凋亡流式检测各组细胞凋亡水平,并通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bc1-2、Bax及Caspase-3的表达水平,同时予Western blotting法检测ERS分子伴侣GRP78、相关凋亡通道蛋白Caspase-12和CHOP等的蛋白表达。结果:1.心肌细胞培养成功,台盼兰染色法检测细胞活力≥90%,α-actin染色鉴定显示心肌细胞阳性率≥95%。本实验AngⅡ造模最佳浓度为10-7 mol/L,最佳时间为24 h。TUNEL示凋亡比例最高。2.体系中加入血清的最佳比例为20%,该条件下血清对乳鼠心肌细胞正常活性基本无明显影响。HPLC法确定按人临床用药等效剂量的5倍,每日两次、连续7天灌胃给药,于末次给药60 min时采血所得的含药血清中成分的总峰面积最大。3.与正常对照组比较,空白血清组心肌细胞凋亡水平、Bcl-2、Bax、Caspase-3、GRP78、Caspase-12和CHOP变化均无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,AngⅡ组心肌细胞凋亡水平明显增加(P<0.01);促凋亡因子Bax和Caspase-3蛋白表达增加,抗凋亡因子Bcl-2降低(P<0.05);ERS相关凋亡因子GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白表达增加(P<0.05)。与AngⅡ组相比,低、中、高剂量组含药血清可不同程度降低细胞凋亡水平(P<0.01);但低剂量组对 Bcl-2、Bax、Caspase-3、GRP78、Caspase-12 和 CHOP 的蛋白表达水平无明显改善(P>0.05),而中、高剂量组可明显降低促凋亡因子Bax和Caspase-3的蛋白表达,上调抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表达(P<0.05);降低GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白表达水平(P<0.05)。上述作用呈一定的剂量依赖性,高剂量组与阳性药物卡托普利组无统计学差异。(P>0.05)结论:AngⅡ可诱导ERS介导细胞凋亡的发生,而黄芪保心汤可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡。其机制可能是通过抑制ERS,降低分子伴侣GRP78表达水平,抑制下游的Caspase-12和CHOP凋亡通路,进而上调Bcl-2表达水平,降低Bax、Caspase-3的蛋白表达而起到抑制心肌细胞凋亡作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内质网扩张论文参考文献
[1].柴松波,王振涛,张淑娟,刘舜禹.抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠内质网应激CHOP通路的影响[J].中药药理与临床.2019
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