苜蓿中华根瘤菌共生固氮相关基因突变体的分离和鉴定

论文摘要

为了阐明豆科植物共生反应与免疫反应的协调机制,揭示参与植物细胞侵染、定殖及固氮过程中根瘤菌基因的功能,以苜蓿中华根瘤菌Sm2011为材料,构建了约8 000株Tn5-sacB转座子插入的突变体库。利用巢式PCR检测技术,从中鉴定和筛选出nodC、nifH、smc01188和smc04024等4个特定目标基因的插入突变体及其插入位点。通过结瘤试验考察突变体共生及固氮表型,结果显示:植株接种smc01188突变体28d后,与对照植株相比,该基因突变导致根瘤固氮酶活下降,与慢生型大豆根瘤菌该基因突变体的表型类似;smc04024基因突变不影响植株生长,根瘤发育基本正常;接种nifH突变体后,植株呈缺氮表型,生长发育受阻,根瘤为白色;接种nodC突变体后植株不结瘤,说明Tn5-SacB的插入导致nifH、nodC基因功能丧失。利用PCR检测、鉴定和分离目标基因突变体是一种行之有效的方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 植物、菌株和质粒
•   1.2 培养基
•   1.3 突变体库的构建及检测
•   1.4 目标基因突变体的鉴定
•   1.5 根瘤菌突变体表型的鉴定
• 2 结果与分析
•   2.1 苜蓿中华根瘤菌突变体库的制备及贮存
•   2.2 苜蓿中华根瘤菌特定目标基因突变体筛选及插入位点的鉴定
•   2.3 苜蓿中华根瘤菌肽聚糖合成相关基因突变体的表型
•   2.4 苜蓿中华根瘤菌nifH和nodC基因突变体的表型
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张晴,余海翔,张忠明

关键词: 苜蓿中华根瘤菌,共生固氮,转座子,插入突变体

来源: 华中农业大学学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31670240)

分类号: Q939.114

DOI: 10.13300/j.cnki.hnlkxb.2019.01.007

页码: 43-49

总页数: 7

文件大小: 2551K

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