导读:本文包含了表达型载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,基因,莱姆,细胞,杆菌,逆转录,质体。
表达型载体论文文献综述
郭晓虹[1]（2019）在《节杆菌ADH基因敲除及诱导表达型载体的构建》一文中研究指出节杆菌(Arthrobacter sp.)是一类广泛存在于土壤中高GC含量的放线菌,它具有极强的环境适应性,能以多种环境污染物作为唯一碳源或氮源,从而降解该环境污染物。随着全基因组测序技术和分子生物学技术的发展,从分子水平探究节杆菌降解环境污染物的机制已经成为关注热点。基因编辑作为一种基因功能的研究手段,在微生物研究中发挥了巨大作用。目前,节杆菌的基因编辑技术还不完善,存在很大的局限性,使其无法在科研工作中广泛使用。本研究所用的节杆菌HW08是由本实验室从埋有黄花棘豆的土壤中分离得到的革兰氏阳性细菌,具有高效降解苦马豆素(SW)能力。本研究首先利用自杀性质粒pK18mobsacB构建节杆菌HW08基因敲除载体,对与节杆菌HW08降解SW相关的NADP依赖型乙醇脱氢酶(ADH)基因进行基因敲除。然后,本研究利用重迭PCR和定点突变等技术将穿梭质粒pART2改造为一个诱导表达型载体pARTP,为构建节杆菌HW08 CRISPR-Cas9基因敲除体系提供载体骨架。获得研究结果如下:1.对ADH蛋白进行了生物信息学分析ADH的生物信息学分析表明该酶是一个分子量为36.638 kDa稳定的酸性非分泌蛋白并且含有烯酰还原酶结构域、ADHs催化结构域、C-末端、锌原子的保守结合结构域和NAD(P)辅因子的结合结构域。NADP与ADH的氨基酸残基His42,Ser43,His63,Thr162,Gly184,Gly185,Ser246和Arg338形成氢键;SW与ADH的氨基酸残基Arg24,His133和Val135形成氢键。2.构建了pK18mobsacB-ΔADH载体利用同源重组的方法构建了以自杀性质粒pK18mobsacB为骨架的节杆菌HW08基因敲除载体。根据节杆菌HW08 ADH基因的上下游DNA序列设计同源臂序列并进行PCR扩增,构建了敲除载体pK18mobsacB-ΔADH。3.ADH基因缺失株筛选采用电击转化的方式将敲除载体转入节杆菌HW08感受态细胞中,利用pK18mobsacB载体的特性筛选ADH基因缺失株,通过验证引物PCR鉴定转化子且测序进一步验证,最终获得ADH基因缺失株。4.构建了诱导表达型载体pARTP为了获得构建节杆菌HW08 CRISPR-Cas9基因敲除体系的载体。采用重迭PCR和定点突变等技术将穿梭载体pART2改造为一个组成型表达载体pARTF,其次,在pARTF载体的基础上添加乳糖操纵子基因(laclq)构建了诱导表达型载体pARTP。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
卢卓强,晋学庆[2]（2010）在《小鼠血管紧张素转化酶2基因表达型载体的构建及体外表达》一文中研究指出背景:通过转基因疗法使血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme,ACE2)过度表达来治疗心血管病是当前ACE2研究的趋势,而构建含ACE2基因的载体则能为该研究方法提供工具。目的:构建含小鼠血管紧张素转化酶2基因的真核表达载体,并验证其蛋白的表达。方法:采用RT-PCR的方法从C57小鼠肾脏扩增出ACE2基因全长cDNA序列,并通过酶切连接和转化等分子生物学方法将其定向克隆至载体pcDNA3.1/Hygro(+)上,构建小鼠ACE2基因的真核表达载体pm-ACE2,并通过酶切及测序鉴定。通过脂质体转染法将所构建的pm-ACE2转染COS7细胞,并利用Western blot检测COS7细胞中ACE2蛋白的表达。结果与结论:通过测序并与GeneBank上的小鼠血管紧张素转化酶2序列(NM_027286.3)比对,证实实验成功克隆小鼠ACE2基因全长cDNA至载体pcDNA3.1/Hygro(+)上,测序结果提示存在3处同义突变;所构建的pm-ACE2在真核细胞中具有ACE2蛋白的表达。结果提示实验成功构建了小鼠ACE2基因真核表达载体,此载体具有表达ACE2蛋白的功能。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年46期）
范志强,徐勇,王春雨,关勇,孙建涛[3]（2006）在《人Hepsin基因表达型载体的构建及鉴定》一文中研究指出应用RT-PCR方法从人前列腺癌细胞系LN caP中克隆H eps in基因全编码序列,并将其克隆入pIRES2-EGFP表达型质粒,应用酶切和测序方法对重组质粒进行鉴定。结果成功克隆人H eps in基因cDNA序列并构建了重组表达载体。认为含人H eps in基因表达型载体的构建为H eps in基因在前列腺癌中的功能研究提供了实验基础。(本文来源于《山东医药》期刊2006年15期）
顾红祥[4]（2003）在《凋亡素基因表达型载体的构建》一文中研究指出凋亡素是来源于鸡贫血病毒vp3基因的一个功能蛋白 ,它具有特异性诱导肿瘤 /转化细胞凋亡的特点。凋亡素基因载体的构建是凋亡素分子生物学特点研究及其在肿瘤基因治疗方面应用的基础 ,本文对凋亡素基因表达型载体的构建进展作一综述。(本文来源于《国外医学.临床生物化学与检验学分册》期刊2003年02期）
鲍朗,谢勇恩[5]（1999）在《莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建》一文中研究指出从莱姆病螺旋体染色体编码８３ｋｄ抗原蛋白（Ｐ８３）基因序列中选择编码近Ｃ端１５９个氨基酸的基因序列作为扩增的靶序列，自行设计并合成一对寡核苷酸引物，以莱姆病螺旋体Ｂ３１株基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约４７７ｂｐ的扩增片段，再把该片段与质粒载体ｐＢＫ－ＣＭＶ进行重组，经鉴定得到重组质粒ｐＢＸ１。重组质粒ｐＢＸ１可同时在真核和原核细胞中表达，其表达产物可用来制备莱姆病血清学诊断用的标准抗原；该重组质粒也可用来制备用于对莱姆病螺旋体进行分类鉴定的核酸探针。(本文来源于《华西医科大学学报》期刊1999年01期）
何笑松,沈仁权,盛祖嘉[6]（1990）在《嗜热脂肪芽孢杆菌启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11的构建》一文中研究指出以pPL703的衍生质粒pPGV5为载体,从嗜热脂肪芽孢杆菌CU21总DNA的Sau 3A酶切产物中得到1个0.54kb的启动子片段,它能促进载体上的无启动子的cat-86基因在嗜热脂肪芽孢杆菌及枯草芽孢杆菌中表达。这一片段以正、反向插入pPGV5载体,都能使重组质粒转化CU21原生质体的效率提高10~(?)至10(?)倍。Southern杂交实验表明,这一启动子片段与Imanaka等报道的来自CU21中的隐蔽性质粒pBS02的能提高转化效率的1.6kb Eco RI片段是同源的。利用所得到的0.54kb Sau 3A片段构建了新的启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11,二者都能以很高的效率转化CU21原生质体。(本文来源于《遗传学报》期刊1990年04期）
表达型载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:通过转基因疗法使血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme,ACE2)过度表达来治疗心血管病是当前ACE2研究的趋势,而构建含ACE2基因的载体则能为该研究方法提供工具。目的:构建含小鼠血管紧张素转化酶2基因的真核表达载体,并验证其蛋白的表达。方法:采用RT-PCR的方法从C57小鼠肾脏扩增出ACE2基因全长cDNA序列,并通过酶切连接和转化等分子生物学方法将其定向克隆至载体pcDNA3.1/Hygro(+)上,构建小鼠ACE2基因的真核表达载体pm-ACE2,并通过酶切及测序鉴定。通过脂质体转染法将所构建的pm-ACE2转染COS7细胞,并利用Western blot检测COS7细胞中ACE2蛋白的表达。结果与结论:通过测序并与GeneBank上的小鼠血管紧张素转化酶2序列(NM_027286.3)比对,证实实验成功克隆小鼠ACE2基因全长cDNA至载体pcDNA3.1/Hygro(+)上,测序结果提示存在3处同义突变;所构建的pm-ACE2在真核细胞中具有ACE2蛋白的表达。结果提示实验成功构建了小鼠ACE2基因真核表达载体,此载体具有表达ACE2蛋白的功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达型载体论文参考文献
[1].郭晓虹.节杆菌ADH基因敲除及诱导表达型载体的构建[D].西北农林科技大学.2019
[2].卢卓强,晋学庆.小鼠血管紧张素转化酶2基因表达型载体的构建及体外表达[J].中国组织工程研究与临床康复.2010
[3].范志强,徐勇,王春雨,关勇,孙建涛.人Hepsin基因表达型载体的构建及鉴定[J].山东医药.2006
[4].顾红祥.凋亡素基因表达型载体的构建[J].国外医学.临床生物化学与检验学分册.2003
[5].鲍朗,谢勇恩.莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白基因特异性区段真核及原核表达型载体的构建[J].华西医科大学学报.1999
[6].何笑松,沈仁权,盛祖嘉.嗜热脂肪芽孢杆菌启动子克隆载体pFDC4和表达型载体pFDC11的构建[J].遗传学报.1990
论文知识图
