猪繁殖与呼吸综合征病毒微流控生物芯片的敏感性与特异性检测

论文摘要

[目的]猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是临床上引起猪繁殖障碍类疾病的常见病毒,表现为繁殖障碍以及母猪流产等特征。该病毒传播迅速,对各个年龄段的猪均有影响。近年来,随着中国养猪业规模化、集约化发展,猪病的发生和流行对养猪生产的危害日趋加重,给养殖业造成了极大的经济损失。病毒传统检测方法存在操作繁杂、耗时长、单次检测只能输出一种检测指标等缺点,因此建立一种快速高效的检测方法是及时止损的关键。微流控生物芯片技术是将LAMP技术与微流控生物芯片相结合,通过对敏感性、特异性等方面的探索,建立微流控生物芯片检测技术,为微流控生物芯片的进一步研发奠定实验数据基础。[方法]增殖大量PRRSV变异株与经典株,使用PRRSV特异性引物,通过常规PCR、测序比对、荧光定量PCR等技术对两种毒株进行检测与定量,使用该毒株感染SPF猪,剖杀并采集样品。通过筛选国家标准检测方法,最终选择RT-PCR方法与芯片检测方法对照,并对采集的样品进行检测以制备标准品;通过对PRRSV基因序列的对比与检测,选择最适引物应用于微流控生物芯片;将两种标准毒株的核酸进行梯度稀释,使用生物芯片进行检测;提取猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎病毒核酸,使用生物芯片进行检测。[结果]电泳结果显示,目的条带与预期一致,测序比对结果达98%,病毒扩增成功;荧光定量PCR结果显示,PRRSV变株拷贝数为1×106copies/μL;PRRSV经典株拷贝数为1×106.6copies/μL;通过筛选国家标准方法,最终选择RT-PCR方法作为对照,并使用该方法对采集的样品进行检测,制备出阳性、阴性标准品共计30个;病毒核酸梯度稀释检测结果显示,芯片可检测最低浓度为103copies/μL;所制生物芯片检测PRRSV野毒株、疫苗株及其他猪RNA病毒,结果显示该微流控生物芯片可区分PRRSV经典株、变异株及疫苗株,而对其他猪RNA病毒检测时无扩增曲线产生,表明芯片特异性良好。[结论]本试验中所建立的微流控生物芯片的敏感性为103copies/μL,可以区分PRRSV变异株、经典株以及疫苗株,且特异性强,可避免对其他猪RNA病毒检测造成误检。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 孙彤,侯晓林

关键词: 微流控生物芯片,猪繁殖与呼吸综合征病毒

来源: 中国畜牧兽医学会兽医食品卫生学分会第十五次学术交流会 2019-12-12

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 北京农学院动物科学技术学院

分类号: S852.651

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.033689

页码: 71

总页数: 1

文件大小: 62k

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标签：微流控生物芯片论文;  猪繁殖与呼吸综合征病毒论文;