猪链球菌2型05ZYH33菌株具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶活性蛋白的鉴定及功能研究

论文摘要

为了研究猪链球菌2型（SS2） 05ZYH33菌株是否具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAG）及同工酶,本研究通过同源蛋白比对,发现05ZYH33菌株表面蛋白SSU050630 C端Ss GH20结构域与肺炎链球菌（S.pneumoniae）的NAG Str H的GH20-1结构域具有60%的同源性;经基因克隆、蛋白表达及纯化后的酶活性分析表明Ss GH20具有NAG活性,且其活力为371 U/mg蛋白;其最适反应温度为50℃、最适p H为5.5;其Km值为0.69。通过构建SS2 ssu050630基因缺失株及全菌酶活性测定,显示SS2 05ZYH33菌株具有NAG活性,而ssu050630基因缺失后的菌株则失去了NAG活性,表明SSU050630是SS2 05ZYH33菌株唯一具有NAG活性的蛋白。本研究为进一步探究Ss GH20在SS2致病中的作用及SS2逃避宿主免疫反应的机制奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要实验材料
•   1.2 SS2 05ZYH33全基因组推导氨基酸的序列分析、信息肽及引物的设计与合成
•   1.3 SS2 05ZYH33表面蛋白SSU05＿0630 C端Ss GH20结构域基因的克隆、表达和纯化
•   1.4 ss GH20 NAG活性的测定
•   1.5 SS2 05ZYH33 ssu05＿0630基因缺失株ssu05＿0630Δ的构建
•   1.6 SS2 05ZYH33和ssu05＿0630Δ菌株的生长特性及全菌NAG活性测定
• 2 结果
•   2.1 SS2 05ZYH33菌株中与StrH同源的蛋白氨基酸序列分析
•   2.2 Ss GH20结构域基因的克隆、表达和纯化
•   2.3 Ss GH20结构域的NAG活性的测定
•   2.4 SS2 05ZYH33 ssu05＿0630基因缺失株ssu05＿0630Δ的构建
•   2.5 SS2 05ZYH33和ssu05＿0630Δ菌株生长特性分析
•   2.6 SS2 05ZYH33和ssu05＿0630Δ菌株NAG活性的测定结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈平,刘冉,黄萌萌,朱金鲁,谢芳,倪宏波,刘思国,张跃灵

关键词: 猪链球菌型,乙酰氨基葡萄糖苷酶,基因缺失,同工酶

来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病创新团队

基金: 国家重点研发计划(2017YFD0500203),国家自然科学基金(31772757,31500112),黑龙江省自然科学基金(C2017075)

分类号: S852.611

页码: 462-467

总页数: 6

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