Ⅲ型登革病毒在C6/36及Vero细胞中复制对其毒力的影响

论文摘要

目的探讨Ⅲ型登革病毒（dengue virus,DENV）在C6/36和Vero细胞中复制对其毒力的影响。方法将DV3-1及DV3-2两株Ⅲ型DENV在C6/36细胞上接种传代培养,待其毒力稳定再接种至Vero细胞连续传代培养。用Ⅲ型DENV标准质粒检测不同代次病毒拷贝数,PCR扩增获得传代毒种全长基因序列,并与原代病毒基因序列进行比对。结果 DV3-1在C6/36细胞上传代至第17代次（P17-C6/36）时毒力保持稳定,DV3-2在盲传过程中均未见明显的细胞病变;将DV3-1和DV3-2第17代次病毒在Vero细胞上继续传代,DV3-1传至第10代次（P10-Vero）CPE为40%,DV3-2传至第4代次CPE达30%。DV3-1在P17-C6/36时具有较高的病毒拷贝数,在P0（原代病毒）及P10-Vero时病毒拷贝数偏低。与P0比较,P17-C6/36及P10-Vero全长碱基共16处发生突变,导致12个氨基酸的非同义突变,其中P0和P10-Vero在第5 826、6 251、7 907位点碱基相同,P17-C6/36相应的氨基酸位点（第1 942、2 084、2 636位点）均发生非同义突变。结论传代细胞更换可对Ⅲ型DENV的毒力造成影响,多次传代及更换细胞传代后仍可能发生回复突变。本研究为后续DENV减毒策略的研究提供了实验依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒、细胞及毒种
•   1.2 主要试剂
•   1.3 Ⅲ型DENV的培养
•   1.4 标准曲线的建立
•   1.5 病毒液拷贝数的检测
•   1.6 传代毒种的全基因测序鉴定
•   1.7 Ⅲ型DENV基因全长突变分析
• 2 结果
•   2.1 Ⅲ型DENV的接种培养
•   2.2 标准曲线的绘制
•   2.3 病毒液的拷贝数
•   2.4 Ⅲ型DENV基因全长突变分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 林垚,洪珊,王晓丹,陈俊英,潘玥,孙强明

关键词: 型登革病毒,细胞,毒力

来源: 中国生物制品学杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

基金: 国家十二五重大新药创新科技重大专项(2012ZX09104302),国家自然科学基金面上项目(81171946),云南省科技厅应用基础重点项目(2016FA029),云南省科技厅联合支持国家科技计划项目(2013GA018),中国医学科学院创新工程项目(2016-I2M-1-19),云南自然科学基金项目(2012FB188)

分类号: R373.33

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002826

页码: 1070-1073+1079

总页数: 5

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