导读:本文包含了噬菌体表面展示文库论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小鼠,神经元,细菌噬菌体T7,基因文库
噬菌体表面展示文库论文文献综述
张磊升,高巍,赵魁,贺文琦,宋德光[1]（2011）在《小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库的构建》一文中研究指出目的构建小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。方法用Trizol试剂提取原代小鼠神经细胞总RNA,分离、纯化mRNA,经反转录合成其双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,用内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,以形成两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端的双链cDNA。经Mini Column进行纯化,收集大小在300 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于含有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体上,体外包装后经BLT5403菌株增殖,进行文库扩增。结果所构建的文库库容量为含有3.04×107个重组子,原始滴度为2.8×107 pfu/ml,重组率为92%,扩增后文库滴度为3.5×1010 pfu/ml。对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,88%的插入片段大于300 bp。结论 成功构建了小鼠神经细胞cDNA T7噬菌体表面展示文库。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2011年09期）
苏林,孔燕,刘长征,杨克恭,陈松森[2]（2011）在《噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽》一文中研究指出目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊2011年04期）
张林,刘杞,孙航[3]（2005）在《利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库》一文中研究指出目的:筛选对人肝再生增强因子(hALR)高反应性的肝癌细胞株,以此作为细胞来源,利用噬菌体展示技术构建出含有其cDNA表达文库,为进一步从文库中筛选hALR相互作用蛋白奠定基础。方法:hALR刺激不同肝癌细胞株,从中筛选出对hALR刺激有高反应性的细胞株。以PolyATtractSystem1000提取mRNA,用T7Select10-3OrientExpresscDNACloningSystem和RandomPrimer构建它的cDNA噬菌体表面展示文库;以噬菌体滴度分析和PCR评价文库质量。结果:hALR对不同肝癌细胞株均有不同程度的促增殖作用,且呈明显的剂量依赖关系。对QGY促增殖作用最强,以它作为建库细胞。对所建文库进行噬菌体滴度分析,表明原始cDNA文库含有2×107独立的重组子;随机挑取重组子进行PCR鉴定,发现插入长度在0.2～2kb,平均为0.6kb,能够较好地代表来源细胞中mRNA所表达的几乎所有信息。结论:hALR对所检测的肝癌细胞株均有促增殖作用;QGY细胞对hALR刺激有最高的反应性;以它为基础,构建出库容量为2×107的高质量噬菌体表面展示文库。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2005年03期）
张林[4]（2004）在《1.利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库 2.从人肝癌细胞cDNA表达文库中筛选hALR相互作用蛋白》一文中研究指出目的：挑选出对人肝再生增强因子(hALR)高反应性的肝癌细胞株，并以此作为细胞来源，利用噬菌体展示技术构建出人肝癌细胞cDNA表达文库，为进一步从文库中筛选hALR相互作用蛋白奠定基础。 方法：以~3H-TdR掺入法比较hALR对不同肝癌细胞株促增殖作用的大小，从数株中鉴定出一株对hALR刺激具有高反应性的细胞株，以Promega公司PolyATtract System 1000试剂盒通过磁珠分离一步法提取肝癌细胞株的mRNA，然后利用Novagen公司的T7Select10-3 OrientExpress cDNA Cloning System,Random Primer试剂盒构建出肝癌细胞cDNA的噬菌体表面展示文库，通过噬菌体滴度分析和PCR评价cDNA文库质量。 结果：hALR对不同肝癌细胞株均有不同程度的促增殖作用，且呈明显的剂量依赖关系，尤以对QGY促增殖作用最为突出；以QGY细胞作为构建文库的细胞来源，构建出它的cDNA噬菌体展示文库；对构建的肝癌细胞cDNA表达文库进行噬菌体滴度分析，结果表明构重庆医科大学硕士研究生学位论文建出的原始cDNA文J乍中包含的独立的重组子克隆数高达2x107，具有较高的库容量;随机挑取原始cDNA文库中的重组子单克隆进行PCR鉴定，结果表明插入cDNA片断长度在0.2一Zkb之间，平均为0.6kb，能够较好地代表来源细胞中mRNA所表达的几乎所有信息。 结论:QGY细胞较7701和HePGZ细胞对hALR刺激有更高的反应性;以QGY细胞为基础，构建出库容量为2x107的高质量肝癌细胞cDNA的噬菌体表面展示文库。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2004-04-01）
柴蔚然[5]（2003）在《重组人TNF-α免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建》一文中研究指出目的 应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)的单链抗体库。为研究人rTNF-α受体结合位点，了解结构与功能的关系奠定基础，同时也为临床免疫治疗提供一种经济有效的新型抗体打下基础。 方法 利用噬菌体表面展示技术，绕过杂交瘤技术，用rhTNF-α，同时加入福氏佐剂，免疫BALB/C小鼠，取其脾脏，分离淋巴细胞，提取细胞总RNA，逆转录成cDNA第一条链，以该链为模板，用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因，构建VH、VL抗体库。由Linker-primer mix经重迭延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体(ScFv)。再用RS primer mix以ScFv为模板进行第二次PCR，同时在5′端及3′端分别加上Sfi Ⅰ、Not Ⅰ酶切位点，从而获得全套抗rhTNF-α的ScFv基因。以SfiⅠ／NotⅠ位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体，用氯化钙法转化大肠杆菌TG1，然后经M13KO7辅助噬菌体拯救，构建成全套抗rhTNF-α ScFv表面展示文库。 结果 1．从北京海军总医院购买的rhTNF-α，经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后，考马斯亮蓝染色仅见目的条带，已达到电泳纯。以该蛋白来免疫小鼠，并用间接ELISA法检测血清中抗体效价可达10~(-5)-10~(-6)之间。符合构建抗体库的要求。 2．经RT-PCR扩增出重链、轻链可变区基因片段，经1.5％琼脂糖凝胶电泳，可清楚地看到340bp左右和325bp左右处有DNA条带即为山西医科大学生物化学与分子生物学2003届硕士学位论文 扩增的VH与VL DNA片段，与预期的片段大小相符。3.将重链、轻链可变区基因通过Linker primer mix拼接后，用RS primer mix进行第二次PCR，经1 .5%琼脂糖凝胶电泳，可清楚地看到一片 段大小约750bp左右的DNA片段。此DNA片段以Sfil入otl位 点定向插入pcA五叮AB一SE噬菌粒载体的gPm基因前方。氯化钙法 转化大肠杆菌TGI，构建抗thTNT一a抗体可变区基因文库。4.成功构建了噬菌体抗体库，经计算库容量约为4.6 xl。“。经M13Ko7 超感染后，测噬菌斑滴度为2.1 X10“pfu.L一‘。结论 本课题从提取免疫小鼠脾脏淋巴细胞的总RNA出发，运用RT一PCR、重迭延伸反应以及DNA重组技术等，获得了抗thTN下一a抗体的可变区VH、VL基因，成功地构建了全套抗rhTN下一a ScFv噬菌体表面展示文库。该文库为利用亲和富集筛选技术，获得具有TNF一a结合活性的完整重组噬菌粒克隆奠定了基础。同时也为进一步的基因工程抗体研究及抗原一抗体相互作用机理的阐明打下基础。(本文来源于《山西医科大学》期刊2003-05-20）
江淼[6]（2003）在《抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选》一文中研究指出本研究从活化血小板免疫小鼠的脾淋巴细胞中分别克隆出小鼠免疫球蛋白的重、轻链可变区(V_H和V_L)基因，将V_H和V_L在体外拼接成单链抗体(ScFv)基因后转入噬菌体载体，使单链抗体分子展示在噬菌体表面，从而成功构建了抗血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库。以血小板膜表面数种受体糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa、Ⅱb／Ⅲa复合物及重组凝血酶受体PAR-1(rPAR1)为靶抗原从该文库中筛选各自的特异性单链抗体。靶抗原GPⅡb、GPⅢa、GPⅡb／Ⅲa以亲合层析方法从血小板裂解液中提取，rPAR1以重组蛋白的形式在大肠杆菌中表达，表达产物具有与天然PAR-1分子相似的活性和功能。 从文库中筛选出的单链抗体克隆经测序证实符合抗体可变区结构特点，对其中抗rPAR1的单链抗体克隆APAR31进行了表达，得到了有抗原结合能力的单链抗体分子，同时也证实了所建噬菌体文库的有效性。上述工作为噬菌体展示技术在血栓与止血领域的应用奠定了基础。(本文来源于《苏州大学》期刊2003-04-01）
许国双,王汉民,陈威,杨为松,白雪帆[7]（2001）在《人源性抗汉坦病毒抗体VH基因噬菌体表面展示文库的构建与筛选》一文中研究指出目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb)。方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT—PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库。经3轮吸附—洗脱—扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性。结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库。经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆。对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人IgVH基因。结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HVmAb奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2001年06期）
韩者艺,何凤田,陈宝军,乔泰东,王海燕[8]（2001）在《人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建》一文中研究指出目的 利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法 从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL 1- Blue,以辅助噬菌体M13K0 7超感染噬菌粒文库 ,构建成人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .结果 得到一个含克隆数为 1.2× 10 6 ,实际滴度约为 2 .5 6× 10 1 5 pfu· L- 1的 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库 .结论 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建 ,为下一步利用亲和富集筛选技术 ,获得具有胃癌表面抗原结合活性的融合抗体及可溶性抗体奠定了基础(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2001年12期）
贾松惠,郭鹞,范灵芝,梁米芳,侯云德[9]（1999）在《重组人G—CSF免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建》一文中研究指出利用全套噬菌体抗体表面展示技术，绕过杂交瘤技术，从重组人G-CSF免疫的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA，反转录成cDNA后，用抗体可变区PCR混合引物进行全套抗体重、轻链可变区（VH和VL）基因的扩增。经重迭延伸反应，在体外随机装配成单链抗体（ScFv）。将其克隆至噬菌粒载体pCANTAB5E中，电转化含SupE的E.Coli菌株，以辅助噬菌体M13K07超感染噬菌粒文库，构建成全套ScFv表面展示文库。为利用亲和富集筛选技术，获得具有G-CSF结合活性的完整重组噬菌粒克隆奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊1999年01期）
噬菌体表面展示文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
噬菌体表面展示文库论文参考文献
[1].张磊升,高巍,赵魁,贺文琦,宋德光.小鼠神经细胞cDNAT7噬菌体表面展示文库的构建[J].中国生物制品学杂志.2011
[2].苏林,孔燕,刘长征,杨克恭,陈松森.噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽[J].中国医学科学院学报.2011
[3].张林,刘杞,孙航.利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库[J].重庆医科大学学报.2005
[4].张林.1.利用噬菌体表面展示技术构建人肝癌细胞的cDNA表达文库 2.从人肝癌细胞cDNA表达文库中筛选hALR相互作用蛋白[D].重庆医科大学.2004
[5].柴蔚然.重组人TNF-α免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建[D].山西医科大学.2003
[6].江淼.抗活化血小板表面受体全套单链抗体噬菌体展示文库的构建和筛选[D].苏州大学.2003
[7].许国双,王汉民,陈威,杨为松,白雪帆.人源性抗汉坦病毒抗体VH基因噬菌体表面展示文库的构建与筛选[J].细胞与分子免疫学杂志.2001
[8].韩者艺,何凤田,陈宝军,乔泰东,王海燕.人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建[J].第四军医大学学报.2001
[9].贾松惠,郭鹞,范灵芝,梁米芳,侯云德.重组人G—CSF免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建[J].细胞与分子免疫学杂志.1999