导读:本文包含了外套细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:外套,珠母,细胞,珍珠贝,细胞因子,细胞培养,抗氧化。
外套细胞论文文献综述
周子睿,施志仪,李文娟,尚朝,尚攀[1]（2017）在《不同Ca~(2+)养殖条件下叁角帆蚌外套膜和内脏团组织细胞的钙含量及其对碳酸酐酶的影响》一文中研究指出为了探讨叁角帆蚌(Hyriopsis cumingii)在不同钙离子浓度养殖时,内脏团和外套膜细胞对环境中钙离子的吸收,以及细胞内钙离子浓度对碳酸酐酶的影响,本实验设定了5种钙离子的环境浓度(0 m M、0.5m M、1.25 m M、2 m M、3 m M),采用流式细胞仪测定内脏团和外套膜组织细胞内钙离子含量,用荧光定量PCR检测α-碳酸酐酶基因(HcCA)表达,并用乙酸对硝基苯酯的水解间接测定碳酸酐酶活性,以期能阐明环境中钙浓度对组织细胞钙含量的影响,和组织细胞内不同钙含量与碳酸酐酶基因表达和酶活性之间的关系。研究结果表明,在相同环境的钙离子浓度下,活体叁角帆蚌的内脏团细胞中钙含量显着高于外套膜细胞(P<0.05),并且表明从0 m M到2 m M浓度,内脏团和外套膜细胞内的钙含量显着上升(P<0.05),在3 m M浓度时出现下降(P<0.05)。同时,细胞内Ca~(2+)含量较低时,HcCA在内脏团和外套膜中的表达量均显着低于细胞内Ca~(2+)含量较高组(P<0.05),但细胞内Ca~(2+)荧光强度为8×104时达到饱和且开始下降,而HcCA的表达在细胞内Ca~(2+)荧光强度为6×104已经最高,并开始下降。环境钙离子浓度在0 m M、0.5 m M时碳酸酐酶活性显着高于1.25 m M、2 m M、3 m M浓度组(P<0.05),而且1.25 m M、2 m M、3 m M浓度组间无显着差异(P>0.05),由此发现碳酸酐酶在0.5 m M钙离子浓度中活性较高但表达量却较低,而在1.25 m M和2 m M浓度中表达量高但活性较低,并且碳酸酐酶外套膜细胞酶活性在各浓度均显着高于内脏团细胞(P<0.05)。本研究为叁角帆蚌水体最适养殖钙浓度提供了重要依据。(本文来源于《海洋渔业》期刊2017年01期）
李涌泉,杨惠珍,任玉娟,吴昊,井维鑫[2]（2016）在《镉对背角无齿蚌外套膜细胞凋亡相关酶活性和细胞结构的影响》一文中研究指出应用酶学和组织显微技术,研究了镉(Cd)对背角无齿蚌(Anodonta woodiana)外套膜组织中细胞凋亡相关酶Caspase-3,8,9活性、H2O2含量和组织细胞超微结构的影响。结果显示,与对照组相比,随着Cd质量浓度的增加,外套膜Caspase-3活性表现为先降低后显着升高的趋势(P<0.05);Caspase-8活性呈现逐渐升高,差异显着(P<0.05);Caspase-9活性在低质量浓度和高质量浓度组显着降低,但中高质量浓度组显着升高(P<0.05)。随着Cd质量浓度的增加,外套膜中H2O2含量呈现逐渐增高的趋势,差异显着(P<0.05)。当Cd质量浓度为16.86 mg/L时,外套膜组织细胞结构的变化明显;细胞核染色质不规则凝聚、固缩和边集,核膜破裂;线粒体肿胀、嵴数量减少、空泡化比较严重;微绒毛排列杂乱、大部分断裂并且空泡化严重。当Cd质量浓度为67.45 mg/L时,外套膜组织细胞损伤更加明显;染色质大部分凝聚、固缩和边集,核膜严重肿胀并破裂;粗面内质网板层状结构解体后形成许多大小不同的小泡。研究表明,外套膜在酶活性和组织细胞结构上对镉的反应较快且更具规律性,而且具有明显的剂量效应关系。(本文来源于《山西农业科学》期刊2016年08期）
周子睿[3]（2016）在《钙离子浓度对叁角帆蚌外套膜和内脏团细胞内钙含量及碳酸酐酶的影响》一文中研究指出叁角帆蚌(Hyriopsiscumingii)是我国重要的淡水育珠蚌,是我国珍珠产业的首选贝类。珍珠光滑有光泽,但实际出的珍珠良莠不齐,关键是珠质沉积所致。。而珠质的主要成分为碳酸钙(CaCO3)。为了探究形成碳酸钙结晶的钙离子在体外的来源,在体内的转换、转运及合成,本实验一方面使用流式细胞术结合钙离子探针检测在插核120天期间不同时期内不同钙离子浓度环境下外套膜和内脏团细胞吸收钙离子并滞留细胞的含量;另一方面检测相应情况下叁角帆蚌α-碳酸酐酶基因(HcCA)表达量、蛋白表达量和总碳酸酐酶酶活性。最后对插核120天后不同钙离子浓度下培养的叁角帆蚌取珠分析珍珠表面沉积状况,旨在探讨HcCA的基因表达、蛋白表达量及酶活性探讨其与叁角帆蚌外套膜和内脏团细胞内钙离子含量与其HcCA的基因表达、蛋白表达量及酶活性之间的关系。主要结果如下:1.HcCA在插核后在内脏团和外套膜中的基因表达量分析及Western Blot蛋白分析(1)研究发现,在每一个取样的时间节点,0mm与0.5mm浓度处理组的hcca表达量均处于较低水平,第20天,随着ca2+浓度上升hcca表达量也逐步上升(p<0.05),50天、90天、120天1.25mm、2mm的hcca表达量显着高于其他浓度处理组(p<0.05)。当ca2+浓度升高到3mm时hcca表达量均出现不同程度显着下降(p<0.05)。从每个浓度角度分析发现,50天时的hcca表达量也显着高于其他浓度组。所有hcca基因表达都显示,外套膜中hcca基因表达量显着低于相应时期和浓度下的内脏团表达量(p<0.05)。(2)westernblot实验结果验证了hcca基因在不同浓度不同时期的表达量2.叁角帆蚌外套膜和内脏团细胞内钙离子含量的流式细胞仪检测分析(1)本实验将培养4个月后的叁角帆蚌外套膜和内脏团组织加入胰酶37度水浴消化后,加入fluo-4/am溶液37°c孵育30min,pbs溶液、胰酶消化液、孵育液均使用cacl2调节溶液钙离子浓度与培养时水体一致。最后流式细胞仪中用488mm激发,fli-h荧光通道收集荧光信号,慢速收集104个细胞。在分析流失数据前应先根据细胞分群设门以排除细菌及消化过度的细胞碎片影响。设门完成后使用fl1-a对fl1-h作图,再次设门以排除未完全消化的非单个细胞。最后用fl1-h对count作图统计钙离子含量。(2)本实验用平均荧光强度代表细胞内钙离子含量,流式细胞仪数据统计发现外套膜细胞内钙离子荧光强度在0mm到2mm浓度均呈显着上升趋势(p<0.05),荧光强度在2mm浓度达到顶峰,而在3mm浓度出现显着下降(p<0.05)。内脏团细胞中钙离子荧光强度随浓度变化趋势与外套膜细胞相同,但整体荧光强度大于外套膜细胞,且差异显着(p<0.05)。3.叁角帆蚌内脏团和外套膜组织中碳酸酐酶活性在不同环境钙离子浓度下差异分析(1)本实验从培养4个月后不同浓度体系中蚌中取出外套膜和内脏团组织使用含pmsf的强裂解液提取蛋白随后在分光光度计中依次加入1.9ml15mmol/ltris-h2s04缓冲液(ph7.6),0.1ml的酶液和1ml3mmol/l的乙酸对硝基苯酯,室温反应5min后在348nm处用分光光度计测定其吸光值,以不加酶液的为空白对照,酶活定义为:在室温下,每分钟水解1μmol乙酸对硝基苯醋所需的酶量为一个酶活单位.最后比上测得的样品蛋白含量,作为单位酶活性。(2)本研究发现外套膜及内脏团中的碳酸酐酶活性在环境钙离子浓度为0mm-0.5mm时,均显着高于1.25mm-3mm环境浓度的活性(p<0.05)。并且1.25mm、2mm、3mm环境浓度浓度的碳酸酐酶活性差异是不显着的(p>0.05)。此外,研究发现外套膜中的碳酸酐酶活性均显着高于内脏团(p<0.05),同样是0.5mm浓度处理组酶活性最高(p<0.05),但3mm处理组酶活性高于1.25mm、2mm浓度处理组(p<0.05)。4.不同环境钙离子浓度养殖下叁角帆蚌珍珠质沉积的观察与研究本研究用扫描电镜分析珍珠表面形态结构发现在外套膜插核育珠180天后,当钙离子浓度为0 mM时,会出现不规则的碳酸钙沉积;当钙离子浓度高于0.5 mM,碳酸钙在珠核上的沉积越来越规则而紧密;当浓度达到3 mM时,表面变得粗糙,规则多边形的沉积结构开始消失。在内脏团插核育珠180天后的珍珠电镜结果显示,无论是高浓度还是低浓度的钙离子环境,碳酸钙的沉积都非常不规则,珍珠表面不平整,容易出现裂痕。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2016-05-19）
孔玮,李世国,谢莉萍,张荣庆[4]（2015）在《脊椎动物源细胞因子对合浦珠母贝外套膜细胞培养及其矿化功能的影响》一文中研究指出筛选出能促进合浦珠母贝外套膜细胞培养及矿化功能的细胞因子,以作为优化本物种细胞培养基的参考,挑选叁龄合浦珠母贝,获取其外套膜进行原代细胞培养。向各实验组细胞培养基中分别添加表皮生长因子(EGF)、内皮细胞生长添加剂(ECGS)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF),通过比较细胞活性、贴壁能力、迁移能力和4种基质蛋白基因(pif80、n16、msi7及accbp)表达水平的变化,来评判这些因子对细胞培养及细胞矿化功能的影响。结果显示:(1)EGF能显着提高原代培养细胞的活性、贴壁能力和迁移能力,并促进pif80、n16和accbp基因的表达;(2)ECGS能增强细胞的贴壁能力和迁移能力,并大幅提高pif80、n16和msi7基因的表达水平;(3)IGF-1能显着增强细胞活性、贴壁能力、迁移能力和msi7的基因表达水平,但对pif80、n16和accbp基因的表达有一定抑制作用;(4)碱性成纤维细胞生长因子能增强细胞的活性及贴壁能力,并显着提升pif80、n16和accbp基因的表达水平。研究表明,脊椎动物源细胞因子具有延长细胞培养时间、增强细胞活性及促进矿化相关基因表达的作用,能够用于优化合浦珠母贝外套膜细胞的培养基。(本文来源于《水产学报》期刊2015年11期）
张雪莹,申铉日[5]（2015）在《1珍珠贝外套膜胶原蛋白肽的抗氧化作用及其对MC3T3-E1细胞的保护作用研究》一文中研究指出本研究以珍珠贝外套膜为原料,采用热水提取法获得水溶性胶原蛋白,利用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶+酸性蛋白酶酶解胶原蛋白,得到POMCP1、POMCP2、POMCP3叁种胶原蛋白肽。通过测定叁种胶原蛋白肽的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率得知,POMCP2的抗氧化活性最高,DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率分别为65.09%和41.36%。以小鼠MC3T3-E1细胞为体外抗氧化模型,研究了珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞无毒性作用,且多肽预处理组的细胞活力高于AMA单独处理组。POMCP1,POMCP2和POMCP3叁种多肽组分中,POMCP2预处理组的细胞活力最高。(本文来源于《第七届生命科学联合学术大会论文汇编》期刊2015-06-15）
张雪莹[6]（2015）在《珍珠贝外套膜胶原蛋白肽的抗氧化作用及其对MC3T3-E1成骨细胞的保护作用研究》一文中研究指出胶原蛋白是一种重要的结构蛋白,其水解产物胶原蛋白肽具有抗氧化、抗菌、预防骨质疏松症等生物活性,提取胶原蛋白所使用的原料多为鱼鳞、鱼皮、猪皮等,提取出来的胶原蛋白主要为Ⅰ型胶原蛋白。珍珠贝外套膜中含有的胶原蛋白主要为类Ⅴ型,与Ⅰ型胶原蛋白在氨基酸组成和排列上有较大区别。本研究以珍珠贝外套膜为原料,采用热水提取法获得水溶性胶原蛋白,利用不同的蛋白水解酶制备胶原蛋白肽。采用G-25葡聚糖凝胶层析法分离不同分子量组分胶原蛋白肽,通过测定其DPPH自由基和羟基自由基清除率筛选抗氧化活性最高的多肽组分。同时,利用小鼠MC3T3-E1细胞体外抗氧化模型,分析胶原蛋白肽对抗霉素A (AMA)诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用。主要内容如下：1、珍珠贝外套膜胶原蛋白的制备及其性质珍珠贝外套膜中粗蛋白含量为9.80g/100g(以湿基计),蛋白质含量较丰富。胶原蛋白含量为5.60%(以湿基计),占粗蛋白含量的57.14%。采用热水法提取外套膜中的胶原蛋白,提取率为5.60%(以干基计)。经氨基酸组成分析得知,外套膜胶原蛋白中富含酸性氨基酸。珍珠贝外套膜胶原蛋白在202nm处有最大吸收峰,而在280nm、275nm和257nm处无吸收峰。2、珍珠贝外套膜胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性利用碱性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶、碱性蛋白酶+中性蛋白酶+酸性蛋白酶酶解胶原蛋白,得到POMCP1、POMCP2、POMCP3叁种胶原蛋白肽。通过测定叁种胶原蛋白肽的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原力得知,POMCP2的抗氧化活性最高,DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率以及还原力分别为65.09%、41.36%和0.058。3、G-25葡聚糖凝胶色谱分离纯化抗氧化活性肽采用G-25葡聚糖凝胶色谱柱对POMCP2按分子量进行分离,得到P1、P2和P3叁个组分。其中,P1的分子量约为66430Da, P2、P3的分子量在300-600Da之间。通过测定叁个组分的DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率和还原力得知,P2的抗氧化活性高于P1和P3。4、胶原蛋白肽对AMA诱导的MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用以小鼠MC3T3-E1细胞为体外抗氧化模型,以AMA为活性氧生成剂,研究了珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞氧化损伤的保护作用。当AMA添加量为80μmol/L,处理时间为48h时,对细胞产生的氧化效果较为明显,可显着影响细胞的正常生长,因此确定上述条件为抗氧化模型的实施条件。珍珠贝外套膜胶原蛋白肽对MC3T3-E1细胞无毒性作用,且多肽预处理组的细胞活力高于AMA单独处理组。POMCP1, POMCP2和POMCP3叁种多肽组分中,POMCP2预处理组的细胞活力最高。POMCP2经G-25葡聚糖凝胶色谱分离得到的叁个组分中,P2预处理组的细胞活力高于P1和P3预处理组,当P2的添加浓度在0.10-0.80mg/mL范围内时,细胞活力随多肽浓度的升高而增强,当胶原蛋白肽的浓度达到1.60mg/mL时,细胞活力稍有下降。此外,MC3T3-E1细胞经P2预处理后,碱性磷酸酶活力和矿化能力显着(p<0.05)提高,且该促进作用呈剂量依赖性。(本文来源于《海南大学》期刊2015-05-01）
孔玮[7]（2015）在《合浦珠母贝外套膜细胞培养及其矿化功能的研究》一文中研究指出合浦珠母贝(Pinctada fucata)是我国重要的海水珍珠养殖贝类,也是生物矿化研究的典型物种。外套膜是珍珠贝进行生物矿化的主要器官。过去研究普遍认为,外套膜细胞通过分泌基质蛋白,调控晶体在胞外生长。然而,外套膜细胞是否直接参与到贝壳矿化过程还尚未被探明。本研究发现,含有外套膜细胞的结晶体系中,能够长出大量碳酸钙晶体,这些晶体都由高度有序的微小单元堆砌而成,呈现出典型生物矿化产物的特点;当晶体矿物质成分被溶解之后,可观察到一层有机质薄膜;部分晶体表面出现被“腐蚀”的痕迹,“腐蚀”部位光滑平整,还有细胞附着其上。在仅含有细胞分泌物(基质蛋白)的结晶体系中,并未析出任何晶体,而在体外碳酸钙结晶实验中,细胞分泌物却能改变天然方解石晶体的形貌,并促进晶体的生长及融合。以上结果表明,外套膜细胞与碳酸钙晶体的成核过程密不可分,并很可能直接参与到晶体表面的重塑;外套膜细胞分泌物,如可溶性基质蛋白等,不能独立介导晶体成核,但能加速晶体的生长,并促进晶体融合,调控晶体的形貌。由此可见,软体动物的矿化过程,很可能是由细胞及其分泌物共同参与完成。介于外套膜细胞在矿化过程中表现出的重要作用,建立外套膜细胞体外培养体系,无论是对于软体动物细胞培养的研究,还是对于生物矿化机制的研究,都有巨大贡献。在合浦珠母贝外套膜原代细胞的培养过程中发现,延长合浦珠母贝外套膜细胞体外存活时间,并最终建立细胞系的有效方法,是通过改良细胞培养基,增强细胞分裂和贴壁能力。本实验研究的四种脊椎动物源细胞因子中:表皮生长因子(EGF)能显着提高原代培养细胞的活性、贴壁能力和迁移能力,并促进pif80、n16和accbp基因的表达;内皮细胞生长添加剂(ECGS)能增强细胞的贴壁能力和迁移能力,并大幅提高pif80、n16和msi7基因的表达水平;胰岛素样生长因子-1(IGF-1)能显着增强细胞活性、贴壁能力、迁移能力和msi7的基因表达水平,但对pif80、n16和accbp基因的表达有一定抑制作用;碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能增强细胞的活性及贴壁能力,并显着提升pif80、n16和accbp基因的表达水平。这些结果表明,脊椎动物源细胞因子能够有助于延长外套膜细胞寿命,增强其贴壁能力和迁移能力,并促进部分矿化相关基质蛋白的表达,因而可用于外套膜细胞的优化培养。(本文来源于《清华大学》期刊2015-05-01）
刘家良[8]（2014）在《马氏珠母贝血液与外套膜外液细胞学和转录组学比较》一文中研究指出本文利用光镜及电镜技术对马氏珠母贝（Pinctada martensii）的血液细胞和外套膜外液细胞进行分类研究，并分别构建了这两种细胞的转录组文库，运用RNA高通量测序（RNA-seq）技术对构建的文库开展测序和生物信息学分析。根据细胞的形态结构特征将马氏珠母贝的血液细胞分为四类：淋巴样细胞、大颗粒细胞、小颗粒细胞和透明细胞。淋巴样细胞约占细胞总数的24.7%，细胞平均大小为4.13μm，胞质中无颗粒。大颗粒细胞约占细胞总数的25%，细胞平均大小为6.40μm，内含多个瑞氏-姬姆萨染色呈蓝紫色的颗粒物质。小颗粒细胞约占细胞总数的3.7%，细胞平均大小为4.35μm，细胞质中充满颗粒物质，瑞氏-姬姆萨染色反应为鲜红色。透明细胞约占细胞总数的46.6%，细胞核平均大小2.67μm，细胞中没有颗粒物质。血液细胞透射电子显微镜观察显示：淋巴样细胞中发现有少量线粒体和小空泡存在，细胞质较均一；大颗粒细胞线粒体较多，小空泡密集，有电子密度高的颗粒存在，内质网及核糖体丰富；小颗粒细胞细胞内有小空泡、中型空泡和高电子密度的小颗粒；透明细胞小空泡很少，但有大空泡存在，没有发现高电子密度的颗粒。根据细胞的形态结构特征将马氏珠母贝的外套膜外液细胞分为五类：淋巴样细胞、大颗粒细胞、小颗粒细胞、透明细胞和巨型细胞。淋巴样细胞约占细胞总数的18.8%，细胞平均大小为4.10μm，胞质中没有颗粒物质。大颗粒细胞约占细胞总数的19.0%，细胞平均大小为6.44μm，颗粒物质密集，瑞氏-姬姆萨染色呈蓝紫色。小颗粒细胞约占细胞总数的4.4%，细胞平均大小为4.33μm，细胞中颗粒染色呈鲜红色。透明细胞约占细胞总数的24.1%，细胞平均大小为6.08μm，胞质中没有颗粒。巨型细胞约占细胞总数的33.7%，细胞平均大小为11.09μm，HE染色发现细胞内有大量嗜伊红颗粒物质。外液细胞透射电子显微镜观察显示：淋巴样细胞没有发现电子密度高的颗粒，有小空泡存在；大颗粒细胞线粒体较多，小空泡密集，还有电子密度高的颗粒存在；小颗粒细胞内有小空泡以及高电子密度的小颗粒；透明细胞细胞有时发现有分页核存在，有大空泡存在，细胞质均匀；巨型细胞内空泡及颗粒物质密集，且能以出芽方式分泌囊泡。鉴于血液细胞与外液细胞在形态上的相似性，推测外液细胞中部分细胞（淋巴样细胞、大颗粒细胞、小颗粒细胞、透明细胞）可能由血液细胞穿越外套膜而到达外液腔。对马氏珠母贝血液细胞和外液细胞转录组测序并对差异表达的基因进行筛选，筛选出9994条差异表达明显的基因；通过对9994个差异表达基因进行GO功能显着性富集分析和KEGG pathway富集通路分析。在血液细胞中显着富集的KEGG通路和GO通路中大多与外界刺激下血细胞的迁移活动相关，说明血液细胞在应激反应方面起着重要的作用。在外液细胞中发现大量高表达的矿化基因，推测外液细胞可能参与了贝壳的矿化过程。通过对马氏珠母贝的血液细胞和外液细胞进行比较来研究外液细胞的来源和功能，为后续对马氏珠母贝珍珠质形成的矿化研究提供数据资料。(本文来源于《广东海洋大学》期刊2014-06-01）
李倩[9]（2014）在《叁角帆蚌外套膜细胞培养的研究》一文中研究指出我国是淡水珍珠的生产大国，淡水贝类当中叁角帆蚌（Hypriosis cumingii）是我国珍珠产业的首选贝类，使用叁角帆蚌作为育珠材料所产的珍珠具有色泽光鲜、珍珠层厚以及珍珠表面光滑圆润等特点，珍珠的质量普遍偏高，因此，叁角帆蚌与池蝶蚌、褶纹冠蚌等为我国主要的淡水育珠贝类。然而，目前我国的淡水珍珠的产量与质量却出现了严重的不均衡发展，产量远远高于珍珠质量，从而导致我国淡水珍珠的销量出现严重滞后的问题。所产珍珠因其颗粒不饱满，光泽度不好，珍珠层较薄等问题制约了我国淡水珍珠产业的进一步发展。本实验室将游离细胞培养法应用到淡水珍珠的培育中，为培育高质量的大型有核珍珠提供了新思路，然而细胞培养又是制约此种方法进一步发展的主要因素。因此针对这一问题，本论文从叁角帆蚌外套膜细胞培养条件的优化改良，细胞移植以及体外诱变对细胞生长的影响叁方面探索了外套膜细胞的活力以及体外生长活性的变化特点，初步探索了叁角帆蚌外套膜细胞DNA损伤及修复机制，主要结果如下所示：1.叁角帆蚌外套膜细胞体外培养条件的优化改良及最优培养时间的确定（1）本实验在常规细胞培养的基础上，对培养条件进行改良，探索出更加适用于叁角帆蚌外套膜细胞进行体外原代培养的条件。优化后缓冲液配方中添加钙、镁等多种金属离子，并将其溶于1L双蒸水中高压灭菌15-20min，并用2mol/LNaHCO3(灭菌处理)调节盐溶液pH为6.8-7.0。培养基配方：58%DMEM+20%胎牛血清+10%自制叁角帆蚌血清+10ng bFGF+10%盐溶液+2%抗菌-抗真菌剂。（2）本实验将RNA/DNA指标引入叁角帆蚌外套膜细胞培养的活力分析，既可以降低台盼蓝染色等方法存在的人为误差，又可以避免细胞凋亡检测等对细胞贴壁传代等的要求，能够较为简单快速并且客观的反映出体外培养细胞的生长状况。最优培养时间为体外培养小于且等于108h。2.细胞体内植入培养对细胞生长的影响（1）体外培养24h的细胞植入外套膜中继续培养能够为细胞提供自体内环境，细胞在活体情况下培养至48-168h生长状态良好，第72-120h细胞活力最大值为25.45；对于体外培养108h的植入细胞进行活体内培养，细胞密度在第72-120h有所增加，细胞活力上升不明显（P>0.05），该方法显着延长了细胞体外培养并保持较高活力的时间。（2）培养至第24h,108h的细胞进行体内移植后，450nm处测得的吸光度值显着上升(P<0.05)，细胞具有良好的活性。体外培养至108h的细胞进行体内移植后，培养72h出现最大吸光度值为0.514，表明此刻细胞体外生长的活性特征显着(P<0.05)。3. ENU，UV诱变对叁角帆蚌外套膜细胞生长的影响（1）乙酰基亚硝基脲(Ethylnitrosourea, ENU)作为一种较强化学诱变剂广泛的应用于生命科学的多种领域，用于诱变细胞或机体发生变化，从而研究其诱变机理。ENU诱变与细胞凋亡，癌变以及致畸等密切相关，本试验采用ENU诱导体外培养的叁角帆蚌外套膜细胞。取ENU原液进行浓度梯度稀释，稀释浓度分别为0.01%,0.02%,0.03%,0.04%,0.05%。发现当ENU的稀释浓度为0.03%时，细胞在450nm处的吸光度值显着增大(P<0.05)，从而确定ENU最佳诱变浓度。同方法确定最佳UV强度为60mJ/cm2，照射时长10min。（2）ENU诱变叁角帆蚌外套膜细胞72-96h后，诱导效果显着（P<0.05），RNA/DNA数值达到最大，为23.18；450nm处测得最大吸光度值为0.495。ENU诱变时间超过96h，细胞的存活率显着下降（P<0.01），诱变120h、144h、168h的细胞发生显着的DNA损伤（P<0.05），表明细胞DNA碱基发生变化。对损伤细胞进行体外稳定状态培养，细胞能够存活，暗示了细胞在进行损伤后修复的过程。（3）紫外照射时长达到144h后，细胞生长特性降低，细胞活力值，即RNA/DNA数值明显降低（P<0.05），为7.53；细胞在450nm处测得的吸光度值为0.085。进行继续诱导照射192h时，细胞表现出明显的活力特性（P<0.05），细胞活力以及细胞生长活性值都达到最大，分别为18.60和0.371。UV辐照时间超过192h，细胞存活率明显降低，细胞表现出明显的紫外辐照所引起的损伤，240h与288h的细胞DNA损伤产物的形成量明显升高，且6-4PPs的形成量高于CPDs的形成量。在实践过程中，经过叁角帆蚌外套膜细胞体外培养条件的优化改良以及诱变细胞生长，能够明显延长叁角帆蚌外套膜细胞体外存活的时间，改善细胞体外存活的状态，发现细胞的活力以及细胞生长活性都得到了显着的提高，明显改善叁角帆蚌外套膜细胞体外存活时间较短以及体外生长状态不稳定的问题，保证其细胞在体外生长的状态下发挥功能，进而有利于大型有核珍珠的培育，提高淡水珍珠品质。(本文来源于《上海海洋大学》期刊2014-04-08）
李倩,施志仪,李文娟,黄凯,祁晓翔[10]（2014）在《叁角帆蚌外套膜细胞体外培养优化及体内植入培养对细胞生长的影响》一文中研究指出以DMEM为基础培养基,通过优化改良培养基及缓冲液的配方,对叁角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜进行细胞培养,并且以显微观测、RNA/DNA的比值作为该细胞增殖的评价指标,分别对体外培养细胞的迁出时间、速度、数量以及增殖活力进行测定。分别取体外培养第24、108、120小时的细胞进行Hoechst DNA荧光标记,然后将3组标记细胞植入叁角帆蚌外套膜中在蚌体内培养,在植入后第24、72、120、168、216小时运用RNA/DNA指标检测活体培养的细胞增殖活力。结果表明,经过优化后的缓冲液和培养基更有利于细胞从外套膜组织中迁出,迁出速度和细胞数量显着增加(P<0.05),且细胞的活力随着培养时间的延长而逐渐增大,培养至108 h时,细胞活力达到最大,RNA/DNA比值为24.53,在108 h后显着下降(P<0.05),显微观测的细胞生长状况与RNA/DNA指标测定相吻合。对体外培养的细胞植入蚌体外套膜中再进行培养时发现,对体外培养活力较好的细胞,活体内环境可增大细胞的活力,RNA/DNA比值最高达到25.45,但在活体培养168 h后活力显着下降(P<0.05);而对体外培养活力较差的细胞,活体内环境对细胞活力影响不显着(P>0.05)。本研究旨在为叁角帆蚌外套膜细胞增殖的深入研究及建株提供基础性资料。(本文来源于《中国水产科学》期刊2014年02期）
外套细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
应用酶学和组织显微技术,研究了镉(Cd)对背角无齿蚌(Anodonta woodiana)外套膜组织中细胞凋亡相关酶Caspase-3,8,9活性、H2O2含量和组织细胞超微结构的影响。结果显示,与对照组相比,随着Cd质量浓度的增加,外套膜Caspase-3活性表现为先降低后显着升高的趋势(P<0.05);Caspase-8活性呈现逐渐升高,差异显着(P<0.05);Caspase-9活性在低质量浓度和高质量浓度组显着降低,但中高质量浓度组显着升高(P<0.05)。随着Cd质量浓度的增加,外套膜中H2O2含量呈现逐渐增高的趋势,差异显着(P<0.05)。当Cd质量浓度为16.86 mg/L时,外套膜组织细胞结构的变化明显;细胞核染色质不规则凝聚、固缩和边集,核膜破裂;线粒体肿胀、嵴数量减少、空泡化比较严重;微绒毛排列杂乱、大部分断裂并且空泡化严重。当Cd质量浓度为67.45 mg/L时,外套膜组织细胞损伤更加明显;染色质大部分凝聚、固缩和边集,核膜严重肿胀并破裂;粗面内质网板层状结构解体后形成许多大小不同的小泡。研究表明,外套膜在酶活性和组织细胞结构上对镉的反应较快且更具规律性,而且具有明显的剂量效应关系。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
外套细胞论文参考文献
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