导读:本文包含了受体自身抗体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体,硫氧还蛋白相互作用蛋白,INS-1细胞,凋亡
受体自身抗体论文文献综述
张许梅,王瑾,霍海燕,岳继萍,张文婷[1]（2019）在《血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体可上调TXNIP导致大鼠胰岛β细胞系INS-1凋亡》一文中研究指出目的血管紧张素Ⅱ1型受体(AngⅡ-1R)自身抗体能否通过影响硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)诱导大鼠胰岛β细胞凋亡。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系INS-1,用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,选用10-6mol/L作为最适浓度,24 h作为最佳时间;在上述条件下,用流式细胞计量术及Western blot检测细胞凋亡及凋亡蛋白的表达; Real-time PCR和Western blot检测AngⅡ-1R自身抗体对TXNIP mRNA和蛋白表达的影响。结果AngⅡ-1R自身抗体呈浓度及时间依赖性降低INS-1细胞的活力(P<0. 05);促进INS-1细胞凋亡(P<0. 01);AngⅡ-1R自身抗体还可以促进TXNIP的mRNA和蛋白表达(P<0. 01)。RNA干扰沉默TXNIP表达后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的细胞凋亡减少(P<0. 05);使用AngⅡ1R拮抗剂替米沙坦(TM)后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的TXNIP上调及细胞凋亡均被抑制(P<0. 05)。结论 AngⅡ-1R自身抗体可以通过AT1R上调TXNIP导致胰岛β细胞凋亡,有望为AngⅡ-1R自身抗体阳性的糖尿病患者的防治提供新靶点。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年11期）
张许梅[2]（2019）在《AT1受体自身抗体通过NLRP3炎性小体-IL-1β通路诱导胰岛β细胞功能受损》一文中研究指出糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)已经成为一种越来越常见的疾病,发病率和致死率逐年升高,且发病者越来越趋于年轻化。随着糖尿病病情发展,会导致心脏,血管等多器官功能受损。遏制胰岛β细胞的损伤是治疗糖尿病的关键,因此减少某些病理原因(如炎症、应激)导致的胰岛细胞凋亡,对于预防糖尿病的发生发展至关重要。血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体(angiotensin Ⅱ type1 receptor autoantibodies,AT1-AA)首先在先兆子痫患者血清中发现。本课题组前期研究已证实AT1-AA可以与胰岛β细胞上AT1R结合,促进胰岛β细胞凋亡,但具体机制不清。有研究报道,慢性炎症与2型糖尿病胰岛β细胞损伤有关,尤其炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)与2型糖尿病胰岛损伤关系更为密切。已有研究证实IL-1β活化的机制通路复杂,其中NLRP3炎性小体的激活对IL-1β的活化最为重要。激活的NLRP3炎性小体会促使Pro-IL-1β切割成熟,形成有活性的IL-1β而发挥作用。NLRP3炎性小体的激活可通过叁条通路实现,包括活化氧(ROS),钾外流以及溶酶体破坏。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)是一种内源性的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)结合抑制蛋白,可以阻断TRX的抗自由基和抗凋亡功能而诱导细胞凋亡。已有研究证明AT1-AA具有促进炎症作用。那么,AT1-AA是否可以通过促进炎症发生进而促进胰岛β细胞损伤?因此本研究的主要目的是观察AT1-AA是否可以通过增加TXNIP表达,激活NLRP3炎性小体,导致IL-1β分泌增多,进而诱导胰岛β细胞损伤。目的:1.建立AT1-AA阳性大鼠模型,观察大鼠胰岛形态及功能以及TXNIP、NLRP3炎性小体、IL-1β变化。2.证实TXNIP-NLRP3-IL-1β信号通路在AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤中的作用。方法:1.AT1-AA阳性大鼠建模:用生物合成的AT1R-ECⅡ抗原肽段主动免疫实验组大鼠,用免疫佐剂与生理盐水制成的混合液免疫对照组大鼠。2.免疫组织化学染色法观察TXNIP、NLRP3炎性小体、IL-1β等蛋白的表达水平。3.CCK-8试剂盒检测细胞存活率。4.流式细胞术检测细胞凋亡水平。5.ELISA检测IL-1β分泌量。6.Western blot检测TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase1、Cleaved Caspase3/Caspase3蛋白的表达水平7.Real time PCR检测TXNIP m RNA的表达水平。结果:1.成功建立AT1-AA主动免疫大鼠模型检测大鼠血清抗体滴度的结果显示,随着免疫时间延长,与对照组相比,免疫大鼠抗体滴度升高,在第4周时升高较明显(P<0.01),到第8周时,抗体滴度达高峰(P<0.01),模型建造成功(图1)。2.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织结构和功能受损图2A结果显示,前4周免疫组大鼠体重与对照组大鼠体重无明显差异,第10周开始,免疫组大鼠体重开始降低,且在16周时体重出现明显降低(P<0.05)(图2A)。空腹血糖检测结果显示,从第8周开始到第16周,免疫组大鼠空腹血糖明显高于同期对照组(P<0.05)(图2B)。葡萄糖耐量试验结果显示,给予对照大鼠葡萄糖灌胃,2h后血糖值降至正常水平;12周及16周的免疫大鼠在灌胃2h后血糖值仍明显高于正常水平(P<0.05)(图2C)。胰岛素耐量试验结果显示,给予对照大鼠腹腔注射胰岛素,30min时血糖迅速下降,至2h时血糖恢复至正常水平;12周及16周的免疫大鼠注射胰岛素,30min大鼠血糖无明显变化(P<0.05)(图2D)。随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织HE染色结果显示,胰岛组织结构紊乱严重(图2E)。以上结果提示,AT1-AA长期存在可以导致胰岛结构及功能受损。3.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛细胞凋亡增加TUNEL染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织细胞核变大,棕黄色颗粒增多(图3A)。Western blot结果显示,免疫大鼠胰岛组织Cleaved Caspase3/Caspase3比值相比于对照组明显升高(P<0.05)(图3B)。结果提示,AT1-AA长期存在可以导致胰岛组织凋亡增加。4.AT1-AA主动免疫大鼠血清中IL-1β分泌量增高免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫大鼠胰岛组织中代表IL-1β的棕色颗粒增多,颜色加深(图4 A)。ELISA检测IL-1β分泌结果显示,随着免疫时间延长,免疫大鼠血清中IL-1β的分泌量不断增加(P<0.05)(图4B)。5.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织NLRP3炎性小体激活免疫组化染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织棕黄色颗粒增多(图5A)。Western blot结果显示,免疫组大鼠胰岛组织NLRP3、ASC、Caspase1 p10蛋白表达随着免疫时间的延长均逐渐升高(P<0.01)(图5B)。6.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织TXNIP表达增高免疫组化染色结果显示,与对照组相比,免疫大鼠胰岛组织棕黄色颗粒增多,着色加深(图6A)。Western blot结果显示,免疫大鼠胰岛组织TXNIP蛋白表达水平随着免疫时间的延长不断增高(P<0.05)(图6B)。7.AT1-AA呈浓度及时间依赖性降低INS-1细胞的存活率CCK-8结果显示,与Negative-Ig G组相比,INS-1细胞存活率随AT1-AA浓度的增大而降低(P<0.05)(图7A)。与Negative-Ig G组相比,在AT1-AA作用24 h时细胞的存活率明显下降(P<0.01)(图7B)。8.AT1-AA明显增高INS-1细胞凋亡水平流式细胞技术结果显示,与Negative-Ig G组比较,AT1-AA实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.01)(图8A)。Western blot结果显示,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA实验组Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显升高(P<0.01)(图8B)。9.AT1-AA可以促进INS-1细胞IL-1β的分泌ELISA实验结果显示,与Negative-Ig G组相比,AT1-AA可以使细胞IL-1β的分泌量明显增加(P<0.01)(图9)。10.NLRP3炎性小体-IL-1β参与了AT1-AA诱导的INS-1细胞凋亡Western blot结果显示,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达水平均升高(P<0.05)(图10A)。使用NLRP3炎性小体的抑制剂MCC950孵育INS-1细胞,Western blot结果显示,与AT1-AA组相比,AT1-AA+MCC950组INS-1细胞Cleaved Caspase3/Caspase3比值下降(P<0.05)(图10B);IL-1β分泌量降低(P<0.05)(图10C)。11.TXNIP-NLRP3炎性小体-IL-1β参与了AT1-AA诱导INS-1细胞的凋亡采用Real-time PCR与Western blot检测TXNIP的表达量,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA组TXNIP m RNA(P<0.01)和蛋白表达水平(P<0.01)均显着升高(图11A)。使用慢病毒包被的TXNIP sh RNA感染INS-1细胞,结果显示,与Scramble sh RNA组相比,TXNIP sh RNA组TXNIP m RNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)均显着下降(图11B),提示TXNIP干扰模型建立成功。与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显增高(P<0.01);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显降低(P<0.01)(图11C),结果提示TXNIP参与了AT1-AA诱导的INS-1β细胞的凋亡。ELISA结果显示,与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组IL-1β分泌量明显增高(P<0.05);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组IL-1β分泌量显著下降(P<0.05)(图11D)。Western blot结果显示,与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达明显增高(P<0.05);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达均下降(P<0.05)(图11E)。以上结果提示TXNIP参与了NLRP3炎性小体的激活以及IL-1β水平的升高。12.替米沙坦(telmisartan,TM)可通过抑制TXNIP-NLRP3炎性小体-IL-1β减轻AT1-AA诱导INS-1细胞凋亡Western blot结果显示,与AT1-AA组相比,AT1-AA+TM组Cleaved Caspase3/Caspase3比值降低(P<0.05)(图12A);IL-1β分泌量减少(P<0.05)(图12B);NLRP3炎性小体的蛋白表达水平降低(P<0.05)(图12C);TXNIP蛋白表达也降低(P<0.05)(图12D)。结论:1.AT1-AA长期存在可导致大鼠胰岛结构受损、功能紊乱,同时可促进胰岛组织TXNIP、NLRP3炎性小体以及IL-1β水平升高;2.TXNIP-NLRP3-IL-1β通路参与了AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤;3.ARB通过抑制TXNIP-NLRP3-IL-1β通路改善AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-06-12）
王兆佳,武烨,刘丹,王美丽,隗歆[3]（2019）在《不同浓度β_1-肾上腺素受体自身抗体对心肌细胞存活影响的差异性》一文中研究指出目的观察不同浓度的β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-adrenergic receptor autoantibodies,β_1-AA)作用不同时间,对于心肌细胞产生的不同终末效应。方法分别使用10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)mol/Lβ_1-AA作用于乳鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs)和H9c2细胞检测细胞生存率(24、36、48 h),作用于H9c2细胞检测线粒体功能(ATP含量、线粒体膜电势)(48 h)。结果中、高浓度(10~(-7)、10~(-6)mol/L)β_1-AA刺激各个时间,NRCMs、H9c2细胞生存率明显降低;而低浓度(10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)mol/L)使得H9c2细胞轻微增生。高浓度(10~(-6)mol/L)β_1-AA刺激后,H9c2细胞中ATP含量降低,而中低浓度(10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)mol/L)β_1-AA使H9c2细胞中ATP含量增加。高浓度β_1-AA(10~(-6)mol/L)刺激后,H9c2细胞线粒体膜电势降低,低浓度(10~(-10)、10~(-8)mol/L)β_1-AA则使H9c2细胞线粒体膜电势增加。结论高浓度β_1-AA刺激心肌细胞后表现为损伤作用,低浓度刺激表现为正性作用(即增强线粒体功能、促存活),与作用时间无明显相关,本研究为β_1-AA阳性人群中心功能差异的现象提供了病理生理学依据。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2019年03期）
侯晓鸿[4]（2019）在《Epac1参与β_1-肾上腺素受体自身抗体诱导的心肌细胞自噬水平下降及受体机制研究》一文中研究指出心功能不全在全世界的发病率与死亡率越来越高。心肌细胞是具有有限再生能力的终末分化细胞,心肌细胞大量丢失可引起心功能障碍,进而导致心功能不全。有研究报道,自噬调节的细胞死亡是心功能不全中细胞死亡的最常见形式。而心功能不全中自噬水平降低的机制尚不十分清楚。以往大量研究发现,在多种心血管疾病患者血清中β_1肾上腺素受体自身抗体(β_1-adrenergic receptor autoantibody,β_1-AA)的阳性率比正常人高。我们前期研究发现,β_1-AA诱导心肌自噬水平降低,并且这种自噬抑制参与β_1-AA诱导的心肌细胞死亡乃至心功能不全。进一步研究发现,β_1-AA通过激活β_1-AR-cAMP进而活化蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)可降低心肌自噬水平,然而拮抗PKA并不能完全逆转β_1-AA诱导的心肌自噬水平下降,提示还有其他因素参与β_1-AA诱导的心肌自噬抑制。Epac1是cAMP新近发现的另一下游信号通路,那么Epac1是否参与β_1-AA诱导的自噬水平降低及其相关机制目前尚不清楚。因此,本研究采用β_1-AR-ECII抗原肽段,主动免疫8周龄雄性SD大鼠2 w,4 w,6 w,8 w,用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的OD值以鉴定大鼠模型是否建立成功。用亲和层析法提纯大鼠血清中的β_1-AA,用于离体实验。本研究运用ELISA检测心肌组织cAMP含量,Western Blot检测心肌组织PKA活性,运用Western blot及RT-PCR方法检测自噬相关基因LC3、Beclin1、P62的蛋白和mRNA表达水平。利用亲和层析法纯化的β_1-AA对H9c2心肌细胞进行处理,观察β_1-AA对cAMP,p-PKA表达的影响及自噬水平的变化,进一步给予PKA抑制剂H89观察自噬的变化情况。结果发现,β_1-AA长期刺激引起心肌组织cAMP,p-PKA表达显着增加,自噬水平明显下降,而抑制PKA可明显拮抗β_1-AA诱导的心肌自噬水平降低,然而,抑制PKA并不能完全逆转β_1-AA诱导的心肌自噬降低。因此,我们进一步采用Western blot检测主动免疫大鼠心肌组织和β_1-AA刺激H9c2心肌细胞的Epac1表达情况,结果显示,β_1-AA诱导心肌Epac1表达增加。采用Epac1抑制剂ESI-09处理H9c2心肌细胞,观察抑制Epac1的表达对心肌细胞自噬的影响,结果发现抑制Epac1可明显改善β_1-AA诱导的心肌自噬水平下降。接下来,我们重点探究β_1-AA诱导心肌Epac1表达增加的可能机制。β_1-AA是针对β_1-AR细胞外第二环产生的自身抗体,可特异性激活β_1-AR发挥效应,慢性长期β_1-AR刺激可引发左心室扩张,心功能不全。另有研究表明,β_2-AR可以与β_1-AR形成异源二聚体,增强β_1-AR的生物学效应。我们课题组已有研究发现,β_2-AR不与β_1-AA直接结合,但可以增强β_1-AA与β_1-AR结合引起的心肌成纤维细胞增殖。因此,我们推测β_1-AR和β_2-AR可能都参与β_1-AA诱导的心肌细胞Epac1表达上调进而抑制心肌细胞自噬。为了探讨β_1-AR和β_2-AR在β_1-AA导致心肌Epac1表达增加中的作用,我们选取β_1-AR KO鼠和β_2-AR KO鼠,用β_1-AR-ECII抗原肽段建立主免模型,检测心肌组织Epac1的表达及自噬的变化情况。结果显示,β_1-AR和β_2-AR均参与β_1-AA诱导的心肌组织Epac1表达增加及自噬水平下降。进一步,我们试图探讨β_2-AR如何影响β_1-AA诱导的Epac1表达增加。众所周知,与β_1-AR只偶联Gs蛋白不同,β_2-AR可以偶联Gs和Gi两种蛋白。有研究表明,过表达β_2-AR可以显着抑制β_1-AR的功能损伤,使用β_2-AR反向激动剂ICI 118551偏向激活Gi信号通路也可减轻这种损害,提示β_2-AR/Gi信号通路在β_1-AR的功能发挥过程中起着重要作用。为了探讨β_2-AR/Gi信号通路在β_1-AA诱导的心肌细胞Epac1表达增加中的作用。我们选择ICI 118551预处理H9c2心肌细胞,再加β_1-AA处理,结果显示,ICI 118551明显逆转β_1-AA引起的心肌细胞Epac1表达增加,自噬水平降低及细胞存活率降低,提示β_1-AA通过抑制β_2-AR/Gi信号通路导致心肌细胞Epac1表达上调。第一部分Epac1参与β_1-AA诱导的心肌自噬水平降低目的:本研究采用β_1-AR-ECII抗原肽段主动免疫SD大鼠建立模型,同时用血清中提纯的β_1-AA作用于H9c2心肌细胞,探讨Epac1是否参与β_1-AA诱导的心肌自噬水平降低。方法:(1)使用β_1-AR细胞外第二环肽段作为抗原肽段去免疫8周龄的SD大鼠,分别在主免2 w,4 w,6 w,8 w,采用ELISA检测血清中β_1-AA的OD值,以检测模型是否建立成功;(2)用亲和层析法提纯血清中的β_1-AA,并用BCA法检测其浓度,用于细胞实验;(3)采用ELISA检测β_1-AA主免大鼠心脏组织2 w,4 w,8 w及β_1-AA作用于心肌细胞12 h,24 h,36 h cAMP的浓度变化情况;(4)Western blot检测β_1-AA作用不同时间心肌组织p-PKA、Epac1蛋白的表达,Western blot和RT-PCR检测自噬相关蛋白和基因的表达。结果:(1)β_1-AR-ECII抗原肽段主动免疫大鼠血清中β_1-AA的OD值随着免疫时间延长显着升高。(2)β_1-AA可以引起心肌组织及H9c2心肌细胞cAMP含量累积、PKA活性增加。(3)β_1-AA诱导心肌组织及H9c2心肌细胞自噬水平显着降低。(4)抑制PKA可以部分逆转β_1-AA诱导的心肌自噬水平明显下降。(5)Epac1参与β_1-AA诱导的心肌自噬降低。(6)Epac1可能通过促进IP3表达参与β_1-AA诱导的心肌自噬水平降低。结论:β_1-AA通过cAMP-PKA/Epac1诱导心肌自噬水平下降,Epac1促进IP3表达抑制心肌自噬水平。第二部分β_1-AR和β_2-AR参与β_1-AA诱导的心肌细胞Epac1表达增加目的:本研究采用β_1-AR-ECII抗原肽段主动免疫C57BL/6小鼠,β_1-AR KO鼠,β_2-AR KO鼠建立模型,同时用β_1-AA作用于H9c2心肌细胞,研究β_1-AA促进心肌细胞Epac1表达升高的受体机制。方法:(1)采用琼脂糖凝胶电泳检测基因鼠类型;(2)使用β_1-AR细胞外第二环肽段作为主动免疫的抗原肽段去分别免疫C57BL/6小鼠、β_1-AR KO鼠、β_2-AR KO鼠各4周,采用ELISA检测血清中β_1-AA的OD值,以检测模型是否建立成功;(3)Western blot和RT-PCR检测β_1-AR KO鼠、β_2-AR KO鼠心肌组织及atenolol和ICI 118551预处理,再加β_1-AA干预H9c2心肌细胞,Epac1及自噬相关蛋白和基因表达;(4)采用免疫组化检测心肌组织Epac1的原位表达情况;(5)使用CCK-8进行检测atenolol和ICI 118551预处理后,再加β_1-AA刺激H9c2心肌细胞对存活率的影响。结果:(1)β_1-AR KO鼠和β_2-AR KO鼠的基因型鉴定。(2)β_1-AR-ECII主动免疫小鼠模型建立。(3)β_1-AR参与β_1-AA诱导的心肌组织Epac1表达增加及自噬水平下降。(4)β_1-AR参与β_1-AA诱导的H9c2心肌细胞Epac1表达增加、自噬水平降低及存活率降低。(5)β_2-AR参与β_1-AA所致心肌组织Epac1表达增加及自噬水平降低。(6)β_2-AR/Gi信号通路拮抗β_1-AA诱导的H9c2心肌细胞Epac1表达增加、自噬水平降低及存活率降低。结论:β_1-AR和β_2-AR均参与β_1-AA引起的心肌组织Epac1表达增加,进而诱导心肌自噬水平下降及存活率降低。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-06-02）
邵梦娇,张玲,商鲁翔,石佳,冯敏[5]（2019）在《β1肾上腺素能受体自身抗体表达增强对心房颤动及心房电重构的影响》一文中研究指出目的探讨β1肾上腺素能受体自身抗体(β1AR)表达增强对心房颤动(简称房颤)及心房电重构的影响。方法 24只新西兰大白兔随机分为对照组(Con组)和β1AR组。β1AR组给予2 mgβ1受体细胞外第二环功能表位肽段与佐剂背部皮下多点注射,对照组给予佐剂背部皮下多点注射。每2周注射1次,共4次。于0、2、4、6 W采耳缘静脉血,离心取血清通过酶联免疫吸附测定血清中抗体滴度,验证造模是否成功。每只兔子在免疫前后,采用S_1S_2递减刺激测量心房有效不应期(AERP),通过Burst刺激测量房颤诱发率和持续时间。免疫结束后取心房肌组织进行蛋白免疫印记法检测各组内离子通道蛋白(Kir3.1及Cav1.2)和缝隙连接蛋白(Cx43和Cx40)总量的表达变化,逆转录聚合酶链反应分析上述指标各组内mRNA的表达变化。结果①与0 w比较,β1AR组在2、4和6 w血清中β1AR水平逐渐增加(P<0.05),而Con组内各个时间点血清中β1AR水平无差异(P>0.05);与Con组相比,除0 w两组比较无差异外,其余β1AR组血清中β1AR水平高于Con组(P<0.05)。②β1AR组免疫后较免疫前AERP缩短[(65±8.5)ms vs (116±23.4)ms,P<0.05],平均心率显着增快[(290±35.3)次/分vs (187±31.1)次/分,P<0.05];与Con组相应时间比较,β1AR组免疫后均出现AERP缩短[(65±8.5) ms vs (116±25.3)ms,P<0.05]和平均心率增快[(290±35.3)次/分vs (198±13.7)次/分,P<0.05]。③β1AR组免疫后较免疫前房颤诱发率增加[83.3%(10/12) vs 0(0/12),P<0.05]及持续时间延长[(24.66±40.92)s vs (0±0)s,P<0.05];与Con组相应时间比较,β1AR组房颤诱发率显着增加[83.3%(10/12) vs 0(0/12),P<0.05]及持续时间延长[(24.66±40.92)s vs (0±0)s,P<0.05];④与Con组相比,β1AR组Cx43和Cav1.2蛋白水平及mRNA水平显着降低(P<0.05)。Kir3.1及Cx40蛋白水平及mRNA含量显着升高(P<0.05)。结论β1AR表达增强能缩短AERP,增加房颤易感性和持续时间,通过改变离子通道特性造成心房肌电重构,促进房颤的发生和维持。(本文来源于《中国心脏起搏与心电生理杂志》期刊2019年02期）
宁娜[6]（2019）在《内质网应激与自噬交互作用参与β_1-肾上腺素受体自身抗体诱导的心肌细胞凋亡》一文中研究指出心力衰竭是心血管疾病的最终阶段,作为发病率及患病率均逐年增加的心血管综合征,已严重威胁人类公共健康。其中,心肌细胞的凋亡增加是心衰发生发展的关键因素。据报道,持续的心肌细胞凋亡可引起细胞丢失增加,进而引起心功能的恶化,最终导致心衰,故探讨心肌细胞的凋亡机制尤为重要。临床数据表明,40%-60%心衰患者的血清中,β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)含量明显增加,它可通过特异性激活心肌细胞膜β_1-肾上腺素受体(β_1-AR)引起细胞凋亡,进而参与心衰的发生发展。然而其具体机制目前不清,仍需进一步探讨。大量研究发现,适当的自噬对于细胞内环境稳态维持至关重要,自噬障碍往往先于并调控细胞凋亡发生。我们课题组前期研究发现,β_1-AA可通过抑制心肌细胞自噬进而促进凋亡的发生,利用雷帕霉素(Rapa)上调自噬可部分缓解心肌细胞的凋亡增加。然而β_1-AA诱导心肌细胞自噬降低的具体机制仍不明确。相关研究表明,细胞中内质网应激(ERS)与自噬关系密切。ERS激活可诱导未折迭蛋白反应(UPR),消除某些不利因素对细胞内的稳态进行调节。应力条件下,适当的ERS可通过激活细胞内自噬水平发挥稳态维持作用,上调的自噬则可激活ERS相关存活机制,反之,若此时ERS持续激活且较为严重,使得细胞不能适应外界刺激,则会诱导细胞自噬水平显着降低,而细胞自噬抑制后则会进一步激活ERS相关促凋亡机制进而诱导细胞凋亡。由此可知,在细胞的稳态维持过程中,ERS与自噬的交互作用至关重要。那么,在β_1-AA持续作用下,心肌细胞中是否也存在ERS与自噬之间的交互作用,该交互作用是否作为重要机制参与其诱导的细胞凋亡呢?这也是本研究重点探讨的问题。本研究采用β_1-AR细胞外的第二环抗原肽段(β_1-AR-ECII)主动免疫雄性SD大鼠建立主免模型,利用SA-ELISA法对主免大鼠血清中β_1-AA抗体的OD值进行检测,并于主免后第8周,用亲和层析法对大鼠血清中的β_1-AA进行提纯。通过Real-time PCR,Western blot,mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒,免疫组化检测大鼠的心肌组织及H9c2心肌细胞的自噬水平及ERS变化情况;利用TUNEL染色,Annexin V-FITC/PI双染法及Caspase-3活性法检测心肌组织及H9c2心肌细胞的凋亡情况;利用CCK-8法对心肌细胞的存活率进行检测。结果发现β_1-AA可诱导心肌组织及心肌细胞的自噬水平明显降低及ERS持续激活,采用Rapa上调心肌细胞的自噬水平或4-苯基丁酸(4-PBA)抑制心肌细胞的ERS,均可部分缓解β_1-AA诱导的细胞凋亡,提示自噬抑制和ERS激活均参与β_1-AA引起的心肌细胞凋亡。进一步,利用4-PBA抑制心肌细胞ERS,观察其对细胞自噬功能的影响,结果发现,β_1-AA可通过引起心肌细胞ERS激活进而诱导细胞自噬障碍;通过3-甲基腺嘌呤(3MA)及Rapa抑制或上调细胞的自噬水平,观察其对细胞ERS的作用,结果表明,自噬功能障碍可反过来进一步激活细胞的ERS。由此可见,ERS与自噬交互作用在β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡过程中十分重要。鉴于β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡过程中ERS与自噬的交互作用,本研究进一步利用Rapa和4-PBA联合调整ERS及自噬观察β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡的变化情况,旨在为改善β_1-AA阳性心衰患者的病情进展及预后提供相应的理论基础。第一部分自噬降低参与β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加研究目的:建立主动免疫大鼠模型并提纯β_1-AA,作用于H9c2心肌细胞,在体水平及离体水平探讨自噬降低在β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡中的作用。研究方法:(1)建立主动免疫大鼠模型:利用β_1-AR-ECII对健康成年雄性SD大鼠进行主动免疫。将大鼠随机分成主动免疫组及溶剂对照组,肽段以0.4μg/g的剂量对大鼠进行背部皮下多点注射,每两周加强免疫一次,溶剂对照组采用Na_2CO3溶液代替抗原肽段。于主免0 w,2 w,4 w及8 w后进行鼠尾取血,采用SA-ELISA法检测血清中β_1-AA抗体产生情况。若大鼠血清中β_1-AA含量明显上调且稳定于较高水平,则可利用亲和层析法提纯血清中的β_1-AA用于后续H9c2心肌细胞实验;(2)Real-time PCR检测主免大鼠心肌组织及β_1-AA作用于H9c2心肌细胞后自噬相关基因Beclin1及LC3的mRNA含量变化;(3)Western blot检测主免大鼠心肌组织及β_1-AA作用于H9c2心肌细胞后自噬相关蛋白Beclin1,LC3及p62的蛋白水平变化;(4)mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒检测β_1-AA作用后H9c2心肌细胞自噬流的变化;(5)Rapa腹腔注射上调大鼠心肌组织自噬,TUNEL染色法检测β_1-AA作用下大鼠心肌组织凋亡率的变化;(6)3MA预处理抑制H9c2心肌细胞自噬,Rapa预处理上调细胞自噬,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测β_1-AA作用下心肌细胞凋亡的变化。研究结果:(1)主动免疫大鼠模型建立成功:与对照组相比,β_1-AA主动免疫2周时大鼠血清中抗体OD值已明显增加,且随着主动免疫时间的延长大鼠血清中β_1-AA抗体含量逐渐升高,6周时即达到较高水平,并持续至第8周,提示主免大鼠模型建立成功;(2)β_1-AA主动免疫大鼠心肌组织自噬水平显着降低:Real-time PCR及Western blot结果表明,与对照组相比,主动免疫2周后,大鼠心肌组织Beclin1及LC3的mRNA及蛋白水平均明显下降,随着主动免疫时间的延长持续降低,8周时最低,自噬底物p62蛋白含量在主免2周后逐渐增加,且持续至第8周;(3)β_1-AA引起H9c2心肌细胞自噬水平显着降低:Real-time PCR及Western blot结果表明β_1-AA作用6 h后即可引起Beclin1及LC3 mRNA及蛋白表达明显降低,持续至24 h,而自噬底物p62蛋白表达在β_1-AA作用12 h后才出现明显增加;mRFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒感染细胞,结果显示,在β_1-AA作用6 h后,自噬小体与自噬溶酶体的含量均出现明显降低,提示自噬流降低,且持续至24 h;(4)自噬降低参与β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加:TUNEL染色结果表明,利用Rapa对大鼠进行腹腔注射预处理上调心肌组织自噬水平后,可部分缓解β_1-AA主动免疫诱导的大鼠心肌组织凋亡增加,利用Rapa预处理H9c2心肌细胞同样可部分缓解β_1-AA引起的细胞凋亡增加,而3MA则进一步诱导心肌细胞凋亡增加。结论:自噬降低参与β_1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加。第二部分内质网应激参与β1-AA诱导的心肌细胞自噬降低研究目的:检测β1-AA长期存在时心肌组织及H9c2心肌细胞内质网应激变化规律及其在自噬降低中的作用。研究方法:(1)Real-time PCR检测主免大鼠心肌组织及β1-AA作用于H9c2心肌细胞后内质网应激相关基因GRP78,CHOP及Caspase-12的m RNA水平变化;(2)Western blot检测主免大鼠心肌组织及β1-AA作用于H9c2心肌细胞后内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP及Caspase-12的蛋白水平变化;(3)免疫组化检测主免大鼠心肌组织及β1-AA作用于H9c2心肌细胞后内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP及Caspase-12蛋白原位表达情况;(4)Real-time PCR,Western blot及m RFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒检测4-PBA预处理后H9c2心肌细胞自噬水平变化。研究结果:(1)β1-AA主动免疫大鼠心肌组织内质网应激显着激活:Real-time PCR,Western blot及免疫组化结果表明主动免疫2周后,大鼠心肌组织GRP78的m RNA及蛋白水平均明显增加,CHOP及Caspase-12则于主免4周后显着上调,随着主动免疫时间的延长,心肌组织内质网应激持续激活;(2)β1-AA诱导H9c2心肌细胞内质网应激明显激活:Real-time PCR,Western blot及免疫组化结果均表明β1-AA作用6 h后心肌细胞内质网应激即被明显激活,且随着β1-AA作用时间的延长,内质网应激被持续激活,并持续至24 h;(3)内质网应激参与β1-AA诱导的H9c2心肌细胞自噬降低:Real-time PCR,Western blot及m RFP-GFP-LC3腺病毒结果均表明,利用4-PBA抑制心肌细胞内质网应激,可引起细胞Beclin1及LC3表达显着增加,p62含量明显降低,且自噬流明显上调。结论:内质网应激激活参与β1-AA诱导的心肌细胞自噬降低。第叁部分β1-AA诱导的自噬降低激活心肌细胞内质网应激研究目的:探讨β1-AA诱导的自噬降低是否激活心肌细胞内质网应激,明确内质网应激与自噬的交互作用在β1-AA诱导的心肌细胞凋亡中的影响。研究方法:(1)Western blot检测对照组,β1-AA组(24 h),3MA+β1-AA组,Rapa+β1-AA组H9c2心肌细胞自噬相关蛋白Beclin1,LC3,p62以及内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP,Caspase-12的蛋白表达变化;(2)4-PBA抑制心肌细胞内质网应激,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测β1-AA作用下心肌细胞凋亡率变化;(3)4-PBA抑制心肌细胞内质网应激,采用CCK-8法检测β1-AA作用下心肌细胞存活率变化;(4)Real-time PCR检测对照组,β1-AA组,4-PBA预处理组,Rapa预处理组及4-PBA+Rapa预处理组H9c2心肌细胞自噬相关基因Beclin1及LC3的m RNA含量变化;(5)Western blot检测对照组,β1-AA组(12 h),4-PBA预处理组,Rapa预处理组及4-PBA+Rapa预处理组H9c2心肌细胞自噬相关蛋白Beclin1,LC3及p62蛋白表达变化;(6)m RFP-GFP-LC3自噬双标腺病毒检测对照组,β1-AA组(12 h),4-PBA预处理组,Rapa预处理组及4-PBA+Rapa预处理组自噬流变化;(7)Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术及Caspase-3活性检测法检测对照组,β1-AA组(12 h),4-PBA预处理组,Rapa预处理组及4-PBA+Rapa预处理组H9c2心肌细胞凋亡率变化。研究结果:(1)β1-AA诱导的自噬降低激活心肌细胞内质网应激:与β1-AA组相比,利用3MA抑制心肌细胞自噬可进一步上调GRP78,CHOP及Caspase-12蛋白表达,利用Rapa上调心肌细胞自噬水平则可明显缓解β1-AA诱导的内质网应激激活;(2)抑制内质网应激可部分缓解β1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加及存活率降低:流式细胞术及CCK-8结果表明,采用4-PBA抑制心肌细胞内质网应激可明显缓解β1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加及存活率降低,但不能完全缓解;(3)4-PBA及Rapa联合处理可进一步上调心肌细胞自噬水平:Real-time PCR,Western blot及自噬双标腺病毒结果均表明,与4-PBA及Rapa单独预处理组相比,4-PBA+Rapa联合预处理可进一步引起Beclin1,LC3蛋白及自噬流水平增加,p62表达降低;(4)4-PBA及Rapa联合处理可进一步缓解β1-AA诱导的心肌细胞凋亡:流式细胞术及Caspase-3活性检测结果均表明,单独采用4-PBA抑制内质网应激或Rapa上调细胞自噬均仅可部分缓解β1-AA诱导的细胞凋亡增加,与4-PBA及Rapa单独预处理组相比,4-PBA+Rapa联合预处理可进一步缓解β1-AA诱导的心肌细胞凋亡增加,且于β1-AA作用12 h时最为明显。结论:β1-AA诱导的自噬降低激活心肌细胞内质网应激。(本文来源于《山西医科大学》期刊2019-04-20）
楚亚萍,屠春林,崔玉娟,马西栋[7]（2019）在《高血压伴OSAHS患者血AT1受体自身抗体水平与呼吸暂停低通气指数的关系》一文中研究指出目的 :探讨高血压伴阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者抗血管紧张素1受体(AT1)自身抗体水平与呼吸暂停低通气指数(AHI)的关系。方法 :选取2014年6月～2016年5月我院收治的高血压伴OSAHS患者200例为研究对象,纳入研究组,以同期确诊的单纯OSAHS患者100例对对照组,对比两组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、AHI等基线资料,比较轻、中、重度OSAHS患者SBP、DBP水平,分析高血压伴OSAHS患者SBP、DBP与AHI的相关性,同时对比两组血浆AT1自身抗体、内皮素(ET-1)、内源性一氧化氮(NO)水平,分析AT1自身抗体与SBP、DBP、AHI、ET-1、NO的相关性。结果 :研究组体质指数、颈围、腰围、SBP(142.24±1.33)mm Hg、DBP(92.10±0.77)mm Hg、AHI(25.15±1.28)次/min均较单纯SAHS组高;随病病情程度加重,研究组SBP、DBP均显着增加,且研究组SBP、DBP显着高于对照组;高血压伴OSAHS患者SBP、DBP与AHI呈正相关;研究组AT1自身抗体(42.34±1.87)%、ET-1(53.82±2.16)pg/m L较对照组高,研究组NO水平(42.18±3.18)μmol/L与对照组比较明显较低;相关分析显示AT1自身抗体抗体水平与SBP、DBP、AHI、ET-1呈正相关,而与NO水平呈负相关。结论 :高血压伴OSAHS患者血AT1受体自身抗体水平与AHI及ET-1、NO均呈正相关性,AT1参与的肾素-血管紧张素系统可能参与OSAHS合并高血压的病变过程。(本文来源于《湖南师范大学学报(医学版)》期刊2019年02期）
边经纬,尹晓辰,李浩,张苏丽,王美丽[8]（2019）在《血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体阳性雌鼠孕后出现妊娠期高血压样症状》一文中研究指出目的探究血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(angiotensinⅡtype 1 receptor autoantibody,AT1-AA)阳性大鼠孕后是否出现类妊娠期高血压疾病的表现。方法收集临床血清样品,通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测非妊娠的健康女性体内是否含有AT1-AA。通过主动免疫方法建立AT1-AA阳性大鼠模型,利用尾套法测量大鼠收缩压,肠系膜动脉血管环检测血管功能。结果 8. 3%未妊娠的健康女性体内含有AT1-AA。AT1-AA阳性大鼠怀孕前与对照组大鼠的血压比较,差异无统计学意义(P>0. 05);但怀孕后AT1-AA阳性大鼠的收缩压较对照组孕鼠显着升高。肠系膜动脉血管环实验结果显示,AT1-AA阳性大鼠怀孕后血管对收缩物质的反应性增强(对照组:110%±5%,模型组:130%±10%,P <0. 05),且内皮依赖/非依赖血管舒张功能降低(对照组:90%±4%,模型组:60%±7%/对照组:95%±1%,模型组:75%±3%,P <0. 05)。结论AT1-AA阳性大鼠妊娠期间出现血压升高,阻力血管功能受损等类妊娠期高血压的病理表现,提示健康人体内存在的AT1-AA是妊娠期高血压疾病发生的潜在危险因素。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2019年02期）
邵梦娇[9]（2019）在《β1肾上腺素能受体自身抗体表达增强对心房颤动心房重构的影响及机制研究》一文中研究指出目的:探讨β1肾上腺素能受体自身抗体(β1AAR)表达增强对心房重构的影响及其机制研究。方法:24只新西兰大白兔随机分为对照组(Con组)和β1AAR组。β1AAR组给予2mgβ1受体细胞外第二环功能表位肽段与佐剂背部皮下多点注射,对照组给予佐剂背部皮下多点注射。每2周注射1次,共4次。于0周、2周、4周、6周于采耳缘静脉血,离心取血清通过酶联免疫吸附测定血清中抗体效价,验证造模是否成功。每只兔在免疫前的基础状态和每2周抽血前行心率变异性监测。每只兔子在免疫前后,采用S_1S_2递减刺激测量心房有效不应期(AERP),通过Burst刺激测量房颤诱发率和持续时间。采用多导电信号记录仪(MEA)采集心房电信号的传导图,通过相邻电极间的传导速度的不同反映心房肌电传导的不均匀一致性;免疫结束后取心房肌组织进行蛋白免疫印记法检测各组内离子通道蛋白、缝隙连接蛋白和纤维化因子相关蛋白的总量的表达变化,逆转录聚合酶链反应分析上述指标各组内mRNA的表达变化。实验结束后取心房肌组织用于做HE染色和Masson染色以观察心房肌的病理学特征。结果:(1)各时间点血清中β1AAR效价:与基线相比,β1AAR组内在2周、4周、和6周血清中β1AAR水平在各时间点增加(P<0.05),而Con组内各个时间点血清中β1AAR水平无差异(P>0.05);与Con组相比,除0周两组比较无差异外,其余β1AAR组血清中β1AAR水平显着升高(P<0.05)。各时间点血清中环磷酸腺苷(cAMP)含量:与基线相比,β1AAR组内在2周、4周、和6周血清中cAMP水平在各时间点增加(P<0.05),而Con组内各个时间点清中β1AAR水平无差异(P>0.05);与Con组相比,除0周两组比较无差异外,其余β1AAR组水平显着升高(P<0.05)。组织中β1AAR的含量,与Con组相比,免疫后β1AAR组中左房心肌中β1AR含量增高(P<0.05);以上均可证明模型建立成功。(2)各时间点心率变异性的变化:与基线相比,β1AAR组内在2周、4周、和6周低频(LF)、高频(HF)和LF/HF在各时间点增加(P<0.05),而Con组内各个时间点无差异(P>0.05);与Con组相比,除0周两组比较无差异外,其余β1AAR组都显着升高(P<0.05)。与基线相比,β1AAR组内在2周、4周、和6周SDNN在各时间点降低(P<0.05),而Con组内各个时间点无差异(P>0.05);与Con组相比,除0周两组比较无差异外,其余β1AAR组都显着降低(P<0.05)。(3)与基线相比,在免疫后的β1AAR组内均出现AERP缩短(P<0.05)和平均心率增快(P<0.05);与Con组相比,在免疫后的β1AAR组均出现AERP缩短(P<0.05)和平均心率增快(P<0.05)。Brust刺激后:与基线相比,β1AAR组内房颤诱发率增加(P<0.05)及持续时间延长(P<0.05),Brust刺激后基本可稳定诱发AF;与Con组相比,β1AAR组AF诱发率显着增加(P<0.05)及持续时间延长(P<0.05);自发:与基线相比,β1AAR组内房颤发生率增加(P<0.05)及持续时间延长(P<0.05);与Con组相比,β1AAR组AF诱发率显着增加(P<0.05)及持续时间延长(P<0.05);(4)离子通道及缝隙连接蛋白:与Con组相比,β1AAR组缝隙连接蛋白43(Cx43)、Cav1.2、Kir4.3及Nav1.5蛋白水平及mRNA水平降低(P<0.05)。Kir3.1、Kir3.4、KvLQT1/mink及Cx40蛋白水平及mRNA含量升高(P<0.05)。纤维蛋白相关因子:与Con组相比,β1AAR组Samd7蛋白水平及mRNA水平降低(P<0.05)。Collagen I,Collagen III,Samd及Samd3蛋白水平及mRNA含量升高(P<0.05)。结论:β1AAR表达增强能缩短AERP,增加心房颤动的易感性和持续时间,通过离子通道重构和加重心房纤维化来促进心房重构,从而促进房颤的发生和维持。(本文来源于《新疆医科大学》期刊2019-03-01）
刘金萍[10]（2019）在《围产期心肌病与心血管受体β_1-受体和M_2-受体自身抗体的相关性研究》一文中研究指出目的:研究围产期心肌病与心血管受体β_1-受体和M_2-受体自身抗体的相关性。方法:选取2016年1月～2017年1月我院收治的42例围产期心肌病妊娠患者作为观察组,选取同期来我院进行产检的42例正常妊娠孕妇作为对照组,两组均进行心血管受体β_1-受体和M_2-受体自身抗体检测。结果:观察组的β_1-受体和M_2-受体自身抗体平均滴度和抗体阳性率均明显高于对照组,差异均有统计学意义,P<0.05;经Spearman相关检验分析,β_1-受体和M_2-受体自身抗体的相关系数为0.893,P<0.05;β_1-受体和M_2-受体自身抗体滴度和阳性率与左室舒张末期内径、左室收缩末期内径和心功能等指标均呈正相关,与左室射血分数和左室缩短分数呈负相关。结论:围产期心肌病患者的β_1-受体和M_2-受体自身抗体平均滴度和抗体阳性率较高,β_1-受体和M_2-受体的滴度和阳性率与左室舒张末期内径、左室收缩末期内径和心功能等指标均呈正相关,与左室射血分数和左室缩短分数呈负相关。(本文来源于《实用中西医结合临床》期刊2019年02期）
受体自身抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)已经成为一种越来越常见的疾病,发病率和致死率逐年升高,且发病者越来越趋于年轻化。随着糖尿病病情发展,会导致心脏,血管等多器官功能受损。遏制胰岛β细胞的损伤是治疗糖尿病的关键,因此减少某些病理原因(如炎症、应激)导致的胰岛细胞凋亡,对于预防糖尿病的发生发展至关重要。血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体(angiotensin Ⅱ type1 receptor autoantibodies,AT1-AA)首先在先兆子痫患者血清中发现。本课题组前期研究已证实AT1-AA可以与胰岛β细胞上AT1R结合,促进胰岛β细胞凋亡,但具体机制不清。有研究报道,慢性炎症与2型糖尿病胰岛β细胞损伤有关,尤其炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)与2型糖尿病胰岛损伤关系更为密切。已有研究证实IL-1β活化的机制通路复杂,其中NLRP3炎性小体的激活对IL-1β的活化最为重要。激活的NLRP3炎性小体会促使Pro-IL-1β切割成熟,形成有活性的IL-1β而发挥作用。NLRP3炎性小体的激活可通过叁条通路实现,包括活化氧(ROS),钾外流以及溶酶体破坏。硫氧还蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)是一种内源性的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)结合抑制蛋白,可以阻断TRX的抗自由基和抗凋亡功能而诱导细胞凋亡。已有研究证明AT1-AA具有促进炎症作用。那么,AT1-AA是否可以通过促进炎症发生进而促进胰岛β细胞损伤?因此本研究的主要目的是观察AT1-AA是否可以通过增加TXNIP表达,激活NLRP3炎性小体,导致IL-1β分泌增多,进而诱导胰岛β细胞损伤。目的:1.建立AT1-AA阳性大鼠模型,观察大鼠胰岛形态及功能以及TXNIP、NLRP3炎性小体、IL-1β变化。2.证实TXNIP-NLRP3-IL-1β信号通路在AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤中的作用。方法:1.AT1-AA阳性大鼠建模:用生物合成的AT1R-ECⅡ抗原肽段主动免疫实验组大鼠,用免疫佐剂与生理盐水制成的混合液免疫对照组大鼠。2.免疫组织化学染色法观察TXNIP、NLRP3炎性小体、IL-1β等蛋白的表达水平。3.CCK-8试剂盒检测细胞存活率。4.流式细胞术检测细胞凋亡水平。5.ELISA检测IL-1β分泌量。6.Western blot检测TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase1、Cleaved Caspase3/Caspase3蛋白的表达水平7.Real time PCR检测TXNIP m RNA的表达水平。结果:1.成功建立AT1-AA主动免疫大鼠模型检测大鼠血清抗体滴度的结果显示,随着免疫时间延长,与对照组相比,免疫大鼠抗体滴度升高,在第4周时升高较明显(P<0.01),到第8周时,抗体滴度达高峰(P<0.01),模型建造成功(图1)。2.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织结构和功能受损图2A结果显示,前4周免疫组大鼠体重与对照组大鼠体重无明显差异,第10周开始,免疫组大鼠体重开始降低,且在16周时体重出现明显降低(P<0.05)(图2A)。空腹血糖检测结果显示,从第8周开始到第16周,免疫组大鼠空腹血糖明显高于同期对照组(P<0.05)(图2B)。葡萄糖耐量试验结果显示,给予对照大鼠葡萄糖灌胃,2h后血糖值降至正常水平;12周及16周的免疫大鼠在灌胃2h后血糖值仍明显高于正常水平(P<0.05)(图2C)。胰岛素耐量试验结果显示,给予对照大鼠腹腔注射胰岛素,30min时血糖迅速下降,至2h时血糖恢复至正常水平;12周及16周的免疫大鼠注射胰岛素,30min大鼠血糖无明显变化(P<0.05)(图2D)。随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织HE染色结果显示,胰岛组织结构紊乱严重(图2E)。以上结果提示,AT1-AA长期存在可以导致胰岛结构及功能受损。3.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛细胞凋亡增加TUNEL染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织细胞核变大,棕黄色颗粒增多(图3A)。Western blot结果显示,免疫大鼠胰岛组织Cleaved Caspase3/Caspase3比值相比于对照组明显升高(P<0.05)(图3B)。结果提示,AT1-AA长期存在可以导致胰岛组织凋亡增加。4.AT1-AA主动免疫大鼠血清中IL-1β分泌量增高免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫大鼠胰岛组织中代表IL-1β的棕色颗粒增多,颜色加深(图4 A)。ELISA检测IL-1β分泌结果显示,随着免疫时间延长,免疫大鼠血清中IL-1β的分泌量不断增加(P<0.05)(图4B)。5.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织NLRP3炎性小体激活免疫组化染色结果显示,与对照组相比,随着免疫时间延长,免疫组大鼠胰岛组织棕黄色颗粒增多(图5A)。Western blot结果显示,免疫组大鼠胰岛组织NLRP3、ASC、Caspase1 p10蛋白表达随着免疫时间的延长均逐渐升高(P<0.01)(图5B)。6.AT1-AA主动免疫大鼠胰岛组织TXNIP表达增高免疫组化染色结果显示,与对照组相比,免疫大鼠胰岛组织棕黄色颗粒增多,着色加深(图6A)。Western blot结果显示,免疫大鼠胰岛组织TXNIP蛋白表达水平随着免疫时间的延长不断增高(P<0.05)(图6B)。7.AT1-AA呈浓度及时间依赖性降低INS-1细胞的存活率CCK-8结果显示,与Negative-Ig G组相比,INS-1细胞存活率随AT1-AA浓度的增大而降低(P<0.05)(图7A)。与Negative-Ig G组相比,在AT1-AA作用24 h时细胞的存活率明显下降(P<0.01)(图7B)。8.AT1-AA明显增高INS-1细胞凋亡水平流式细胞技术结果显示,与Negative-Ig G组比较,AT1-AA实验组细胞凋亡率明显增加(P<0.01)(图8A)。Western blot结果显示,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA实验组Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显升高(P<0.01)(图8B)。9.AT1-AA可以促进INS-1细胞IL-1β的分泌ELISA实验结果显示,与Negative-Ig G组相比,AT1-AA可以使细胞IL-1β的分泌量明显增加(P<0.01)(图9)。10.NLRP3炎性小体-IL-1β参与了AT1-AA诱导的INS-1细胞凋亡Western blot结果显示,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达水平均升高(P<0.05)(图10A)。使用NLRP3炎性小体的抑制剂MCC950孵育INS-1细胞,Western blot结果显示,与AT1-AA组相比,AT1-AA+MCC950组INS-1细胞Cleaved Caspase3/Caspase3比值下降(P<0.05)(图10B);IL-1β分泌量降低(P<0.05)(图10C)。11.TXNIP-NLRP3炎性小体-IL-1β参与了AT1-AA诱导INS-1细胞的凋亡采用Real-time PCR与Western blot检测TXNIP的表达量,与Negative-Ig G对照组相比,AT1-AA组TXNIP m RNA(P<0.01)和蛋白表达水平(P<0.01)均显着升高(图11A)。使用慢病毒包被的TXNIP sh RNA感染INS-1细胞,结果显示,与Scramble sh RNA组相比,TXNIP sh RNA组TXNIP m RNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)均显着下降(图11B),提示TXNIP干扰模型建立成功。与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显增高(P<0.01);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组细胞凋亡率和Cleaved Caspase3/Caspase3比值明显降低(P<0.01)(图11C),结果提示TXNIP参与了AT1-AA诱导的INS-1β细胞的凋亡。ELISA结果显示,与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组IL-1β分泌量明显增高(P<0.05);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组IL-1β分泌量显著下降(P<0.05)(图11D)。Western blot结果显示,与Scramble sh RNA组相比,Scramble sh RNA+AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达明显增高(P<0.05);与Scramble sh RNA+AT1-AA组相比,TXNIP sh RNA+AT1-AA组NLRP3炎性小体各蛋白表达均下降(P<0.05)(图11E)。以上结果提示TXNIP参与了NLRP3炎性小体的激活以及IL-1β水平的升高。12.替米沙坦(telmisartan,TM)可通过抑制TXNIP-NLRP3炎性小体-IL-1β减轻AT1-AA诱导INS-1细胞凋亡Western blot结果显示,与AT1-AA组相比,AT1-AA+TM组Cleaved Caspase3/Caspase3比值降低(P<0.05)(图12A);IL-1β分泌量减少(P<0.05)(图12B);NLRP3炎性小体的蛋白表达水平降低(P<0.05)(图12C);TXNIP蛋白表达也降低(P<0.05)(图12D)。结论:1.AT1-AA长期存在可导致大鼠胰岛结构受损、功能紊乱,同时可促进胰岛组织TXNIP、NLRP3炎性小体以及IL-1β水平升高;2.TXNIP-NLRP3-IL-1β通路参与了AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤;3.ARB通过抑制TXNIP-NLRP3-IL-1β通路改善AT1-AA诱导的胰岛β细胞损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
受体自身抗体论文参考文献
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标签：血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体; 硫氧还蛋白相互作用蛋白; INS-1细胞; 凋亡;